孫鈺潔，顏 明

(江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測試中心，江蘇南京 210036)

三環(huán)唑是美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)生產(chǎn)的一種三唑類殺菌劑，有高效、低毒、內(nèi)吸性強(qiáng)等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于水稻稻瘟病的防治。它的作用機(jī)制是抑制病原菌菌絲和附著胞黑色素的生物合成，阻止病原菌侵入和減少孢子的產(chǎn)生。嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，具有高效、廣譜、殺菌活性高等特點(diǎn)，幾乎對所有真菌病害有效[1]。它能夠有效地防治白粉病、霜霉病、稻瘟病等，被廣泛用于谷物、果蔬等作物的病害防治與儲藏保鮮[2]。三環(huán)唑和嘧菌酯復(fù)配產(chǎn)品常用于水稻稻瘟病的防控，且效果顯著[3]。

目前三環(huán)唑和嘧菌酯的檢測方法有液相色譜法[4-7]、氣相色譜法[8,9]，同時(shí)檢測這 2個(gè)組份的方法國內(nèi)文獻(xiàn)未見報(bào)道。本文開發(fā)了一種高效液相色譜法同時(shí)檢測三環(huán)唑和嘧菌酯混劑產(chǎn)品中有效成分含量的方法，以期為該類產(chǎn)品生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供技術(shù)保障。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

甲醇，色譜純(德國默克公司)；超純水(Millipore超純水制備系統(tǒng)自制)；三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品和嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量都為 98.9%，上海市農(nóng)藥研究所)；28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑(江蘇省揚(yáng)州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司)。

1.2 儀器

1100型高效液相色譜儀配G1315B二極管陣列檢測器和色譜工作站(美國安捷倫科技公司)；Zorbax SB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；Millipore超純水制備系統(tǒng)(Millipore公司)；KQ-50B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司) 。

1.3 色譜操作條件

流動(dòng)相：甲醇和水；流速：1.0 mL/min，梯度洗脫過程：0 ～10.0 min，甲醇體積比從40%增加到85%，10.1 ～15.0 min，甲醇體積比從85%降到40%。

柱溫：30 ℃；檢測波長：250 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時(shí)間：三環(huán)唑約5.671 min，嘧菌酯約9.478 min(圖1)。

圖1 28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑的高效液相色譜圖

1.4 樣品溶液的配制

標(biāo)樣溶液：準(zhǔn)確稱取三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g (精確至0.000 1 g)和嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.02 g (精確至0.000 1 g)，置于同一50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻備用。

試樣溶液：稱取28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑試樣0.25 g (精確至0.000 1 g)到50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾備用。

進(jìn)樣測定：在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的峰面積變化小于1.5%后，再按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣分析。

1.5 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標(biāo)樣溶液的峰面積分別進(jìn)行平均，按下式計(jì)算三環(huán)唑和嘧菌酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X)。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中三環(huán)唑(或嘧菌酯)峰面積平均值；A2為試樣溶液中三環(huán)唑(或嘧菌酯)峰面積平均值；m1為三環(huán)唑(或嘧菌酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中三環(huán)唑(或嘧菌酯)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

通過Agilent 1100高效液相色譜儀的二極管陣列檢測器進(jìn)行紫外光譜掃描，得到三環(huán)唑和嘧菌酯的紫外吸收光譜圖(圖2和圖3)。由圖2和圖3可見，嘧菌酯在250 nm左右有一個(gè)較平穩(wěn)段吸收峰，三環(huán)唑在220 nm和280 nm左右有吸收峰，再根據(jù)化合物對紫外波長反應(yīng)靈敏度的大小比較，本方法選擇250 nm為檢測波長。

圖2 三環(huán)唑紫外吸收光譜圖

圖3 嘧菌酯紫外吸收光譜圖

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

比較了甲醇、乙腈和水為流動(dòng)相分離三環(huán)唑和嘧菌酯的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇和乙腈為流動(dòng)相，其分離效果無明顯差異，但考慮到乙腈相對價(jià)格高和實(shí)際生產(chǎn)中成本控制需要，選擇更經(jīng)濟(jì)的甲醇和水做流動(dòng)相。三環(huán)唑和嘧菌酯極性相差較大，用一定比例的甲醇和水作流動(dòng)相，2組分出峰時(shí)間相差很大。因此采用梯度洗脫方法，10 min內(nèi)流動(dòng)相甲醇比例從40%升高到85%，三環(huán)唑在5.6 min左右出峰，嘧菌酯在9.5 min左右出峰，2組分能很好地分離，節(jié)約了分析時(shí)間，獲得滿意結(jié)果。從10 min到15 min流動(dòng)相甲醇比例從85%降到40%平衡柱子，以便下一針分析。

圖4 三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

圖5 嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

圖6 三環(huán)唑、嘧菌酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

2.2 方法線性關(guān)系的測定

稱取三環(huán)唑標(biāo)樣0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g和嘧菌酯標(biāo)樣 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 g (精確至0.000 1 g)分別置于50 mL容量瓶，用甲醇溶劑定容到刻度，搖勻。按上述操作條件進(jìn)行測定。三環(huán)唑?yàn)?.000 40～0.002 00 g/mL、嘧菌酯為0.000 22～0.001 60 g/mL時(shí)有良好線性關(guān)系，以三環(huán)唑或嘧菌酯的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得到三環(huán)唑線性方程為y=3 626 064.690 2x-17.415 8，R2為0.999 5；嘧菌酯線性方程為y=6 142 686.771 2x-103.599 6，R2為0.999 6 (圖7)?？梢?，在該方法條件下，三環(huán)唑或嘧菌酯濃度與其響應(yīng)值之間表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。

圖7 三環(huán)唑、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與其響應(yīng)值線性關(guān)系圖

2.3 方法精密度測定

稱取同一批次28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑6個(gè)樣品，用1.4節(jié)方法處理樣品，在1.3節(jié)色譜操作條件下進(jìn)行分析，結(jié)果見表1?？梢?，三環(huán)唑和嘧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.065 9和0.056 2，變異系數(shù)分別為0.33%和0.69%，說明該方法精密度高，重現(xiàn)性很好。

表1 方法的精密度試驗(yàn)

2.4 方法準(zhǔn)確度測定

稱取同一批次已知含量的 28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑(三環(huán)唑含量 20.13%，嘧菌酯含量 8.11%)樣品5份，并在樣品中添加一定數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)品。在上述操作條件下進(jìn)行測定，結(jié)果見表2?？梢?，三環(huán)唑的加標(biāo)回收率為98.29%～101.16%，平均加標(biāo)回收率為 100.29%；嘧菌酯的加標(biāo)回收率為 98.37%～101.23%，平均加標(biāo)回收率為 99.77%，說明該方法回收率好，準(zhǔn)確度高。

表2 方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

續(xù)表2

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜儀建立了同時(shí)測定 28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑產(chǎn)品中2種有效成分的方法。該方法具有精密度好、準(zhǔn)確度高、分離效果好、操作簡便、經(jīng)濟(jì)環(huán)保等特點(diǎn)，是28%三環(huán)唑·嘧菌酯懸浮劑產(chǎn)品質(zhì)量控制、檢驗(yàn)的理想分析方法，同時(shí)也為同類農(nóng)藥品種不同劑型產(chǎn)品的檢測提供技術(shù)參考。