在嚴重急性呼吸道綜合征（SARS）和新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）2次重大呼吸道病毒感染爆發(fā)過程中，全身炎癥反應綜合癥（SIRS）造成的多器官功能障礙綜合征(MODS)是死亡的重要原因。目前臨床處理SIRS時一般會應用激素，雖然在一定程度上可以降低死亡率，但帶來的副作用同樣不可忽視，亟待醫(yī)學界探索出其他可行的方案。與炎癥啟動和發(fā)展關(guān)聯(lián)的分子環(huán)節(jié)當中，經(jīng)典以及非經(jīng)典核因子(NF-kb)家族成員于目前仍占有核心地位。除此之外，絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、Toll樣受體（TLRs）、絡氨酸激酶/信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活子（JAK/STAT3）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、Hippo通路乃至細胞焦亡相關(guān)通路都被證實起到了積極作用。上述通路的相關(guān)小分子抑制劑多數(shù)在實驗室條件下表現(xiàn)出一定的抑炎效果，但在成果轉(zhuǎn)化方面仍少見報道，提示炎癥發(fā)生發(fā)展的分子機制仍然未被充分挖掘。研究表明當堿基或組蛋白發(fā)生表觀遺傳修飾時，染色質(zhì)構(gòu)像將發(fā)生改變，從而影響轉(zhuǎn)錄因子與靶基因啟動子區(qū)域的結(jié)合，使得基因表達發(fā)生變化。譬如輔助激活因子p300就是通過誘導組蛋白H3第27位賴氨酸（H3K27）發(fā)生乙?；揎棧瑥亩沙谌旧|(zhì)結(jié)構(gòu)和激活相關(guān)基因表達。p300誘導的表觀遺傳修飾是否介入了脂多糖（LPS）誘導的炎癥介質(zhì)合成過程，現(xiàn)有研究還未見詳細報道。

基于以上背景，我們采用有關(guān)實驗技術(shù)路線，探究出LPS 刺激條件下RAW246.7 內(nèi)p300 合成的變化規(guī)律，并且驗證了p300與炎癥基因啟動子存在結(jié)合現(xiàn)象以及由此結(jié)合產(chǎn)生的乙?；揎椬饔迷谡T導炎癥基因表達過程中的積極作用，提示干預p300與炎癥基因啟動子的結(jié)合能力或與之相關(guān)的乙?；揎椈钚?，很可能成為逆轉(zhuǎn)臨床炎癥失衡的全新策略。

1 材料和方法

1.1 細胞株及主要試劑

小鼠巨噬細胞、RPMI 1640培基由南京華奧生物技術(shù)有限公司提供。安捷倫G3 平臺小鼠表達譜芯片（Agilent Sureprint G3 Mouse Gene Expression v2 8x60K Microarray）由Agilent和John Rinn 實驗室共同設計，涵蓋39 430條Entrez Gene RNAs以及16 251條lincRNA。兔抗小鼠RFX、Runt、Far1、Tmem176b、Ttc24、Tmem163、Csf3、Src、p65、p300、c-myb以及二抗均購自博大泰克公司。高表達p65、p300、c-myb蛋白的細胞提取物（以HEK293為載體，制備步驟詳見參考文獻［21］）以及pEGFp-L1-p300和各干擾質(zhì)粒均由武漢生工股份有限公司合成。

1.2 安捷倫G3小鼠表達譜芯片篩選與LPS刺激強度相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子

復蘇后的Raw264.7細胞于RPMI 1640內(nèi)培養(yǎng)，根據(jù)不同LPS刺激濃度以及時間分為以下4組：（1）1μg/mL LPS刺激6 h；（2）10μg/mL LPS刺激12 h；（3）100μg/mL LPS刺激12 h；（4）對照組：采用等體積培基加入。刺激結(jié)束后，MTT檢測細胞活性，80%以上的對象進行微陣列芯片雜交實驗，委托上海歐意生物醫(yī)學科技有限公司完成。主要步驟為總RNA提取后進行純化，后反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再轉(zhuǎn)錄合成cRNA，樣品片段化處理后進行熒光標記以及芯片雜交（65 ℃10 r/min滾動18 h）。結(jié)束后進行清洗及掃描，得到雜交圖片。掃描后通過Feature Extraction 軟件抽提數(shù)據(jù)，生成的原始數(shù)據(jù)經(jīng)Genespring 標準化。將mRNA 表達差異倍數(shù)≥2，且＜0.05的定義為差異表達基因（DEGs）并進行GO功能分析。篩選其中10個代表性基因的蛋白產(chǎn)物進行WB檢測，以驗證芯片結(jié)果的可靠性。

1.3 Raw264.7內(nèi)p300與c-myb的免疫共沉淀檢測

用含蛋白酶抑制劑的RIPA 裂解液提取Raw264.7蛋白，將蛋白樣品分為免疫共沉淀、無關(guān)對照以及裂解液組（作為input）。于免疫共沉淀組加入兔抗小鼠多克隆c-myb抗體，無關(guān)對照組中加入兔抗小鼠IgG，混入蛋白A/G瓊脂糖，4 ℃孵育過夜。清洗沉淀復合物以去除非特異結(jié)合的蛋白，將瓊脂糖珠-抗原抗體復合物用2×Loading Buffer 重懸，95℃水浴5 min，100 g/L SDSpAGE 凝膠電泳，利用Western blot方法檢測p300表達。

1.4 電泳遷移率實驗（EMSA）確定鼠IL-6以及TNF-α基因結(jié)構(gòu)上的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點

安捷倫G3平臺小鼠表達譜芯片顯示LPS刺激下RAW246.7內(nèi)共有850個基因表達上調(diào)，676個基因表達下調(diào)（＜0.05）。對差異表達基因進行GO功能分析，提示與LPS刺激有關(guān)的分子功能變化最為突出的是“蛋白結(jié)合”，而生物學過程改變則以“炎癥反應”最為顯著（圖2A）。圖2B為對照以及不同LPS刺激條件下芯片篩選的部分差異表達基因的熱圖。

作以邊長為a的正方形ABCD，連接對角線BD，并以BD為邊長作正方形BEFD，設其邊長為b，如圖所示，則有b2=2a2

1.5 Chip-qPCR法檢測RAW246.7胞內(nèi)相關(guān)分子與炎癥基因啟動子的結(jié)合

復蘇成功的RAW264.7進行c-myb表達干預（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟詳見1.6），同時設立分非干預組。搜集活力理想的細胞10個，Chip-qPCR 主要步驟見下：（1）蛋白-DNA交聯(lián)：1%甲醛溶液固定，甘氨酸溶液終止反應；（2）超聲斷裂染色質(zhì)：按100 W，10 s/次，間隔30 s的方式斷裂細胞裂解液中的染色質(zhì)，共5次；（3）免疫共沉淀：加入p65以及p300單克隆抗體（10 μg/管），4 ℃搖床孵育12 h，使用蛋白G-瓊脂糖小珠吸附免疫沉淀復合物；（4）蛋白-DNA解交聯(lián)：加入5 mol/L NaCl溶液，65 ℃水浴過夜，DNA純化柱回收；（5）Real-time PCR分析結(jié)合啟動子片段的相對含量：其中PCR引物應滿足：（1）覆蓋至少1個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點；（2）擴增區(qū)域位于EMSA實驗寡聚核苷酸引物附近（分別對應圖1中a、b區(qū)域），上下不超過200 bp范圍。反應條件為94 ℃5 s，60 ℃30 s，共40個循環(huán)。

1.6 Western blotting法檢測胞內(nèi)p65、p300以及c-myb的含量

于培養(yǎng)板各孔準備RAW246.7 10個，按不同干預條件分為9 組：（1）pEGFp-L1-p300 轉(zhuǎn)染組；（2）p65SiRNA轉(zhuǎn)染組；（3）pEGFp-L1-p300+p65SiRNA聯(lián)合轉(zhuǎn)染組；（4）pEGFp-L1-p300+c-mybSiRNA轉(zhuǎn)染組；（5）LPS 組（10 μg/mL 刺激12 h，以下同）；（6）LPS+p65SiRNA聯(lián)合干預組；（7）LPS+p300SiRNA聯(lián)合干預組；（8）LPS+c-mybSiRNA聯(lián)合干預組；（9）對照組：加入RPMI 1640，使培基總體積等于前面干預組。轉(zhuǎn)染前將Lipofectamine 2000與Opti-MEM混合，靜置5 min，再與經(jīng)Opti-MEM稀釋的過表達或干擾質(zhì)粒混勻，靜置20 min后緩慢加入RAW246.7，4 h后加入LPS，繼續(xù)于37 ℃、5%CO條件下培養(yǎng)48～72 h。搜集活力理想細胞數(shù)量5×10個，根據(jù)《分子克隆實驗指南》進行胞核蛋白提取、SDS-PAGE轉(zhuǎn)膜以及封閉操作。分別加入兔抗小鼠p65和p300單克隆抗體（稀釋度1∶1000）以及c-myb以及β-actin單克隆抗體（稀釋度1∶2000），4 ℃孵育過夜；TBST洗膜5 min×3次，再加入HRP標記的二抗（稀釋度1∶1000），室溫孵育2 h；洗膜后ECL顯影。AlphaEase FC Version 4 軟件檢測蛋白條帶的吸光度（）值，A目的蛋白/AGAPDH的比值視為表達水平。

1.7 染色質(zhì)免疫沉淀-測序（Chip-seq）技術(shù)分析炎癥基因相應區(qū)域H3K27乙?；揎椧约稗D(zhuǎn)錄因子的結(jié)合水平

各干預組選取5×10個RAW 264.7細胞（經(jīng)MTT檢測活力在80%以上），采用甲醛固定以及甘氨酸終止固定。室溫搖晃5 min后，4 ℃離心并用預冷PBS清洗，后使用1 mL含有抑制劑的緩沖液裂解，冰上孵育10 min。冰上超聲（功率設置為50 W，共計8次，每次1 min，間隔1 min）打斷DNA 片段至100～500 bp 大小，4 ℃、14 000 r/min離心10 min，保留上清。均分成2管，其中1管加入2 μg IgG抗體作為Chip 樣品，另1管加入2 μg兔抗小鼠p65、p300 或者乙酰化H3K27 單克隆抗體，4 ℃孵育過夜。之后4 ℃、14 000 r/min離心15 min，棄上清。elutionbuffer進行2次洗脫，振蕩15min，14000r/min離心10 min后搜集上清。后利用DNA 快速PCR 純化試劑盒進行DNA純化，賽默飛200 超微量分光光度計檢測DNA濃度。篩選出100～200 bp產(chǎn)物，3'端連接A堿基以及測序接頭，委托上海歐意生物醫(yī)學科技有限公司進行高通量測序。利用CisGenome v2.0軟件將測序數(shù)據(jù)格式化為wig文件，上傳IGV_2.9.4系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)可視化。重點分析EMSA驗證的結(jié)合位點的附近范圍，對比基因組序列為mouse_mm10，錯配不超過2個堿基的數(shù)據(jù)可被利用，最后得到p65、p300 以及乙?；疕3K27結(jié)合峰（peak）的圖像結(jié)果。

1.8 RAW246.7分泌IL-6 以及TNF-α水平測定

2.3.1 p65、p300以及c-myb在RAW246.7胞內(nèi)的表達無相互影響 Western blot 對各干預組RAW246.7 胞內(nèi)p65、p300 以及c-myb 的檢測結(jié)果顯示（圖7A～D），pEGFp-L1-p300以及各種干擾質(zhì)粒均可以上調(diào)或者遏制相應蛋白的表達（＜0.05）；然而p65、p300以及c-myb各自的表達均互不干涉。

1.9 統(tǒng)計學分析

而企業(yè)之間的合并也分多種，比如中國遠洋和中國海運合并為中遠海運集團，屬于國企之間的合并重組，比如順豐與夏輝合并為新夏輝，屬于中外合資。

2 結(jié)果

2.1 RAW246.7胞內(nèi)p300的表達與LPS刺激強度存在顯著關(guān)聯(lián)

聯(lián)合UCSC數(shù)據(jù)庫（http://genome.ucsc.edu/）以及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點鑒別工具PROMO 網(wǎng)站（http://alggen.lsi.upc.es/cgi-bin/promo_v3/promo/promoinit.cgi?dirDB=TF_8.3）對鼠IL-6以及TNF-α的基因結(jié)構(gòu)以及啟動子部位的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點進行預測，顯示存在較為密集的為核因子p65以及MYB類轉(zhuǎn)錄因子成員c-myb的結(jié)合位點，而未見p300結(jié)合位點（圖1）。根據(jù)string生物信息學數(shù)據(jù)庫以及免疫共沉淀檢測結(jié)果，推測輔助激活因子p300是通過c-myb的介導才能夠結(jié)合于IL-6以及TNF-α啟動子，而并非直接結(jié)合。據(jù)此為p65以及c-myb各設計出2條寡聚核苷酸引物（分別對應圖1中a、b區(qū)域，p300與c-myb共用相關(guān)寡聚核苷酸引物），覆蓋了至少1個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，同時根據(jù)轉(zhuǎn)錄起始位點（TSS）之后的內(nèi)含子（對應圖1中c區(qū)域）序列，設計1條大小相當?shù)锤采w轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的引物，另外還準備了標準陽性引物作為參照,全部序列信息見表1。配置好SDS-pAGE（50 g/L），按順序加入寡聚核苷酸、標準陽性引物、近紅外染料（IRDye-680）以及p65、p300或者c-myb純蛋白提取物。室溫下避光孵育30 min后點入凝膠點樣孔中，80 V恒定電壓下電泳1.5 h，待染料接近凝膠底部時停止，紅外熒光成像系統(tǒng)掃描，選擇650 nm波長讀取結(jié)果。

隨著社會的變化與發(fā)展，動物疫病的流行趨勢也發(fā)生了一定的變化，這使得許多疫病以及病毒如果采用常規(guī)的方法，則難以檢查出來，等到疫病爆發(fā)后，再采取相應的防治方法，那么就會對社會造成巨大的危害。而采用動物疫病監(jiān)測，就能夠?qū)σ恍╇y以發(fā)現(xiàn)的疫病進行提前監(jiān)測，使相關(guān)部門能夠進行提前預防，以便對疫病的危害進行控制。

2.2 p300可在c-myb介導下結(jié)合于炎癥基因啟動子

免疫共沉淀結(jié)果表明c-myb抗體能夠提取到p300的蛋白成分，與input組結(jié)果類似，而IgG則無法獲取，明確了p300與c-myb在RAW246.7核內(nèi)的結(jié)合（圖4）。

Western blotting法對10 個代表基因蛋白產(chǎn)物的表達水平驗證結(jié)果顯示與基因芯片檢測結(jié)果吻合，即隨著LPS刺激強度增加，p65與p300的表達逐步上升（圖3A、B，＜0.05）。

正態(tài)分布的定量資料均采用均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩間比較采用最小顯著差異法（LSD）。利用IBM SPSS Statistics 25軟件進行分析，＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

Hermann Gretsch說：“我們不再提供那些讓消費者購買一段時間后，就因為產(chǎn)品不實用、過時及退流行而棄置不用的產(chǎn)品”。他的設計觀念在今天看來依舊如新?？梢姡瑢嵱霉δ苁瞧湓O計的根本。無裝飾是包豪斯的風格，因此陶瓷傾向簡潔純白。格羅佩斯生前最后設計委托案TAC 一號茶具，雖然線條柔和許多，仍屬包豪斯風格，符合簡潔幾何外形、“形式追隨功能”等原則。整套茶具以圓為主，握把像細長的門把，蓋紐設計成鉤子的造型，這并非是無用的裝飾，極具功能性，使用時，用大拇指可以輕易地拉起壺蓋和壺內(nèi)的過濾器，避免倒水時，壺蓋掉落得尷尬，使用非常方便。該設計造型簡潔明快，沒有任何多余的裝飾，充分表達了包豪斯的精神。

EMSA檢測相應的p65、p300以及c-myb的純蛋白提取物與IL-6以及TNF-α相應部位的結(jié)合情況，顯示同陽性參照，以2基因啟動子a，b區(qū)域為模板合成的有關(guān)探針與p65以及c-myb均能夠結(jié)合，而內(nèi)含子c區(qū)域則不能結(jié)合（圖5A、C，圖5D、F）；且p300不能結(jié)合于上述a，b區(qū)域（圖5B、E）。Chip-qPCR證實當c-myb存在時，p65以及p300抗體均能夠沉淀和擴增得到炎癥基因啟動子a、b區(qū)域附近的片段（圖6A，上排）；c-myb被表達抑制時，p65抗體仍然能夠沉淀和擴增而獲得相應片段，但p300抗體不能獲得（圖6B，下排）。

2.3 P300誘導的乙酰化修飾參與LPS誘導的炎癥介質(zhì)合成

采用ELISA 法檢測培基中IL-6 以及TNF-α質(zhì)量濃度。在酶標包被板上設置標準品孔、待測樣本孔，分別加入標準以及待測樣本各10 μL，37 ℃下孵育30 min。酶標工作液洗板3 次后加入顯色劑，37 ℃避光顯色15 min，后加入終止液。采用酶標儀測定吸光度值，再根據(jù)標準曲線求得各待測孔的質(zhì)量濃度。

2.3.2 p300可促進炎癥基因啟動子區(qū)域H3K27乙酰化，從而易化p65結(jié)合和激活轉(zhuǎn)錄 Chip-seq對各處理組炎癥基因相應區(qū)域（IL-6為第5號染色體的30 003 000～30 015 000；TNF-α為第17 號染色體的35 195 000～35 200 000范圍）p65、p300以及乙?；疕3K27結(jié)合水平的分析結(jié)果（圖8A、B），ELISA對各組炎癥介質(zhì)合成水平的檢測結(jié)果顯示各干預組炎癥基因啟動子區(qū)域p65、p300和乙酰化H3K27的結(jié)合量以及IL-6和TNF-α表達水平的變化規(guī)律基本一致（圖9）。相比于對照組，p300過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染以及LPS刺激均可導致炎癥基因啟動子部位結(jié)合的p300和H3K27乙?；揎椝皆黾樱瑥亩龠Mp65與啟動子的結(jié)合和炎癥基因轉(zhuǎn)錄（＜0.05）。然而c-myb 被表達抑制時，p300 過表達以及LPS刺激誘導的炎癥基因啟動子部位p65、p300以及乙?；疕3K27結(jié)合水平改變和炎癥介質(zhì)合成均被遏制（＜0.05）。在p65干擾相關(guān)組別中，p65與啟動子的結(jié)合以及炎癥基因轉(zhuǎn)錄同樣被遏制（＜0.05），但未對p300的結(jié)合以及H3K27的乙酰化修飾水平造成影響。

隨著越來越多的立法者加入其中，2015年國會要求NIH為阿爾茨海默病的研究準備一份“專業(yè)判斷”的預算，這也是一份實現(xiàn)2025年目標所需要的愿望清單，該清單會繞過聯(lián)邦預算程序，直接提交給總統(tǒng)和國會。此前，只有癌癥和艾滋病的研究才能享受這種特殊待遇。

3 討論

隨著生物醫(yī)學研究技術(shù)的不斷進步，表觀遺傳修飾與人類疾病的關(guān)聯(lián)被逐步揭示，很多不能夠利用孟德爾遺傳法則解釋的發(fā)病現(xiàn)象，卻可以被DNA甲基化以及組蛋白修飾等效應加以解釋；且相關(guān)的修飾激動或者抑制策略，同樣可能應用于臨床疾病的干預，提示學術(shù)界需要更多從表觀遺傳修飾的角度來探討相關(guān)疾病的發(fā)生機制。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，武陵山片區(qū)道地藥材血藤果之中的提取物山姜素可激活組蛋白去乙?；窰DAC1以及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3A，從而誘導炎癥基因IL-6啟動子部位的H3K9以及CpG二核苷酸分別發(fā)生去乙?；图谆揎?，導致IL-6的合成抑制。以上發(fā)現(xiàn)表明相關(guān)表觀遺傳修飾介入了炎癥介質(zhì)表達的過程，因此在經(jīng)典刺激物質(zhì)LPS所造成的炎癥激活過程中，表觀遺傳修飾可能同樣扮演了重要角色。

在導致基因表達激活的表觀遺傳修飾當中，H3K27乙酰化修飾研究得比較深入，其多由輔助激活因子p300誘導。因為乙?；鶊F的加入干擾了核小體中堿性氨基酸與DNA之間的靜電吸引力，使相鄰核小體之間的聚集力減少，導致染色質(zhì)開放，有利于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合于順式作用元件，從而激活基因轉(zhuǎn)錄。本次研究中，我們利用LPS刺激RAW246.7，并采用小鼠表達譜芯片進行差異表達基因的“GO”分析，證實了LPS刺激可造成RAW246.7胞內(nèi)炎癥反應活化。聯(lián)合WB技術(shù)，提示除了經(jīng)典核因子p65，尚有p300的表達與LPS刺激強度呈顯著關(guān)聯(lián)，表明后者可能在LPS誘導的炎癥介質(zhì)合成過程中起到重要作用。

The azimuth DOA hk;l(t) and elevation DOA uk;l(t) can be expressed as

為了進一步揭示p300誘導炎癥介質(zhì)合成的分子機制，我們論證了p300 與炎癥基因啟動子存在結(jié)合現(xiàn)象。根據(jù)已有報道提示，p300獨立存在時穩(wěn)定性較差，多數(shù)情況下是與其它分子伴侶結(jié)合后才可定位于靶基因以發(fā)揮表達調(diào)節(jié)作用，其中報道較多的為CREB結(jié)合蛋白（CBP），據(jù)此推測p300/CBP復合物才是真正發(fā)揮乙?；揎椬饔玫姆肿?。還有研究報道在造血或腫瘤干細胞中，p300通過與輔助激活因子c-myb結(jié)合的方式以激活某些原癌基因表達，故p300/c-myb復合物可能與腫瘤的惡性分化有關(guān)。接下來我們利用PROMO數(shù)據(jù)庫預測到IL-6以及TNF-α啟動子部位均存在p65以及c-myb結(jié)合位點，但并無p300結(jié)合位點，故推測p300與炎癥基因啟動子的結(jié)合可能依賴于cmyb介導，而接下來的免疫共沉淀則恰好證實了p300與c-myb在RAW246.7內(nèi)的結(jié)合。另外EMSA還證實了炎癥基因啟動子相關(guān)序列與p65以及c-myb蛋白提純物存在結(jié)合現(xiàn)象，而p300 卻不能結(jié)合；并且ChipqPCR亦證明當c-myb表達被抑制時，p300抗體不能沉淀和擴增得到相應的炎癥基因啟動子序列片段。綜上，研究結(jié)果支持在RAW246.7內(nèi)，p300通過與c-myb結(jié)合后再定位于炎癥基因啟動子部位，從而實現(xiàn)對基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用。

我們進一步采用過表達或干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染策略以及WB和ELISA檢測方法，聯(lián)合熱門的蛋白質(zhì)-DNA互作實驗技術(shù)-chip-seq，揭示了p300誘導的乙酰化修飾參與LPS 誘導的炎癥介質(zhì)合成過程。首先通過對RAW246.7轉(zhuǎn)染p65、p300以及c-myb 過表達以及干擾質(zhì)粒，證實了3者均不干涉對方表達。雖然轉(zhuǎn)染p300過表達質(zhì)粒不影響p65合成，但過表達的p300結(jié)合于炎癥基因啟動子部位并造成附近H3K27發(fā)生乙酰化修飾，從而易化p65與啟動子結(jié)合和促進炎癥介質(zhì)合成，產(chǎn)生與LPS刺激類似的效果。同時發(fā)現(xiàn)當c-myb缺失時，p300與炎癥基因啟動子的結(jié)合、H3K27的乙酰化修飾以及p65的結(jié)合水平均被遏制，因此逆轉(zhuǎn)了LPS刺激或p300過表達質(zhì)粒對炎癥介質(zhì)合成的促進效果。另外在p65干擾相關(guān)組別中，p65與啟動子的結(jié)合以及炎癥基因合成均被抑制，但卻未對p300的結(jié)合以及H3K27的乙?；揎椝皆斐捎绊?。綜上我們推測，LPS誘導的p65以及p300合成均參與了炎癥介質(zhì)的表達調(diào)控，但兩者的作用機制存在較大差異：p65結(jié)合于炎癥基因啟動子部位后可直接發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用；而p300需要在cmyb介導下才能結(jié)合，進一步的轉(zhuǎn)錄激活效應則依賴于乙?；疕3K27后造成的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松弛，使p65更易結(jié)合而得以實現(xiàn)。

綜上所述，本研究證實了p300在LPS誘導RAW246.7炎癥介質(zhì)合成過程中起到了積極作用，提示逆轉(zhuǎn)p300與炎癥基因啟動子的結(jié)合或干預其乙?；揎椖芰Γ瑯涌赡艹蔀槟孓D(zhuǎn)與LPS關(guān)聯(lián)的炎癥失衡的有效方法。鑒于巨噬細胞并非人體內(nèi)唯一的炎癥細胞種類，下一步還應考慮在中性粒細胞以及肥大細胞等對象中開展類似研究，探討p300是否通過同樣機制介導LPS誘導的炎癥介質(zhì)合成；此外還應利用疾病動物模型來驗證上述作用機制的可重復性，為證明p300在臨床炎癥紊亂領(lǐng)域的干預價值提供更多可靠依據(jù)。