王 斌，閆海全，王淑芳，郭玉鑫，王福財，郭 嶸，廖世梅

(1.天?？h動物疫病預防控制中心，甘肅 天祝 733299；2.天祝縣華藏寺鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，甘肅 天祝 733299)

牛出敗全稱是牛出血性敗血癥，是感染多殺性巴氏桿菌而引起的敗血癥和組織器官的出血性炎癥為特征的傳染病，該菌感染譜很廣，家禽、家畜、野生動物都有可能感染，家畜中牛最易感。

牛出敗病常呈內源性感染，當秋末冬初、氣候突變時，機體對溫差產(chǎn)生應激反應，引起機體的抵抗力下降時更易發(fā)生。常呈地方性小范圍暴發(fā)或散發(fā)，一年四季皆可發(fā)。同種動物間傳播速度快，不同種動物間不易傳播[1]。病牛臨床上分為水腫型、肺炎型和敗血型3種，多數(shù)感染牛為混合感染，單個型感染的較少[2]。

甘肅省天祝藏族自治縣是傳統(tǒng)牧業(yè)縣，畜牧業(yè)歷史悠久。境內海拔2 040～4 874 m，年平均氣溫0.3 ℃，天祝白牦牛是天?？h特有的地方畜種，全國農(nóng)產(chǎn)品地理標志。幾乎終年放牧，外界環(huán)境對牦牛的健康影響較大。多年來牛出敗在天祝白牦牛時有發(fā)生，遇到天氣突變發(fā)病率更高，犢牛病死率高于成年牛。筆者只從上報的疫情中了解到少數(shù)牛出敗死亡病例，臨床癥狀以肺炎型和敗血型為多，潛伏期約5 d。癥狀表現(xiàn)為發(fā)燒怕冷，體溫升高到40～42 ℃，食欲不振，精神呆滯，咳嗽，呼吸不暢，鼻液較多，病牛便秘和腹瀉交替發(fā)生，以腹瀉為多數(shù)，有的糞便帶血，病程7 d左右，剖檢病變主要表現(xiàn)在胸腔部位，胸膜和肺發(fā)生纖維性炎癥，胸腔內滲有大量積液，纖維性或漿液性液體，肺部呈大理石樣病變，心包和胸膜粘連，敗血型表現(xiàn)為急性敗血癥，病程很短，癥狀還沒出現(xiàn)就死亡，一般在1～2 d。敗血型病理變化為真胃粘膜、腸道粘膜、皮下組織都有出血現(xiàn)象，淋巴結明顯水腫，肝腎異常病變。迄今為止全縣從沒做過牛出敗感染率情況普查，因此筆者在全縣10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)36個村，80個場點采集了380份牦牛血，用ELISA法檢測牛巴氏桿菌抗原，全面了解天祝白牦牛感染牛巴氏桿菌情況。

1 材料與方法

1.1 采 樣

選取天祝白牦牛主要分布的打柴溝鎮(zhèn)、哈溪鎮(zhèn)、石門鎮(zhèn)等10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，場群選取以放牧牛群為主77個，育肥場3個，共380份樣品。有的場群已免疫牛出敗疫苗，并在有效期內，有的當年未免疫。因為本實驗是抗原檢測，免疫血樣不影響實驗結果。采集牛頸靜脈血分離血清，保證血清新鮮無溶血。

1.2 檢測試劑

牛巴氏桿菌(pasteurella)酶聯(lián)免疫分析試劑盒，廠家：江蘇菲亞生物科技有限公司，LOT NO：2108026。實驗原理是用雙抗體夾心法測定樣品中牛巴氏桿菌表達。

1.3 實驗步驟

每板設2個陽性和陰性對照孔，各加50 μL對照液，空白孔1孔，樣品孔先加樣品稀釋液40 μL，再加樣品10 μL。加樣：將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min；然后將縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。每孔加入酶標試劑50 μL，空白孔除外，用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min，再用同種方法洗滌。顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃避光顯色10 min。終止：每孔加終止液50 μL，終止反應。測定：以空白孔調零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定在加終止液后15 min以內進行。

1.4 實驗有效性判定

陽性對照孔平均值≥1.00；陰性對照平均值≤0.20。

臨界值(CUT OFF)計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。

陰性判定：樣品OD值<臨界值(CUT OFF)者為牛巴氏桿菌陰性；

陽性判定：樣品OD值≥臨界值(CUT OFF)者為牛巴氏桿菌陽性。

2 結果與分析

10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)牛巴氏桿菌病抗原檢測陽性率統(tǒng)計情況見表1。

2.1 統(tǒng)計抗原陽性率

結果(表1)顯示，陽性率在0～7.5%之間，平均陽性率為4.47%。這次采樣場點多，樣品比較廣泛，檢測結果能代表全縣感染情況，從陽性率分析巴氏桿菌陽性率不高，并且有的鄉(xiāng)鎮(zhèn)感染率為0，但呈現(xiàn)普遍感染。因為以前沒做過這樣的檢測，所以無法判斷變化趨勢。

2.2 年齡對陽性率影響

按照年齡統(tǒng)計陽性率，結果是17份陽性中，2歲以下牦牛有10頭，感染率為5%，2歲以上有7份，感染率為3.88%，說明年幼牛感染率高于成年牛。

2.3 地域分布影響

10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)地理地形有區(qū)別，海拔在2 040～4 874 m之間，氣候也稍有差異，從檢測結果(表1)分析陽性率與地域分布無明顯差異。

表1 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)牛巴氏桿菌病抗原陽性率統(tǒng)計情況

2.4 病例檢測

采樣過程中，石門鎮(zhèn)1群95頭牦牛有7頭表現(xiàn)出咳嗽、食欲減退、體溫在40～41.8 ℃之間，鼻鏡干燥，結膜發(fā)紅，還有肌肉震顫現(xiàn)象，疑似肺炎性牛出敗，對病死1頭采組織病料，作染色鏡檢，鏡下見到大量巴氏桿菌，同時采集同群健康牛和發(fā)病牛血樣25份(病牛5份)，作酶聯(lián)免疫分析檢測，陽性率為84%(病牛陽性率100%)，結合鏡檢結果綜合診斷為牛出敗感染引起發(fā)病。

3 討 論

牛出敗為我國二類動物傳染病，是需要采取嚴格控制、撲滅等措施，防止擴散的傳染病。平常大家較重視口蹄疫等國家強制免疫病種，對地方性常見病放松了警惕，防疫上存在漏洞，但牛出敗是急性，傳染性較強的傳染病，巴氏桿菌在自然界廣泛存在，發(fā)病無季節(jié)性，當有誘發(fā)因素存在，引起動物免疫力下降時，常呈急性發(fā)作，在小范圍爆發(fā)，如果不及時有效治療，常常會引起牲畜死亡。病牛如果沒有及時診斷和處理，會造成突然爆發(fā)流行的風險。

從檢測結果看，全縣19個鄉(xiāng)鎮(zhèn)調查了白牦牛分布較多的10個鄉(xiāng)鎮(zhèn)80個場點，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)感染率高低不一，其中2個鄉(xiāng)鎮(zhèn)為0，最高達到7.5%，說明全縣牦牛對牛出敗呈普遍易感，平常表現(xiàn)為隱性感染，當有誘發(fā)因素存在時激發(fā)發(fā)病，表現(xiàn)出臨床癥狀。筆者還對比了放牧牦牛和圈養(yǎng)飼喂牦牛，前者陽性率高于后者，這和環(huán)境誘發(fā)因素較多有很大關系，氣溫變化或保暖措施不到位等常會誘發(fā)內源感染，所以加強放牧牦牛的飼養(yǎng)管理很重要，尤其2歲以下幼牛免疫力低于成年牛，應作為飼養(yǎng)管理的重點。據(jù)任廣杰等[3]報道，野牦牛與家牦牛雜交的混血牦牛對牛出敗的抵抗力強于家牦牛，發(fā)病率低于家牦牛。

牛出敗的防控要從加強飼養(yǎng)管理、程序化免疫、無害化處理病畜等方面綜合入手，合理建造圈舍，降低溫度對動物機體的不利影響；平時做好春秋兩季牛巴氏桿菌滅活苗的免疫，應免密度達到100%，保護易感動物；養(yǎng)殖過程中要觀察仔細，及時發(fā)現(xiàn)病畜并有效隔離飼喂。發(fā)生疫情時及時上報并做好隔離措施，對健康畜緊急免疫接種，病畜可用抗生素、磺胺類藥物等對癥治療[4]，及時清理污染物、排泄物，對病死畜遠離水源深埋或焚燒，對污染圈舍和環(huán)境用10%石灰乳或其他消毒劑徹底消毒[5-11]，同時加強舍內通風換氣，有條件的修筑火墻增加舍溫。