潘永康

[摘要]目的：分析溶血對(duì)采取電化學(xué)發(fā)光微粒免疫法測(cè)定胰島素、C肽結(jié)果的影響。方法：選取81例糖尿病患者為研究對(duì)象，在空腹?fàn)顟B(tài)下采集血液，之后在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）后0.5.h、1.h、2.h、3.h采集血清，之后進(jìn)行標(biāo)本溶血，對(duì)不同標(biāo)本進(jìn)行血清胰島素、C肽的測(cè)定，比較檢測(cè)結(jié)果的差異。結(jié)果：溶血前胰島素與C肽的檢測(cè)結(jié)果分別為（36.11±2.25）μU/mL、（6.51±0.51）ng/mL，溶血后分別為（30.14±2.35）μU/mL、（5.88±0.48）ng/mL，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同時(shí)間段標(biāo)本血清胰島素與C肽水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;胰島素的濃度同標(biāo)本溶血以及放置時(shí)間呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論：采取電化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)定糖尿病患者的胰島素與C肽水平，若是標(biāo)本發(fā)生溶血可引起檢測(cè)結(jié)果的降低。

[關(guān)鍵詞]溶血;電化學(xué)發(fā)光微粒免疫法;胰島素;C肽

[中圖分類號(hào)]R446.6.R587.1.

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A.

[文章編號(hào)]2096-5249（2022）03-0157-03

糖尿病是一種常見的慢性代謝性疾病，發(fā)病原因主要為機(jī)體胰島素分泌不足或相對(duì)不足，胰島素作用缺陷導(dǎo)致以高血糖為典型特征的代謝性疾病，若機(jī)體長時(shí)間處在高血糖狀態(tài)容易引起多臟器功能損傷或者衰竭，因此對(duì)疾病盡早診斷及合理治療有非常重要的意義[1]。研究顯示胰島素與C肽釋放試驗(yàn)、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT）對(duì)診斷糖尿病有一定價(jià)值。其中胰島素與C肽釋放試驗(yàn)，常需要在不同的時(shí)間點(diǎn)采集血液，根據(jù)采集情況對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行綜合分析，而為了確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要保證任意時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確無誤，確保判定結(jié)果的科學(xué)性及合理性[2]。而日常進(jìn)行血生化檢驗(yàn)工作中，存在諸多對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響因素，其中最常見的一種影響因素是溶血。標(biāo)本溶血可導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂，造成多項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性差異改變，繼而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。在研究分析溶血對(duì)電化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)定胰島素、C肽結(jié)果的影響，報(bào)道如下。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取2020年1月至2021年3月在本院接受胰島素與C肽釋放試驗(yàn)檢測(cè)的81例糖尿病患者為研究對(duì)象。男性50例，女性31例;年齡33～85（54.12±2.16）歲。

（2017年版）》[4]糖尿病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);（2）病例資料完整，精神意識(shí)良好，具備正常溝通交流能力。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重肝腎功能損傷患者;（2）合并惡性腫瘤疾病患者;（3）精神疾病或者認(rèn)知功能障礙患者;（4）依從性差患者。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑

羅氏Cobase601型全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀;胰島素與C肽檢測(cè)試劑盒，上海羅氏制藥有限公司;真空采血管、一次性采血針，廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司;離心機(jī)，北京白洋醫(yī)療器械有限公司。

1.2.2研究方法

在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，采集患者的肘靜脈血液4mL到真空采血管，將這一時(shí)間點(diǎn)作為0h。進(jìn)行OGTT試驗(yàn)，主要是飲用250mL含75g葡萄糖，在飲用后1h、0.5h、2h、3h均采集4mL的血液。將試管放在常溫下15min，血液完全凝固后置入到離心機(jī)中，以3500r/min的速度離心5min，離心后的血清呈現(xiàn)淡黃色，肉眼未見溶血、黃疸及脂濁。每一例患者采集的五管血在集齊后同時(shí)上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。完成標(biāo)本的測(cè)定后，即刻應(yīng)用吸管吹打攪拌紅細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)人為溶血處理，然后將溶血的標(biāo)本置入離心機(jī)中，以3500r/min的速度持續(xù)離心5min，觀察溶血標(biāo)本的離心血清呈現(xiàn)為納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均符合《中國2型糖尿病防治指南淡紅色，將標(biāo)本即刻上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。81例患者的血液標(biāo)本在溶血前后應(yīng)用羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與配套試劑盒檢測(cè)胰島素與C肽，控制檢測(cè)室內(nèi)環(huán)境的溫濕度適宜，使得測(cè)定結(jié)果滿意。

為了避免標(biāo)本質(zhì)量對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響，肘靜脈血液采集主要參照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。（1）標(biāo)本采集前準(zhǔn)備。要求采血者需禁食12h，但是不能過度空腹，前一天晚上6～8點(diǎn)可正常進(jìn)食，但注意避免飲酒及過量使用糖分及脂肪含量高的食物。準(zhǔn)備好采血需要用到的器械，包括一次性注射器、一次性塑料試管、壓脈帶、真空采血管、碘伏、無菌棉簽、抗凝管。（2）標(biāo)本采集操作。仔細(xì)核對(duì)檢驗(yàn)申請(qǐng)單、受檢者的姓名，為受檢者講解操作目的以取得患者的配合，將標(biāo)簽貼在采血管上;選擇受檢者適合的血管，通?？蛇x擇肘窩靜脈、肘正中靜脈、前臂內(nèi)側(cè)靜脈，穿刺部位肢體下可墊一次性墊巾以及壓脈帶;應(yīng)用復(fù)合碘棉前對(duì)穿刺部位消毒處理，于靜脈穿刺上4～7cm部位綁扎壓脈帶，指導(dǎo)受檢者握緊拳頭，充分顯露靜脈充盈情況;操作者采取真空采血方式，將靜脈穿刺針上保護(hù)套摘掉予以靜脈穿刺操作，成功穿刺后應(yīng)用貼好的標(biāo)簽負(fù)壓真空采集管采血，松開壓脈帶后囑咐患者松拳，用棉簽壓住進(jìn)針部位并拔出針頭。（3）標(biāo)本采集后處理。采血完成后囑咐患者應(yīng)棉墊壓瘡穿刺部位，觀察幾分鐘若是無不適可自行離開。

1.3觀察指標(biāo)

比較標(biāo)本溶血前后的胰島素與C肽檢測(cè)結(jié)果。對(duì)0h、0.5h、1h、2h、3h的標(biāo)本測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。對(duì)溶血或者時(shí)間因素干擾測(cè)定結(jié)果的情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，主要根據(jù)下面的共識(shí)評(píng)價(jià)溶血或者時(shí)間因素對(duì)于測(cè)定結(jié)果的影響：|F|=（X-X0）/X0。上式中的|F|表示溶血或者時(shí)間因素引起的誤差;X表示溶血標(biāo)本或者放置一定時(shí)間待測(cè)物的濃度;X0為非溶血血清待測(cè)物濃度。如果|F|>0.10主要是表示溶血干擾客觀存在，而如果|F|<0.10則是表示溶血受輕微干擾，基本可以忽略不計(jì)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS21.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析。計(jì)量資料用（x±s）表示，使用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，使用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1溶血前后標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

采集的血液標(biāo)本，在標(biāo)本發(fā)生溶血后，可見血清胰島素與C肽檢測(cè)結(jié)果降低，溶血前后檢測(cè)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同時(shí)間采集的未溶血標(biāo)本，血清胰島素與C肽的檢測(cè)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3不同時(shí)間段不同溶血標(biāo)本胰島濃度

分析溶血程度與時(shí)間段的關(guān)系，顯示標(biāo)本溶血會(huì)讓胰島素濃度降低，溶血程度越大、標(biāo)本放置時(shí)間越長，胰島素濃度降低情況也更佳明顯，胰島素濃度測(cè)定同標(biāo)本溶血程度、標(biāo)本放置時(shí)間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，見表3。

3討論

胰島素是一種多肽類物質(zhì)，主要是在胰島β細(xì)胞中合成，分子量為5700，由兩條氨基酸肽鏈組成，胰島素是引起糖尿病的直接因子，主要是胰島素功能障礙可造成疾病發(fā)生及持續(xù)進(jìn)展。胰島素能直接或者間接的影響機(jī)體每個(gè)組織的功能，在糖代謝中的作用多種多樣，包括抑制糖原分解以及糖異生，增加葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪和肌肉，增強(qiáng)脂肪以及肌肉中糖酵解并且刺激糖原的合成;胰島素能明顯增強(qiáng)脂肪、肌肉以及肝臟等組織部位糖原合酶活性水平，通過增強(qiáng)湯酵解通路使得骨骼肌與脂肪組織中糖酵解速率提高[6]。此外胰島素也可以促進(jìn)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)肝細(xì)胞、骨骼肌以及成纖維細(xì)胞，明顯增加核糖體數(shù)量以及翻譯效益，抑制蛋白質(zhì)的分解[7]。C肽則是胰島素β細(xì)胞的分泌產(chǎn)物，同胰島素一樣存在共同前體胰島素原。胰島素前體可分解同等摩爾量的胰島素、C肽，測(cè)定C肽可以評(píng)估胰島β細(xì)胞的活性[8]。在胰島素與C肽的特征上，胰島素40%～50%是由肝臟滅活，半衰期大約是5min，對(duì)于C肽則不經(jīng)過肝臟攝取但是卻經(jīng)肝臟清除，C肽的半衰期在30min以上，同時(shí)在波動(dòng)幅度上更，因此在一些特殊的情況下，檢測(cè)C肽更具有優(yōu)勢(shì)。

胰島素與C肽的檢測(cè)對(duì)于評(píng)估糖尿病及判定療效有一定的價(jià)值。對(duì)胰島素、C肽的測(cè)定，主要是采取聯(lián)合釋放試驗(yàn)，而在實(shí)際的檢測(cè)工作上發(fā)現(xiàn)，實(shí)際的測(cè)定過程中常容易出現(xiàn)溶血的情況[9]。在胰島素與C肽的試劑盒中就標(biāo)明，若是標(biāo)本存在溶血不能測(cè)定，需要重新進(jìn)行標(biāo)本的采集;放射免疫分析的方式報(bào)告時(shí)間長并且結(jié)果不穩(wěn)定，并且還經(jīng)常存在同位素污染的問題，這一檢測(cè)方式也趨于淘汰;酶聯(lián)免疫分析的方式雖然可以充分克服放射免疫分析中放射性污染的弊端，在使用的檢測(cè)設(shè)備上簡(jiǎn)單以及操作安全，但是這種方式卻依賴比色法以及偏振光法測(cè)定技術(shù)，存在的缺陷如光度測(cè)定范圍廣、靈敏度低、容易遺漏等，這樣使得測(cè)定的方式在應(yīng)用上受限[10]。電化學(xué)發(fā)光微粒免疫法則具有靈敏度高及特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)應(yīng)用的試劑也具備良好穩(wěn)定性，測(cè)定的范圍寬，儀器可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，不會(huì)污染環(huán)境還可以消除常規(guī)熒光測(cè)定高背景的優(yōu)點(diǎn)，屬于非放射免疫分析中的優(yōu)勢(shì)測(cè)定方式[11]。本研究結(jié)果顯示，在應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光微粒免疫法測(cè)定糖尿病患者的胰島素與C肽上，溶血后在血清胰島素與C肽的檢測(cè)水平上明顯低于溶血前，而空腹及OGTT不同時(shí)間采集的血液標(biāo)本，在胰島素與C肽的檢測(cè)結(jié)果上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;根據(jù)溶血對(duì)檢測(cè)胰島素的影響，顯示溶血程度提供胰島素的測(cè)定值呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。這一結(jié)果表明溶血可造成胰島素與C肽測(cè)定結(jié)果偏低情況。分析原因主要是在標(biāo)本出現(xiàn)溶血后，紅細(xì)胞膜破裂時(shí)胰島素降解酶釋放到血清中，高效的分解胰島素，隨著溶血程度的增加胰島素的檢測(cè)濃度也不斷降低[12]。而對(duì)于C肽而言，溶血對(duì)其水平的影響相關(guān)研究報(bào)道的結(jié)果不一，這主要同檢測(cè)方式、檢測(cè)儀器以及檢測(cè)試劑等因素相關(guān)。

考慮到標(biāo)本溶血對(duì)胰島素與C肽測(cè)定結(jié)果的不良影響，應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)室獲得合格的標(biāo)本，便于及時(shí)、正確及有效的得出測(cè)定結(jié)果。首先是需要控制好標(biāo)本采集的工作，按照規(guī)范進(jìn)行采集，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)標(biāo)本管理人員的培訓(xùn)，具體培訓(xùn)包括標(biāo)本采集、標(biāo)本處理及標(biāo)本運(yùn)送等，結(jié)合實(shí)際情況建立起完整規(guī)范的標(biāo)本檢測(cè)前處理流程，提高標(biāo)本的合格率，對(duì)于出現(xiàn)溶血的標(biāo)本應(yīng)建立退回制度。實(shí)際中對(duì)于出現(xiàn)靜脈條件差、多次靜脈穿刺等引起的標(biāo)本溶血情況，需要對(duì)患者進(jìn)行解釋，告知采血困難的基本情況，避免患者出現(xiàn)恐懼以及不配合的情況，順利的完成血液標(biāo)本的采集。此外還需要正確分析溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，按照檢測(cè)的規(guī)范要求進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定，將測(cè)定的結(jié)果記錄下來。單個(gè)分析研究結(jié)果，在肉眼下可見標(biāo)本溶血引起胰島素與C肽降低的情況，其中溶血對(duì)胰島素的測(cè)定結(jié)果影響更加明顯，這樣影響醫(yī)師的判斷。

綜上所述，標(biāo)本溶血會(huì)影響電化學(xué)發(fā)光微粒免疫法測(cè)定血清胰島素與C肽的結(jié)果，原因主要在于溶血后紅細(xì)胞內(nèi)降解酶存在，為避免對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，可考慮嘗試在真空采血管內(nèi)加胰島素酶抑制劑，以確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

[1]滿霞，鄭進(jìn)，徐洋.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)C肽的分析性能驗(yàn)證[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2020，27（1）：163-167.

[2]王柏麗，何秀梅.不同化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)性激素水平的結(jié)果分析[J].山西衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，29（5）：46-48.

[3]秦蔚.II型糖尿病診斷中化學(xué)發(fā)光法測(cè)定胰島素與C肽的應(yīng)用研究[J].醫(yī)學(xué)食療與健康，2020，18（3）：180，182.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國2型糖尿病防治指南（2017年版）[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2018，38（4）：292-344.

[5]Ma H ，Liu Y ，Zhao Y ，et al. Ultrasensitive immunoassay of insulin based on highly efficient electrochemiluminescence quenching of carboxyl-functionalized g-C 3 N 4 through coreactant dual-consumption by NiPd-DNAzyme[J]. Journal of Electroanalytical Chemistry，2018，4（15）：168-175.

[6]李勇，張妍，羅微，等.標(biāo)本溶血對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定胰島素、葉酸及鐵蛋白結(jié)果的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2019，16（11）：1480-1482.

[7]Buhler S ，Riciputi Y ，Perretti G ，et al. Characterization of DefattedProducts Obtained from theParmigiano–Reggiano Manufacturing Chain：Determination ofPeptides and Amino Acids Content and Study of the Digestibility and BioactiveProperties[J]. Foods，2020，9（3）：114.

[8]錢穎，董學(xué)君.溶血對(duì)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法檢測(cè)胰島素與C肽結(jié)果的影響[J].浙江臨床醫(yī)學(xué)，2019，21（8）：1135-1137.

[9]自學(xué)華.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2型糖尿病患者血清胰島素與C肽水平臨床價(jià)值評(píng)價(jià)[J].糖尿病新世界，2019，22（17）：58-59.

[10] Wang Q，Goetsch M.P021 An electrochemiluminescence （ECL） immunoassay for the detection of antidrug antibodies against anti-mucosal addressin cell adhesion molecule （MAdCAM） monoclonal antibody SHP647[J]. Journal of Crohn's and Colitis，2019，5（17）：103.

[11] Nazmy WH，Elbassuoni EA，Ali FF ，et al.Proinsulin C-peptide as an alternative or combined treatment with insulin for management of testicular dysfunction and fertility impairments in streptozotocin-induced type 1 diabetic male rats[J]. Journal of Cellular Physiology，2018，4 （15）：234.

[12]馮文聰，劉發(fā)全，程鵬.電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2型糖尿病患者胰島素與血清C肽水平的臨床診斷價(jià)值[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，40（3）：307-308.

（收稿日期：2021-09-19）