朱海鵬，胡 軍，姜 敏，蔡若南，王俊巧，李 莉

1.克拉瑪依市中心醫(yī)院血液腫瘤科，新疆 克拉瑪依 834000；2.克拉瑪依市中心醫(yī)院病理科，新疆 克拉瑪依 834000

肺腺癌是最常見的非小細胞肺癌類型，其特征是淋巴細胞浸潤密集，并且在早期容易發(fā)生轉移［1］。盡管近年來對于肺腺癌的治療策略已經(jīng)得到很大改善，但肺腺癌患者的生存率仍然很低［2］。因此，尋找新的治療靶點來改善肺腺癌的治療至關重要。高爾基體膜蛋白1（Golgi membrane protein 1，GOLM1），是一種Ⅱ型跨膜蛋白，其與腫瘤進展、轉移及免疫抑制相關［3］。據(jù)報道［4］，miR-27a通過靶向下調GOLM1的蛋白表達，抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲，并誘導其凋亡，從而抑制肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展，表明GOLM1在肺腺癌中發(fā)揮著癌基因的作用，但其具體作用機制尚不明確。最近研究［5］發(fā)現(xiàn)，抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信號轉導通路可抑制肺腺癌H1975細胞系的增殖、侵襲。但GOLM1能否通過調控PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路影響肺腺癌細胞增殖、侵襲和遷移鮮見報道。因此，本研究主要探討GOLM1對肺腺癌細胞增殖、侵襲和遷移的影響及其作用機制。

1 材料和方法

1.1 臨床樣本、細胞系及動物來源

收集2019年4月—2021年4月在克拉瑪依市中心醫(yī)院行手術切除，臨床病歷資料完整，病理學確診為肺腺癌的癌組織及相應癌旁組織標本各90例。男性47例，女性43例。年齡27～82歲，中位年齡60歲。吸煙31例，不吸煙59例。分化程度：中/低分化56例，高分化34例。有淋巴結轉移34例，無淋巴結轉移56例。臨床分期：Ⅰ/Ⅱ期59例，Ⅲ期31例。所有患者均簽署知情同意書。

人肺上皮細胞BEAS-2B及人肺腺癌H460、A549、PG49、H1299細胞均購自中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫，批號分別為CL-0496、CL-5013、CL-1067、CL-1915、CL-5008。

30只6～8周齡SPF級雄性BALB/c裸小鼠購自新疆醫(yī)科大學實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號為SCXK（新）2018-0002。

本研究所有實驗均得到克拉瑪依市中心醫(yī)院倫理委員會的批準。

1.2 主要試劑與儀器

GOLM1小干擾RNA（GOLM1small interfering RNA，si-GOLM1）及其陰性對照（si-NC）均購自廣州市銳博生物科技有限公司，批號為C17052-3、C19013-5；胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）購自上海西唐生物科技有限公司，批號為F20451；RIPA裂解緩沖液、細胞計數(shù)試劑盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）試劑盒均購自上海昆盟生物科技有限公司，批號為SF-19173、SG-20674、SF-40237；RPMI-1640培養(yǎng)基、LipofectamineTM2000轉染試劑盒、胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）均購自上海恒斐生物科技有限公司，批號為E-EL-P1607、E-EL-0021、E-EL-0097；兔抗人GOLM1、PI3K、磷酸化PI3K（phosphorylated-PI3K，p-PI3K）、AKT、磷酸化AKT（phosphorylated-AKT，p-AKT）、mTOR、磷酸化mTOR（phosphorylated-mTOR，p-mTOR）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗體、羊抗兔二抗均購自廣州易錦生物技術有限公司，批號為X0417、C0237、C0239、Z3429、Z3431、M0529、M0530、A10011、A10326；電化學發(fā)光（electrochemical luminescence，ECL）試劑盒購自蘇州新賽美生物科技有限公司，批號為WB2046；CO2培養(yǎng)箱購自上海天能科技有限公司，型號為240i；光學顯微鏡購自無錫邁特斯精密科技有限公司，型號XQZ-2；凝膠成像系統(tǒng)、酶標儀均購自上海嘉鵬科技有限公司，型號為ZF1-IIN、Nano-800。

1.3 免疫組織化學法檢測肺腺癌組織和癌旁組織中GOLM1的表達

取部分肺腺癌組織及其癌旁組織固定于4%的多聚甲醛溶液中，經(jīng)梯度乙醇脫水、石蠟包埋后，用切片機切成厚度為5 μm的切片，將組織切片通過二甲苯脫蠟和一系列分級乙醇溶液再水化后，再將切片置于3%過氧化氫中溫育20 min以阻斷內源性過氧化物酶活性，利用檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復，加入GOLM1兔抗人多克隆抗體（1∶500）在4 ℃下溫育過夜，第2天，將切片與羊抗兔二抗于室溫下溫育1 h，再加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素復合物溫育1 h，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后用蘇木精復染，脫水、透明并固定于普通光學顯微鏡下觀察GOLM1在肺腺癌組織中的表達情況。結果評定參照參考文獻［6］。染色程度：無染色記0分，淡黃色記1分，黃色記2分，棕黃色記3分；陽性細胞百分數(shù)：≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～100%為3分。兩者相加為最終評分標準，0分為陰性，1分及以上為陽性。

1.4 細胞培養(yǎng)及蛋白質印跡法（Western blot）檢測GOLM1的表達

將人肺上皮細胞BEAS-2B及人肺腺癌H460、A549、PG49、H1299細胞在RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基中補充有10%FBS，所有細胞均在37 ℃、CO2體積分數(shù)為5%的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取對數(shù)生長期的各細胞，使用RIPA裂解緩沖液提取細胞中的總蛋白，BCA試劑盒檢測總蛋白的濃度，然后凝膠電泳分離等量的蛋白質并轉移到聚偏氟乙烯膜上。將膜用5%脫脂牛奶封閉1 h，再將膜與兔抗人GOLM1（1∶500）、GAPDH（1∶1 000）一抗于4 ℃下溫育過夜，第2天，將膜與羊抗兔二抗（1∶2 000）在室溫下溫育1.5 h。使用ECL試劑盒可視化蛋白質，以GAPDH為內部對照，通過ImageJ軟件分析蛋白質的灰度值。

1.5 細胞分組及轉染

取對數(shù)生長期的肺腺癌A549細胞，隨機分為空白組（細胞未轉染）、si-NC組（細胞轉染si-NC）、si-GOLM1組（細胞轉染si-GOLM1）、IGF-1組［7］（10 μmol/L的PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路激活劑IGF-1處理30 min）和si-GOLM1＋IGF-1組（10 μmol/L的IGF-1處理30 min后再轉染si-GOLM1）。每組設置6個平行樣。

1.6 CCK-8法檢測肺腺癌A549細胞增殖

將各組肺腺癌A549細胞密度調整為1×104個/mL后，分別取200 μL細胞懸液加入到96孔板中，并在37 ℃下培養(yǎng)0、24和48 h。隨后，將10 μL CCK-8溶液加入到每個孔中。在37 ℃下溫育2 h后，使用酶標儀檢測450 nm波長處的吸光度（D）值。

1.7 劃痕實驗檢測肺腺癌A549細胞遷移

將各組肺腺癌A549細胞接種到6孔板中，并在37 ℃的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)過夜。當細胞達到100%匯合度時，使用10 μL移液器吸嘴在單層細胞中輕輕地線性劃痕，并用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate-buffered saline，PBS）洗滌細胞3次。將細胞在不含F(xiàn)BS的RPMI-1640培養(yǎng)基中于37 ℃下溫育24 h，使用相差顯微鏡分別在0、24 h時觀察細胞遷移情況并拍照，劃痕愈合率＝（0 h劃痕寬度-24 h劃痕寬度）/0 h劃痕寬度×100%。

1.8 Transwell實驗檢測肺腺癌A549細胞侵襲

使用涂有基質膠的transwell小室在37 ℃下進行侵襲實驗。利用無FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基將細胞密度調整為4×105個/mL，取100 μL加入到transwell上室中，再向下室中加入600 μL含有10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)基，在37 ℃下溫育24 h后，將膜下表面的細胞用甲醇固定20 min，結晶紫染色30 min。隨機選擇5個視野利用倒置光學顯微鏡觀察侵襲細胞數(shù)目并拍照。

1.9 Western blot檢測肺腺癌A549細胞中GOLM1及PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路相關蛋白表達

將各組肺腺癌A549細胞參照1.4中的方法進行Western blot，將一抗更換為兔抗人GOLM1（1∶500）、PI3K（1∶1 000）、AKT（1∶500）、mTOR（1∶500）、p-PI3K（1∶1 000）、p-AKT（1∶500）、p-mTOR（1∶500）、GAPDH（1∶1 000），其余步驟同1.4。

1.10 裸小鼠移植瘤實驗

收獲1.5中的各組細胞，將2×106個細胞注射到BALB/c裸小鼠右側腋窩皮下，分別命名為空白組、si-NC組、si-GOLM1組、IGF-1組和si-GOLM1＋IGF-1組，每組6只。注射6周后處死裸小鼠，收集腫瘤，測量皮下移植瘤的質量和體積。腫瘤體積（V）：V＝0.5×A×B2，其中A和B分別代表較長和較短的腫瘤直徑。

1.11 統(tǒng)計學處理

使用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計數(shù)資料采用例數(shù)和百分比表示，行χ2檢驗。計數(shù)資料采用±s表示，使用單因素方差分析進行多組間比較，進一步兩組間的比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌組織中GOLM1表達及其與臨床病理學特征的關系

將90例肺腺癌組織及其癌旁組織固定于4%多聚甲醛溶液中，利用免疫組織化學法檢測肺腺癌組織和癌旁組織中GOLM1的表達情況。結果顯示，肺腺癌組織中GOLM1的表達陽性率為83.33%（75/90），明顯高于癌旁組織的15.56%（14/90）（χ2＝82.699，P＜0.001，圖1）。其中肺腺癌組織中GOLM1陽性評分為1分的有7例，2分及以上的有68例，癌旁組織中GOLM1陽性評分為1分的有2例，2分及以上的有12例。分析GOLM1的表達陽性率與臨床病理學特征之間的關系，結果顯示，GOLM1表達與分化程度、淋巴結轉移、臨床分期顯著相關（P＜0.05），而與性別、年齡、是否吸煙無顯著相關性（P＞0.05，表1）。

圖1 免疫組織化學染色檢測GOLM1表達Fig.1 Immunohistochemical staining to detect GOLM1 expression

表1 肺腺癌組織中GOLM1表達與臨床病理學特征的關系Tab.1 Relationship between GOLM1 expression and clinicopathological characteristics in lung adenocarcinoma tissues ［n (%)］

2.2 肺上皮細胞BEAS-2B和肺腺癌H460、A549、PG49、H1299細胞中GOLM1的表達比較

將肺上皮細胞BEAS-2B和肺腺癌H460、A549、PG49、H1299細胞在37 ℃、CO2體積分數(shù)為5%的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，采用Western blot檢測GOLM1的相對表達水平，并進行灰度掃描分析。結果顯示，與人肺上皮細胞BEAS-2B比較，人肺腺癌H460、A549、PG49、H1299細胞中GOLM1的相對表達水平顯著升高（P＜0.05，圖2，表2），且肺腺癌A549細胞中GOLM1相對表達水平最高，因此選用肺腺癌A549細胞進行后續(xù)實驗。

圖2 Western blot檢測各組細胞中GOLM1表達Fig.2 Detection of GOLM1 expression in each group of cells by Western blot

表2 各組細胞中GOLM1的相對表達水平比較Tab.2 Comparison of the relative expression levels of GOLM1 in each group of cells (±s,n＝6)

表2 各組細胞中GOLM1的相對表達水平比較Tab.2 Comparison of the relative expression levels of GOLM1 in each group of cells (±s,n＝6)

a:P＜0.05,compared with BEAS-2B cells.

2.3 各組肺腺癌A549細胞增殖能力的比較

將空白組、si-NC組、si-GOLM1組、IGF-1組和si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞以2×103個/孔的密度接種到96孔板中，分別在培養(yǎng)0、24和48 h時利用CCK-8法檢測各組細胞在450 nm波長處的D值，結果顯示，與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組肺腺癌A549細胞在同一時間點（24、48 h）的D值顯著降低，IGF-1組肺腺癌A549細胞在同一時間點（24、48 h）的D值顯著升高（P＜0.05）；與si-GOLM1組比較，si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞在同一時間點（24、48 h）的D值顯著升高（P＜0.05，表3）。

表3 各組肺腺癌A549細胞在0、24和48h時的D值比較Tab.3 Comparison of D values of lung adenocarcinoma A549 cells in each group at 0,24 and 48h (±s,n=6)

表3 各組肺腺癌A549細胞在0、24和48h時的D值比較Tab.3 Comparison of D values of lung adenocarcinoma A549 cells in each group at 0,24 and 48h (±s,n=6)

a:P＜0.05,compared with blank group;b:P＜0.05,compared with si-NC group;c:P＜0.05,compared with si-GOLM1 group.

2.4 各組肺腺癌A549細胞遷移、侵襲能力比較

通過劃痕實驗檢測各組肺腺癌A549細胞遷移，通過transwell實驗檢測各組肺腺癌A549細胞侵襲。結果顯示，與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組肺腺癌A549細胞劃痕愈合率及侵襲細胞數(shù)目顯著降低，IGF-1組肺腺癌A549細胞劃痕愈合率及侵襲細胞數(shù)目顯著升高（P＜0.05）；與si-GOLM1組比較，si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞劃痕愈合率及侵襲細胞數(shù)目顯著升高（P＜0.05，圖3、4，表4）。

圖3 各組肺腺癌A549細胞遷移能力比較Fig.3 Comparison of the migration ability of lung adenocarcinoma A549 cells in each group

圖4 各組肺腺癌A549細胞侵襲能力比較Fig.4 Comparison of the invasion ability of lung adenocarcinoma A549 cells in each group

表4 各組肺腺癌A549細胞劃痕愈合率及侵襲細胞數(shù)目比較Tab.4 Comparison of scratch healing rate and number of invasive cells in lung adenocarcinoma A549 cells in each group (±s,n=6)

表4 各組肺腺癌A549細胞劃痕愈合率及侵襲細胞數(shù)目比較Tab.4 Comparison of scratch healing rate and number of invasive cells in lung adenocarcinoma A549 cells in each group (±s,n=6)

a:P＜0.05,compared with blank group;b:P＜0.05,compared with si-NC group;c:P＜0.05,compared with si-GOLM1 group.

2.5 各組肺腺癌A549細胞中GOLM1及PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路相關蛋白水平的比較

收集空白組、si-NC組、si-GOLM1組、IGF-1組、si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞，采用Western blot檢測GOLM1、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR蛋白的相對表達水平，并進行灰度掃描分析，結果見圖5和表5。與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組肺腺癌A549細胞中GOLM1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白的相對表達水平顯著降低（P＜0.05），IGF-1組肺腺癌A549細胞中GOLM1的相對表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白的相對表達水平顯著升高（P＜0.05）；與si-GOLM1組比較，si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞中GOLM1蛋白的相對表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的相對表達水平顯著升高（P＜0.05）。

表5 各組肺腺癌A549細胞中GOLM1及PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路相關蛋白水平比較Tab.5 Comparison of GOLM1 and PI3K/AKT/mTOR signaling pathway related protein levels in lung adenocarcinoma A549 cells in each group (±s,n＝6)

表5 各組肺腺癌A549細胞中GOLM1及PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路相關蛋白水平比較Tab.5 Comparison of GOLM1 and PI3K/AKT/mTOR signaling pathway related protein levels in lung adenocarcinoma A549 cells in each group (±s,n＝6)

a:P＜0.05,compared with blank group;b:P＜0.05,compared with si-NC group;c:P＜0.05,compared with si-GOLM1 group.

圖5 Western blot檢測各組肺腺癌A549細胞中GOLM1、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR和mTOR蛋白表達Fig.5 Western blot method was used to detect GOLM1,p-PI3K,PI3K,p-AKT,AKT,p-mTOR and mTOR protein expression in lung adenocarcinoma A549 cells in each group

2.6 各組裸小鼠移植瘤生長情況比較

收集空白組、si-NC組、si-GOLM1組、IGF-1組和si-GOLM1＋IGF-1組的細胞，將2×106個細胞注射到裸小鼠右側腋窩皮下，注射6周后處死裸小鼠，收集腫瘤，測量皮下誘導腫瘤的質量和體積，結果見圖6和表6。與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組移植瘤的質量和體積顯著降低，IGF-1組移植瘤的質量和體積顯著升高（P＜0.05）；與si-GOLM1組相比，si-GOLM1＋IGF-1組移植瘤的質量和體積顯著升高（P＜0.05）。

表6 各組裸小鼠移植瘤質量、體積比較Tab.6 Comparison of the mass and volume of transplanted tumors in BALB/c nude mice in each group (±s,n＝6)

表6 各組裸小鼠移植瘤質量、體積比較Tab.6 Comparison of the mass and volume of transplanted tumors in BALB/c nude mice in each group (±s,n＝6)

a:P＜0.05,compared with nude mice blank group;b:P＜0.05,compared with nude mice si-NC group;c:P＜0.05,compared with nude mice si-GOLM1 group.

圖6 各組裸小鼠移植瘤生長情況比較Fig.6 Comparison of the growth of xenagraft tumors in BALB/c nude mice in each group

3 討 論

化療、手術切除及放療是肺腺癌的常規(guī)治療方法，然而，由于這些治療方法缺乏特異性，也會對鄰近的正常細胞造成傷害［8］。因此，進一步尋找新的肺腺癌診斷標志物和治療靶點具有重要意義。

GOLM1是一種常駐高爾基Ⅱ型跨膜蛋白，由單個N端跨膜結構域、一個C端結構域和卷曲螺旋結構域組成［9］。有研究［10］表明，GOLM1通過與表皮生長因子受體相互作用而與肝癌患者的遠處轉移和不良預后相關。GOLM1在宮頸癌組織中高表達，其高表達與腫瘤患者國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期、分化程度、淋巴結轉移及深肌層浸潤顯著相關［11］。GOLM1基因在前列腺癌組織中高表達，且與患者的不良預后相關，可作為前列腺癌較好的診斷標志物［12］。GOLM1通過激活基質金屬蛋白酶13信號轉導通路增強非小細胞肺癌的侵襲性［13］。過表達GOLM1可促進肝癌細胞遷移和侵襲能力［14］。GOLM1在肺腺癌細胞中高表達，下調其表達可抑制肺腺癌細胞增殖，而上調其表達可促進細胞增殖［15］。本研究發(fā)現(xiàn)，GOLM1在肺腺癌組織中高表達，其高表達與肺腺癌患者的腫瘤分化程度、淋巴結轉移及臨床分期顯著相關。GOLM1在肺腺癌H460、A549、PG49和H1299細胞中高表達，且在肺腺癌A549細胞中表達量最高，因此選用肺腺癌A549細胞為研究對象。與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組肺腺癌A549細胞中GOLM1的相對表達水平顯著降低，證明細胞轉染成功。沉默GOLM1可明顯抑制肺腺癌A549細胞增殖、遷移與侵襲能力，提示GOLM1在肺腺癌中發(fā)揮著促癌作用，GOLM1可作為肺腺癌早期診斷的生物標志物及潛在的治療靶點。

PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路在細胞存活和生長中起著關鍵作用，多項研究［16-17］表明，在惡性腫瘤細胞中，PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路的活性明顯增強，因此抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路的活性成為治療癌癥的有效策略。Deng等［18］研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素聯(lián)合多西他賽通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路誘導食管鱗癌細胞凋亡和自噬，抑制其細胞增殖。炎士珂等［19］研究表明，小分子促纖溶活性化合物可以抑制肺腺癌細胞增殖活性，抑制其細胞遷移和侵襲，其機制是通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路實現(xiàn)的。孟東雪等［20］闡明扶正抑瘤湯通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路抑制肺腺癌A549細胞增殖，并促進細胞凋亡。丁志丹等［21］闡述貝母素乙可使肺腺癌A549細胞中的PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路激活受阻，進而抑制腫瘤細胞侵襲及遷移能力。本研究結果顯示，與空白組、si-NC組比較，si-GOLM1組肺腺癌A549細胞中GOLM1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR蛋白的相對表達水平顯著降低，推測沉默GOLM1可能通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路抑制肺腺癌A549細胞增殖、遷移和侵襲。為驗證該推測，本研究設置PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路激活劑IGF-1進行干預，結果發(fā)現(xiàn)，與空白組、si-NC組比較，IGF-1組肺腺癌A549細胞增殖、遷移及侵襲能力顯著增強，表明IGF-1激活PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路后可促進細胞增殖、遷移及侵襲。而與si-GOLM1組比較，si-GOLM1＋IGF-1組肺腺癌A549細胞增殖、遷移及侵襲相關指標均升高，再次證明沉默GOLM1可能通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路抑制肺腺癌A549細胞增殖、遷移及侵襲。本研究通過體內實驗和BALB/c裸小鼠移植瘤實驗證實沉默GOLM1可抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路的激活，從而抑制肺腺癌A549細胞增殖、遷移及侵襲。

綜上所述，沉默GOLM1可抑制PI3K/AKT/mTOR信號轉導通路的激活，從而抑制肺腺癌A549細胞增殖、遷移及侵襲。但GOLM1調控肺腺癌細胞增殖、遷移及侵襲的機制比較復雜，尚需進一步研究。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。