陳 瑾 ， 楊加豹 ， 鄧 卉 ， 劉進(jìn)遠(yuǎn)

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都 610066；2.動物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610066）

2020 年7 月1 日我國正式禁止飼料添加促生長類抗生素， 因此尋找和抗生素作用效果相當(dāng)?shù)奶娲菲仍诿冀蕖?中鏈脂肪酸（MCFA）是指碳鏈長度在6 ～12個的飽和脂肪酸， 包括己酸、辛酸、癸酸和月桂酸等（耿春銀等，2014）。 體外試驗(yàn)已經(jīng)表明，MCFAs 及其甘油一酯對致病菌、 病毒及寄生蟲的活性具有一定的抑制作用。 單月桂酸甘油酯（GML）是其中抑菌活性最強(qiáng)的化合物（張希等，2016）。 近年來研究表明，GML 在提高動物生長性能、改善機(jī)體健康方面具有一定的作用（藍(lán)俊虹等，2020；劉夢蕓等，2017）。同時 GML 和有機(jī)酸在體外具有抑菌增效作用 （張希等，2016；Kim等，2013），但GML 和有機(jī)酸復(fù)配在仔豬上的應(yīng)用研究鮮見報道。本試驗(yàn)旨在研究GML 及其與富馬酸（FA） 復(fù)配對川藏黑豬配套系商品仔豬生長性能、 血清生化指標(biāo)、 抗氧化性能及免疫功能的影響，為禁抗后GML 及其與FA 復(fù)配在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 GML 購自杭州康源食品有限公司， FA 購自四川畜科飼料有限公司，供試仔豬和試驗(yàn)場地由四川綿陽明興農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選用80 頭初始體重為（14.99±1.45）kg 的健康川藏黑豬配套系商品仔豬，按照體重相近、公母各半的原則，隨機(jī)分為4組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)4 頭豬。 對照組飼喂不含抗生素的基礎(chǔ)飼糧； 抗生素組在基礎(chǔ)飼糧中添加50 mg/kg 吉他霉素、50 mg/kg 喹烯酮和75 mg/kg 金霉素；GML組在基礎(chǔ)飼糧中添加300 mg/kg GML；GML+FA組在基礎(chǔ)飼糧中添加 300 mg/kg GML 和 6 g/kg FA。 基礎(chǔ)飼糧參考 NRC（2012）飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和我國飼料成分與營養(yǎng)價值進(jìn)行配制， 其組成及營養(yǎng)水平見表1。 GML+FA組用FA 替代等量玉米構(gòu)成試驗(yàn)飼糧。 試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正式期30 d，四川綿陽明興豬場進(jìn)行，試驗(yàn)過程中豬自由采食和飲水， 防疫消毒程序按豬場管理規(guī)定進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 指標(biāo)測定及方法

1.3.1 生長性能 試驗(yàn)期間每天記錄各圈試驗(yàn)豬只的采食量，分別于試驗(yàn)第1、15、30 天，對每頭豬進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算出平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.3.2 腹瀉程度 試驗(yàn)期間每天早、中、晚定時觀察各圈豬只的糞便情況，并給予評分。1 分為硬糞；2 分為正常糞便；3 分為軟糞， 部分形成糞便；4 分為半液狀、漿糊狀糞便；5 分為水樣糞便；糞便得分為4、5 分者確定為腹瀉。 詳細(xì)記錄各圈豬只的腹瀉頭數(shù)及評分，計(jì)算出腹瀉率，計(jì)算公式如下：

腹瀉率/%=（腹瀉仔豬頭數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（總試驗(yàn)豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100。

1.3.3 血清生化指標(biāo)、 免疫指標(biāo)及抗氧化指標(biāo)試驗(yàn)結(jié)束時， 從每組的每個重復(fù)中隨機(jī)選取2 頭豬進(jìn)行前腔靜脈采血，分離血清，-20 ℃冰箱保存待測。 送至成都市公共衛(wèi)生中心用血液生化自動分析儀測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性。 依照相應(yīng)商品試劑盒（南京建成生物工程研究所）的說明測定免疫球蛋白 A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和干擾素-γ（IFN-γ）含量，谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性及總抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量。

1.4 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2007進(jìn)行整理， 采用SPSS 18.0 進(jìn)行單因素方差分析和多重比較，P ＜ 0.05 為差異顯著，P ＜ 0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 GML 及GML+FA 對仔豬生長性能及腹瀉程度的影響 由表 2 可知， 在 1 ～ 14、15 ～ 30 d以及 1 ～ 30 d 階段，各組的 ADG、ADFI、F/G 和腹瀉率均無顯著差異（P ＞0.05）。 但從數(shù)值上來看，1 ～ 14 d GML組的 ADG 和 ADFI 為各組最低，GML+FA組的 ADG 為各組最高。 15 ～ 30 d 抗生素組、GML組和GML+FA組的ADG 比對照組分別提高了 4.76%、2.76%和 6.32%。 1 ～ 30 d 抗生素組和 GML+FA組的 ADG 相似，F(xiàn)/G 相同， 均優(yōu)于對照組。 GML+FA 的腹瀉率較對照組降低26.84%，與抗生素組相當(dāng)。 GML組的ADFI 在各階段及全期均為最低。

表 2 GML 及 GML+FA 對仔豬生長性能和腹瀉程度的影響

2.2 GML 及GML+FA 對仔豬血液生化指標(biāo)的影響 由表3 可知， 與對照組相比， 抗生素組的BUN 顯著降低了 25.96%（P ＜ 0.05）。 其余血清生化指標(biāo)各組之間均無顯著差異（P ＞0.05）。

表 3 GML 及 GML+FA 對仔豬血液生化指標(biāo)的影響

2.3 GML 及GML+FA 對仔豬血清抗氧化能力的影響 由表4 可知，與對照組相比，抗生素組的血清 T-SOD 活性提高了 29.50%（P ＜ 0.01）；GML組血清中T-SOD 活性和MDA 含量分別提高了11.98%和 55.49%（P ＜ 0.05），GSH-PX活性和 TAOC 分別降低了 10.12%（P ＜ 0.05）和 30.77%（P ＜0.01）；GML+FA組血清 MDA 含量提高了 52.47%（P ＜ 0.05）。 各組仔豬血清 CAT 活性無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表 4 GML 及 GML+FA 對仔豬血清抗氧化能力的影響

2.4 GML 及GML+FA 對仔豬血清免疫指標(biāo)的影響 由表5 可知，與對照組相比，抗生素組血清IgM 和IL-6 含量分別降低了16.92%和20.01%（P＜ 0.05）；GML組血清免疫指標(biāo)均無顯著差異（P ＞0.05）；GML+FA組血清 IgA、IgG、IL-6 和 TNF-α含 量 分 別 提 高 了 8.38% 、27.04% 、23.97% 和21.70%（P ＜ 0.05）。 GML+FA組血清 IgA、IgG、IgM、IL-6 TNF-α 和 IFN-γ 含量均極顯著或顯著高于抗生素組 （P ＜ 0.01 或 P ＜ 0.05）。 各組仔豬血清 IL-2 含量均無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表 5 GML 及 GML+FA 對仔豬血液免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 GML 及其與FA 復(fù)配對仔豬生長性能的影響 GML 可在動物生產(chǎn)中作為脂肪乳化劑和抑菌添加劑應(yīng)用。目前關(guān)于GML 對動物生長性能的影響結(jié)果仍存爭議。藍(lán)俊虹等（2020）研究表明，飼糧中添加1000 mg/kg GML 能顯著增加仔豬ADG，顯著降低F/G，提高仔豬生長性能。 李濤等（2013）研究表明，飼料中添加0.4% GML 對斷奶仔豬生產(chǎn)性能影響差異不顯著。 López-Colom 等（2020）考察了從椰子油中提取的中鏈脂肪酸鈉鹽混合物（其中月桂酸占總脂肪酸的48.4%）對沙門氏菌和大腸桿菌攻毒仔豬的保護(hù)作用，結(jié)果表明，該混合物對沙門氏菌攻毒前后的仔豬生長性能無顯著影響，但顯著降低了大腸桿菌攻毒后4 ～8 d仔豬的日增重。 在本試驗(yàn)中，GML 對生長性能無顯著影響，但在各階段都有降低采食量的趨勢，這可能是因?yàn)镚ML 中含有一定量的游離月桂酸，影響了適口性，導(dǎo)致采食量降低。

GML 是脂肪酸及其衍生物中抑菌活性最強(qiáng)的化合物， 和有機(jī)酸復(fù)配在體外具有抑菌增效作用（張希等，2016；Kim 和 Rhee，2013）。 但 GML 和有機(jī)酸復(fù)配在仔豬上的應(yīng)用研究鮮見報道。 曠義文等（2018）將 MCFAs（包含月桂酸和葵酸）、甲酸鈣、乳酸鈣和檸檬酸添加到斷奶仔豬飼糧中，并與含氧化鋅的抗生素飼糧進(jìn)行比較。結(jié)果表明，飼糧添加MCFAs 和有機(jī)酸的混合物替代 ZnO 有利于提高斷奶仔豬的采食量和生長速度， 并且不影響飼料的轉(zhuǎn)化效率。本研究結(jié)果表明，GML 與FA 復(fù)配提高了日增重，降低了腹瀉率，但從統(tǒng)計(jì)上未達(dá)到顯著水平。 分析原因可能和GML 的添加量有關(guān)，Gebhardt 等（2020）評價了在保育豬飼糧中添加MCFAs 促進(jìn)生長的效果， 結(jié)果表明MCFAs 添加量為 0.25%、0.5%、1.0%和 1.5%時，ADG、ADFI和 FCR 呈線性劑量依賴性改善（P ＜ 0.01）。 本研究中GML 的添加量僅為0.03%，遠(yuǎn)低于達(dá)到顯著水平的添加量。

3.2 GML 及其與FA 復(fù)配對仔豬血清生化指標(biāo)的影響 動物機(jī)體新陳代謝機(jī)能和組織細(xì)胞通透性的改變最終反映在血清生化指標(biāo)的改變上 （蔣小豐等，2009）。血清BUN 是體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的產(chǎn)物，BUN 含量降低表明氮沉積增加。 本研究中，抗生素組的BUN 含量顯著降低，表明抗生素能提高蛋白質(zhì)代謝的利用率。 TP 和ALB 含量反映了機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收和代謝狀況 （鄭有秀等，2018）。血清GLU 含量分別反映出機(jī)體糖代謝情況。 血清中 ALT 和 AST 的水平高低反映了肝臟是否受到損傷以及損傷程度（王吉等，2017）。血清 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 含量是衡量機(jī)體脂類代謝的重要指標(biāo)。 本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，GML及其與 FA 復(fù)配對血清 TP、ALB、GLU、BUN、TC、TG、HDL-C、LDL-C 含量及 ALT、AST 活性均無顯著影響。 表明GML 和FA 的添加不會對川藏黑豬仔豬健康狀況和營養(yǎng)物質(zhì)代謝產(chǎn)生負(fù)面影響。

3.3 GML 及其與FA 復(fù)配對仔豬血清抗氧化能力的影響 機(jī)體的健康狀況與抗氧化能力大小存在著密切的聯(lián)系。 體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)包括T-SOD、GSH-Px、CAT 等。 血清 T-AOC 是用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)，可反映機(jī)體所具有的總抗氧化能力，MDA 含量則反映脂質(zhì)過氧化程度。 在蛋雞（劉夢蕓等，2017）、花鱸（孫彩云等，2021）、斷奶羔羊（王賀澤等，2021）上的研究表明，GML 添加能夠提高 T-AOC、SOD 和 GSH-Px 活性，提高機(jī)體抗氧化能力。然而尹彩娜等（2008）研究表明，在小鼠日糧中添加椰子油能顯著提高小鼠血清MDA 濃度， 顯著降低 GSH-Px 活性。 本研究中GML 及其與FA 復(fù)配顯著提高了仔豬血清MDA含量， 單獨(dú)添加GML 還顯著或極顯著降低了血清中的GSH-PX活性和T-AOC，表明GML 可降低仔豬血清總抗氧化能力。出現(xiàn)不同結(jié)果的原因可能與GML 的來源、添加量和試驗(yàn)條件不同有關(guān)。

3.4 GML 及其與FA 復(fù)配對仔豬血清免疫功能的影響 免疫球蛋白是血液和組織液中的一類糖蛋白，由B 細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生， 是介導(dǎo)體液免疫的重要免疫因子。 曠義文等（2018）研究表明，有機(jī)酸和中鏈脂肪酸合用可顯著增加仔豬血清IgG 含量，提高免疫功能。De Keyser 等（2019）報道，仔豬飼喂辛酸和己酸的混合物后，再用脂多糖攻毒，其血清中的IgA 含量顯著高于抗生素組。 本研究結(jié)果也表明，GML 與FA 復(fù)配能提高仔豬血清IgA 和IgG 含量，與前人的研究結(jié)果相同。 細(xì)胞因子是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，IL-6 可刺激 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞和干細(xì)胞增殖， 促進(jìn)B 細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白。TNF-α 能殺傷腫瘤細(xì)胞，參與免疫調(diào)節(jié)（周光炎，2019）。 Kono 等（2004）研究表明，中鏈脂肪酸甘油三酯能保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠腸道損傷， 增強(qiáng)腸道 IL-6 的 mRNA 表達(dá)水平，降低 TNF-α 和 IL-18的表達(dá)水平。 Ren 等（2019）報道，在仔豬飼糧中添加0.64%甲酸、0.25%丙酸和0.2%癸酸， 可緩解大腸桿菌攻毒后的炎性反應(yīng)， 表現(xiàn)為攻毒后9 h 和24 h 血漿 TNF-α 和 IFN-γ 濃度顯著降低。 本研究結(jié)果表明，GML 與FA 復(fù)配提高了仔豬血清IL-6和TNF-α 含量，和前人的報道有所不同，這可能和有機(jī)酸復(fù)合物的種類差異和動物健康狀況有關(guān)。 有機(jī)酸復(fù)合物的免疫調(diào)節(jié)作用可能與其對腸道微生物的影響有關(guān)（Zentek 等，2013），通過腸道微生物和免疫系統(tǒng)的互作，間接影響免疫系統(tǒng)。

4 結(jié)論

GML 及其與FA 復(fù)配取代飼用抗生素對川藏黑豬配套系商品仔豬生長性能無明顯影響， 降低了仔豬抗氧化能力，但提高了仔豬免疫功能。在本試驗(yàn)條件下，GML 與FA 復(fù)配相比于GML 更加有利于仔豬的生長。