謝學(xué)剛，魏 峰，2，3，張玉順，王星燁，霍建華，王亭忠，馬愛(ài)群

（1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院結(jié)構(gòu)性心臟病科，陜西西安 710061；2.環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710061；3.陜西省分子心臟病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710061；4.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，陜西西安 710061）

長(zhǎng)QT綜合征（long QT syndrome,LQTs）是一種心電圖表現(xiàn)為QT間期延長(zhǎng)、易發(fā)生如尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速（Torsades de Pointes,TdP）等惡性室性心律失常而導(dǎo)致暈厥及心源性猝死的心臟離子通道病[1]。在某些病理狀態(tài)（如心肌病、心肌缺血、心肌炎等）、藥物（如抗心律失常藥物、抗生素、抗腫瘤藥、精神類(lèi)藥等）、環(huán)境（如電解質(zhì)紊亂、有機(jī)磷中毒、酗酒等）等影響下，可誘發(fā)QT間期延長(zhǎng)并繼發(fā)Td P等惡性心律失常，造成嚴(yán)重的不良后果。

目前臨床上仍缺乏可直接顯著縮短QT間期的LQTs治療藥物，篩選或開(kāi)發(fā)能夠直接縮短QT間期的小分子化合物或藥物一直是該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本研究組同期在篩選小分子化合物抗心律失常的研究中發(fā)現(xiàn)：胰島素可顯著縮短人誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞（human induced pluripotent stem cells derived cardiomyocytes,hiPSC-CMs）的閾電位時(shí)程（field potential duration,FPD，類(lèi)似心電圖的QT間期）及FPDc（類(lèi)似心電圖的QTc），并且顯著降低hERG通道阻滯劑E4031所誘發(fā)的心律失常風(fēng)險(xiǎn)。本研究可為闡明胰島素對(duì)人心肌細(xì)胞電生理特性的影響及其改善相關(guān)因素所致的QT間期延長(zhǎng)與心律失常發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Maestro微電極矩陣（microelectrode array,MEA）記錄系統(tǒng)、MEA細(xì)胞培養(yǎng)板購(gòu)自美國(guó)Axion Biosystems，IXplore型熒光倒置顯微鏡購(gòu)于日本Olympus，CytoFLEX流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Beckman Coulter。Fibronectin購(gòu)自美國(guó)Roche Life Science，E4031和DMSO（dimethyl sulfoxide）購(gòu)自美國(guó)Millipore Sigma。hiPSC-CMs、Plating細(xì)胞培養(yǎng)基和Maintenance細(xì)胞培養(yǎng)基均購(gòu)自美國(guó)CDI（Fujifilm Cellular Dynamics International），cTnT抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam。

1.2 hiPSC-CMs的培養(yǎng)與接種

hiPSC-CMs來(lái)自于CDI的iCell Cardiomyocytes2細(xì)胞株，為健康個(gè)體來(lái)源，細(xì)胞培養(yǎng)按照CDI推薦的方法進(jìn)行：接種前，使用Fibronectin（50μg/mL）預(yù)處理MEA培養(yǎng)板，37℃、50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)板1 h備用。復(fù)蘇細(xì)胞，37℃水浴3 min后將1 mL的細(xì)胞懸液從凍存管轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，并用1 mL Plating細(xì)胞培養(yǎng)基沖洗凍存管后逐滴滴入離心管中，再另吸取3 mL Plating培養(yǎng)基逐滴滴入50 mL離心管中，計(jì)數(shù)細(xì)胞。1 250 r/min離心5 min，調(diào)整細(xì)胞密度至1×107/mL，于Fibronectin預(yù)處理的48孔MEA培養(yǎng)板中每孔滴種5μL細(xì)胞懸液（需滴種在每孔電極交叉的中央位置），于培養(yǎng)箱中孵育3 h，每孔加入300μL的Maintenance細(xì)胞培養(yǎng)基，每48 h換液，1周后行藥物干預(yù)處理。

1.3 hiPSC-CM s細(xì)胞純度的評(píng)價(jià)

采用流式細(xì)胞術(shù)分析心肌標(biāo)志物cTnT在hiPSCCMs中的表達(dá)進(jìn)行細(xì)胞評(píng)價(jià)。hiPSC-CMs復(fù)蘇后按4×106/孔的細(xì)胞密度接種于10μg/mL Fibronectin處理過(guò)的6孔板中，培養(yǎng)1周至細(xì)胞達(dá)90%匯合后，PBS清洗2次，胰酶消化3～5 min，1 250 r/min離心5 min，PBS沖洗，40 g/L多聚甲醛固定30 min，PBS沖洗，2 mL/L的TritonX-100處理15 min，PBS沖洗，按照1∶100比例稀釋加入1μL cTnT一抗，室溫孵育2 h；PBS沖洗，按照1∶500比例稀釋加入1μL熒光二抗FITC，室溫孵育2 h，PBS沖洗，重懸細(xì)胞后于流式細(xì)胞儀上分析。

1.4 免疫熒光檢測(cè)cTn T在hiPSC-CMs中的表達(dá)

hiPSC-CMs復(fù)蘇后種植于經(jīng)50μg/mL Fibronectin預(yù)處理的18 mm×18 mm蓋玻片上，培養(yǎng)1周后，40 g/L多聚甲醛固定，2 mL/L Triton-X 100穿膜15 min，50 g/L牛血清白蛋白（BSA）封閉30 min。一抗cTnT按照1∶100稀釋后加入，于4℃過(guò)夜孵育。PBS沖洗后，熒光二抗FITC按照1∶500稀釋后加入，室溫孵育1 h，DAPI復(fù)染，封片，熒光顯微鏡觀(guān)察。

1.5 MEA檢測(cè)hiPSC-CMs的電活動(dòng)

hiPSC-CMs培養(yǎng)2 d，可行MEA實(shí)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞電活動(dòng)；培養(yǎng)6 d，hiPSC-CMs電生理參數(shù)趨于穩(wěn)定；培養(yǎng)7 d，hiPSC-CMs分為兩組（未干預(yù)組：正常培養(yǎng)基，即NM組或?qū)φ战M；干預(yù)組：正常培養(yǎng)基+胰島素干預(yù)，即NM+INS組），分別檢測(cè)其電活動(dòng)。檢測(cè)過(guò)程：打開(kāi)軟件，打開(kāi)控制Maestro電極接觸槽（底部可加熱且槽內(nèi)通入50 mL/L CO2）的溫度和CO2控件，待溫度穩(wěn)定在37℃，CO2穩(wěn)定在50 mL/L時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)板放入Maestro電極接觸槽內(nèi)，穩(wěn)定平衡10 min，記錄整個(gè)培養(yǎng)板所有孔及孔中每個(gè)電極檢測(cè)到的細(xì)胞電活動(dòng)，每次記錄3 min。將記錄的文件導(dǎo)入到數(shù)據(jù)分析軟件CiPA Analysis中，手動(dòng)確定每孔記錄到電波的T波頂點(diǎn)位置以確定FPD，同時(shí)分析判定有無(wú)心律失常以及心律失常類(lèi)型[2]（包括A、B、C、D共4種類(lèi)型），軟件再依據(jù)T波頂點(diǎn)位置可自動(dòng)計(jì)算出FPD值、心跳間期（beat period，BP，相當(dāng)于心電圖的R-R間期）、鋒電位（spike amplitude）、傳導(dǎo)速率（conduction velocity,CV）；并進(jìn)而根據(jù)BP計(jì)算出心率（heart rate，HR，即HR=60/BP），根據(jù)FPD及BP計(jì)算出FPDc（FPDc=FPD/BP1/3）。

1.6 藥物干預(yù)hiPSC-CMs及實(shí)驗(yàn)分組

在評(píng)價(jià)hiPSC-CMs對(duì)快速激活延遲整流鉀電流（IKr）阻滯劑E4031的反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，正常培養(yǎng)基（NM）培養(yǎng)的hiPSC-CMs分為3組，分別給予1、10、100 nmol/L的E4031進(jìn)行干預(yù)。

在探討胰島素對(duì)E4031誘發(fā)hiPSC-CMs的FPD延長(zhǎng)及心律失常影響的實(shí)驗(yàn)中，hiPSC-CMs分為胰島素干預(yù)組（NM+10 mg/L胰島素干預(yù)，即NM+INS組）和未干預(yù)組（NM培養(yǎng)，即NM組）；分別處理5 d后，NM+INS和NM組分別再分為5組，分別給予DMSO、各濃度E4031（3、10、30、100 nmol/L）的干預(yù)。

藥物E4031干預(yù)兩組（NM+INS組與NM組）hiPSC-CMs時(shí)，干預(yù)前16 h，兩組細(xì)胞培養(yǎng)液完全更換為各自新鮮培養(yǎng)基（NM+INS與NM）270μL，按照MEA檢測(cè)流程記錄基線(xiàn)的MEA數(shù)據(jù)，每孔加入30μL E4031（濃度為最終工作濃度的10倍）干預(yù)，每10 min記錄1次MEA數(shù)據(jù)，每次記錄3 min，共記錄1 h，分析加入藥物后30 min的數(shù)據(jù)以評(píng)價(jià)藥物的作用。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用（±s）表示，hiPSC-CMs培養(yǎng)過(guò)程中各電生理參數(shù)變化的比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)，比較其他不同時(shí)間點(diǎn)與培養(yǎng)6 d時(shí)參數(shù)的差異；E4031干預(yù)hiPSC-CMs后FPD及FPDc變化的組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組心律失常發(fā)生的孔數(shù)比較采用Fisher確切概率法；胰島素干預(yù)hiPSC-CMs前后各電生理參數(shù)的組間比較采用兩因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。心律失常的分析經(jīng)過(guò)軟件自動(dòng)分析與人工再次分析確認(rèn)，若一組中≥3/5個(gè)孔出現(xiàn)心律失常，則不再分析FPD及FPDc（心律失常影響FPD分析的準(zhǔn)確性），只標(biāo)注并比較心律失常發(fā)生的孔數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 hiPSC-CMs的形態(tài)學(xué)特征及純度分析

hiPSC-CMs接種培養(yǎng)48 h，鏡下觀(guān)察即可見(jiàn)局部hiPSC-CMs不規(guī)律的收縮活動(dòng)，培養(yǎng)96 h可觀(guān)察到多處hiPSC-CMs規(guī)律的收縮活動(dòng)，培養(yǎng)6～7 d，可見(jiàn)hiPSC-CMs連接成片、大范圍的統(tǒng)一規(guī)律的收縮活動(dòng)，此時(shí)hiPSC-CMs多呈類(lèi)圓形、橢圓形或類(lèi)短桿狀，細(xì)胞體積大，單核或雙核，核多居中，胞質(zhì)體積較大，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)整齊排列的肌節(jié)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞高表達(dá)心肌標(biāo)志物肌鈣蛋白T，細(xì)胞間相互連接，呈均勻分布，無(wú)序排列（圖1A）。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，97.06%的hiPSC-CMs表達(dá)心肌肌鈣蛋白T（圖1B）。

圖1 培養(yǎng)hiPSC-CMs的形態(tài)學(xué)特征及純度分析Fig.1 Morphological characteristics and purification of hiPSC-CMs

2.2 hiPSC-CMs的電生理特征

hiPSC-CMs復(fù)蘇后接種于48孔MEA細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)2 d即可檢測(cè)到部分孔中不規(guī)則的電活動(dòng)，培養(yǎng)4 d可檢測(cè)到大部分孔中較規(guī)則的電活動(dòng)，培養(yǎng)6 d可檢測(cè)到全部孔中規(guī)則的電活動(dòng)。電生理參數(shù)分析顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，F(xiàn)PD從2 d時(shí)299 ms延長(zhǎng)至10 d時(shí)的474 ms，培養(yǎng)6 d時(shí)的FPD與8 d、10 d（449、468、474 ms）時(shí)無(wú)明顯差異（圖2A、圖2B）；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，hiPSC-CMs的HR逐漸減慢，從2 d時(shí)55次/min（beat per minute,bpm）降低至10 d時(shí)的33 bpm，培養(yǎng)8 d、10 d時(shí)的HR與6 d時(shí)無(wú)明顯差異（圖2C）；FPDc也隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而延長(zhǎng)，從2 d時(shí)291 ms延長(zhǎng)至10 d時(shí)的390 ms，培養(yǎng)6、8、10 d時(shí)FPDc（381、387、390 ms）無(wú)明顯差異（圖2D）；鋒電位也隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，從2 d時(shí)0.79 mV增加至10 d時(shí)的3.73 mV，培養(yǎng)6、8、10 d時(shí)鋒電位（3.8、3.6、3.73 mV）無(wú)明顯差異（圖2E）；培養(yǎng)過(guò)程中傳導(dǎo)速率無(wú)明顯變化，CV波動(dòng)于0.22～0.24 mm/ms（圖2F）。

圖2 培養(yǎng)hiPSC-CMs的電生理特征Fig.2 Electrophysiological characteristics of hiPSC-CMs

2.3 hiPSC-CMs對(duì)I Kr阻滯劑的反應(yīng)

為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)hiPSC-CMs的電生理功能，使用IKr阻滯劑E4031干預(yù)hiPSC-CMs。結(jié)果顯示，1 nmol/L的E4031對(duì)hiPSC-CMs的FPD及FPDc無(wú)明顯影響（P＞0.05）；10 nmol/L的E4031可明顯延長(zhǎng)hiPSC-CMs的FPD（ms）（440.0±21.7vs.635.2±38.6，P＜0.001）及FPDc（ms）（380.4±12.8vs.528.8±27.5，P＜0.001）；100 nmol/L的E4031則誘發(fā)hiPSCCMs發(fā)生嚴(yán)重心律失常（圖3）?？梢?jiàn)，hiPSC-CMs對(duì)IKr阻滯劑的反應(yīng)與臨床結(jié)果一致，且此效應(yīng)呈劑量依賴(lài)性。

圖3 I Kr阻滯劑E4031干預(yù)培養(yǎng)hiPSC-CMs時(shí)FPD（A）和FPDc（B）的變化Fig.3 Changes of FPD and FPDc of hiPSC-CMs with treatment of I Kr blocker E4031

2.4 胰島素對(duì)hiPSC-CMs電生理特征的影響

hiPSC-CMs經(jīng)10 mg/L胰島素處理5 d，處理與未處理組的HR較5 d前均減慢，處理組HR從處理前的（32.8±0.6）bpm降低至處理后的（27.4±1.6）bpm，而未處理組從5 d前的（32.2±0.8）bpm降低至（23.1±0.9）bpm，但處理組相對(duì)未處理組HR增快（11.9±3.3）%（圖4A）；經(jīng)胰島素處理后，處理組FPD在處理前后無(wú)明顯變化[（470.4±6.4vs.470.0±19.6）ms]，未 處 理 組 從（471.6±24.7）ms延 長(zhǎng) 至（578.6±47.4）ms，處理組相對(duì)未處理組FPD縮短（22.7±2.8）%（圖4B）；胰島素處理后，處理組FPDc處理前后縮短[（384.8±4.0vs.361.9±9.7）ms]，未處理組延長(zhǎng)[（383.4±21.2vs.420.8±34.8）ms]，處理組相對(duì)未處理組FPDc縮短（15.6±1.6）%（圖4C）；胰島素處理后，處理組與未處理組鋒電位均較處理前增加[（2.6±0.3vs.4.2±0.4）mV、（2.4±0.6vs.3.0±0.4）mV],處理組較未處理組增加了（39.1±7.9）%（圖4D）；胰島素處理后，處理組與未處理組hiPSC-CMs在處理前后的CV無(wú)明顯變化（圖4E）。

經(jīng)胰島素處理后的hiPSC-CMs再給予IKr阻滯劑E4031干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胰島素顯著縮短了E4031誘發(fā)hiPSC-CMs的FPDc延長(zhǎng)，并降低了其誘發(fā)的心律失常風(fēng)險(xiǎn)。3 nmol/L的E4031使對(duì)照組（NM組）的FPDc延長(zhǎng)（20.3±5.4）%，而胰島素處理組（NM+INS組）的FPDc延長(zhǎng)（12.2±1.5）%，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；10 nmol/L的E4031使對(duì)照組FPDc延長(zhǎng)（37.8±9.0）%，而胰島素處理組的FPDc延長(zhǎng)（21.8±3.1）%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；30 nmol/L的E4031使對(duì)照組hiPSC-CMs的FPDc延長(zhǎng)（95.9±10.6）%，且2個(gè)孔誘發(fā)出了心律失常，而胰島素處理組FPDc延長(zhǎng)（40.8±4.9）%，各孔均未誘發(fā)出心律失常，兩組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；100 nmol/L的E4031干預(yù)后，對(duì)照組各孔均誘發(fā)出了嚴(yán)重的心律失常，但胰島素處理組僅2個(gè)孔誘發(fā)出心律失常，其FPDc延長(zhǎng)（59.6±6.2）%，兩組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。同時(shí)，E4031誘發(fā)兩組FPDc延長(zhǎng)及心律失常的發(fā)生均呈現(xiàn)出藥物的劑量效應(yīng)關(guān)系（圖4F）。

圖4 胰島素對(duì)培養(yǎng)hiPSC-CM s電生理特性的影響Fig.4 Impact of insulin on electrophysiology of hiPSC-CMs

3 討 論

目前臨床上缺乏可直接顯著縮短心肌QT間期而治療LQTs的藥物。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)lurandrenolide可縮短斑馬魚(yú)I59S突變（蛋白運(yùn)輸障礙）LQT 2模型的動(dòng)作電位時(shí)程[3]；HUO等[4]在以HEK293細(xì)胞為模型的研究中發(fā)現(xiàn)，NS1643可增加G604S突變（蛋白折疊運(yùn)輸障礙）的Ikr電流表達(dá)，可能對(duì)LQT 2治療有效。但這些研究結(jié)果未能在人心肌細(xì)胞中得到驗(yàn)證，且既往研究LQTs突變基因表達(dá)所用的異質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)（HEK293細(xì)胞或爪蟾卵母細(xì)胞）和遺傳動(dòng)物模型不能完全代表存在明顯差別而又具有復(fù)雜電生理特征的人心肌細(xì)胞[5]。隨著人誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞來(lái)源的心肌細(xì)胞技術(shù)的成熟，hiPSC-CMs已成為體外研究遺傳性心臟疾病[6-9]（LQTs、Brugada綜合征、肥厚型心肌病、左室致密化不全心肌病等）及進(jìn)行藥物篩選的新平臺(tái)[2,10]，該模型已體現(xiàn)出促進(jìn)臨床直接轉(zhuǎn)化的特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

本研究以hiPSC-CMs為模型發(fā)現(xiàn)，胰島素可以顯著縮短hiPSC-CMs的FPD（類(lèi)似心電圖QT間期）及FPDc（類(lèi)似心電圖QTc），并且顯著降低hERG通道阻滯劑E4031所誘發(fā)的FPD延長(zhǎng)及心律失常風(fēng)險(xiǎn)，提示臨床上已安全應(yīng)用的胰島素可以直接縮短心肌QT間期而可能發(fā)揮治療LQTs的作用。同時(shí)相關(guān)臨床研究也發(fā)現(xiàn)66.7%的1型糖尿病和51.3%的2型糖尿病患者心電圖QTc明顯延長(zhǎng)[11]，而合并糖尿病的急性心肌梗死患者輸注胰島素治療24 h后，可改善QTc延長(zhǎng)[12]。也有基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)胰島素可有效縮短糖尿病兔心肌細(xì)胞模型延長(zhǎng)的動(dòng)作電位時(shí)程[13]。這些也提示胰島素具有縮短心肌QTc的作用，這與本研究結(jié)果相一致。這些發(fā)現(xiàn)為胰島素治療獲得性或遺傳性L(fǎng)QTs奠定了理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。但胰島素同時(shí)可降低血糖，臨床應(yīng)用存在致低血糖風(fēng)險(xiǎn)。因此，進(jìn)一步對(duì)胰島素縮短hiPSC-CMs的QT間期及降低心律失常風(fēng)險(xiǎn)的作用機(jī)制與通路進(jìn)行深入研究，將為發(fā)現(xiàn)新的靶點(diǎn)及針對(duì)新靶點(diǎn)而篩選或開(kāi)發(fā)新藥用以治療LQTs奠定基礎(chǔ)，這將避免應(yīng)用胰島素時(shí)對(duì)血糖的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)在胰島素干預(yù)hiPSC-CMs的5 d時(shí)，對(duì)照組（未干預(yù)組）的FPD及FPDc延長(zhǎng)，HR顯著減慢，鋒電位與CV無(wú)顯著變化。而胰島素干預(yù)組HR也較前減慢，F(xiàn)PD及FPDc干預(yù)前后無(wú)明顯變化，但相對(duì)對(duì)照組卻明顯縮短，鋒電位于干預(yù)后明顯增加。這提示，隨著hiPSC-CMs培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，hiPSC-CMs本身存在心率逐漸減慢，F(xiàn)PD及FPDc逐漸延長(zhǎng)的電生理過(guò)程，這可能是細(xì)胞逐漸趨于成熟的一種電生理改變。LUNDY等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，hiPSC-CMs心率逐漸減慢，APD90也逐漸延長(zhǎng)，當(dāng)培養(yǎng)至80～120 d時(shí)，HR減慢至（9.3±3.1）bpm，APD90延長(zhǎng)至（188.9±35.8）ms；同時(shí)細(xì)胞體積、肌纖維大小與排列、肌節(jié)等結(jié)構(gòu)明顯趨于成熟。其他研究也提示長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)有利于hiPSC-CMs結(jié)構(gòu)與功能的成熟[15-16]。

本研究發(fā)現(xiàn)，hiPSC-CMs在培養(yǎng)過(guò)程中，HR隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減慢，F(xiàn)PD及FPDc逐漸延長(zhǎng)，鋒電位逐漸增加，CV無(wú)明顯變化；而這些電生理參數(shù)的變化基本在6～10 d達(dá)到穩(wěn)態(tài)，提示此時(shí)可能是藥物干預(yù)的最佳時(shí)機(jī)。因此，本研究在hiPSC-CMs培養(yǎng)7 d時(shí)給予胰島素及其他藥物干預(yù)。同時(shí)，本研究為了降低HR對(duì)FPD的影響，采用經(jīng)HR校正的FPDc，且本研究中FPDc采用其他研究普遍采用的FPDc=FPD/BP1/3公式計(jì)算，而非類(lèi)似于臨床QTc計(jì)算的FPDc=FPD/BP1/2，主要考慮到hiPSC-CMs自身基礎(chǔ)心率較慢（約30～50 bpm），采用FPDc=FPD/BP1/2校正將帶來(lái)較大偏差。同時(shí)也可采用起搏模式使各培養(yǎng)孔中的hiPSC-CMs按同一頻率起搏，以去除HR對(duì)FPD的影響，且最新研究也證實(shí)了電刺激可有效地降低hiPSC-CMs對(duì)離子通道阻滯劑反應(yīng)的變異性[17]。

本研究在篩選小分子化合物抗心律失常的基礎(chǔ)上，明確提出胰島素可顯著縮短hiPSC-CMs的FPD/FPDc，并顯著降低hERG通道阻滯劑所誘發(fā)的FPD/FPDc延長(zhǎng)及心律失常風(fēng)險(xiǎn)，為胰島素治療獲得性或遺傳性L(fǎng)QTs奠定了部分理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。后續(xù)進(jìn)一步的機(jī)制研究將為闡明胰島素縮短QT間期而發(fā)揮抗心律失常作用的分子通路機(jī)制奠定基礎(chǔ)。