周玲 符梅沙 喻燦陽

臨床上胎膜早破的發(fā)生能夠?qū)е略挟a(chǎn)婦不良臨床結(jié)局的發(fā)生，其能夠通過誘導(dǎo)宮腔感染、胎兒宮內(nèi)窘迫，進(jìn)而增加新生兒圍產(chǎn)期死亡的風(fēng)險［1］。在具有妊娠期糖尿病或者雙胎妊娠的孕產(chǎn)婦中，胎膜早破的發(fā)生率可進(jìn)一步上升［2］。在研究胎膜早破發(fā)病機(jī)理的過程中，可以發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子的改變，能夠在胎膜早破的病情進(jìn)展過程中發(fā)揮作用。β2 防御素（beta2 defensin，HBD?2）的表達(dá)上升，能夠通過作為應(yīng)激反應(yīng)的效應(yīng)因子，參與到炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激性損傷過程，最終促進(jìn)胎膜組織的損傷［3］；孕酮受體膜組分1（progesterone receptor mem?brane components 1，pgrmc1）能夠通過影響到孕激素受體的敏感性，干預(yù)到孕激素受體的生理效應(yīng)［4］；缺氧誘導(dǎo)因子1α（Hypoxia inducible factor 1 α，HIF 1α）是缺氧條件下的炎癥反應(yīng)因子，其對于下游腫瘤壞死因子等的激活，能夠加劇胎膜及胎盤組織的炎癥性損傷，促進(jìn)胎膜早破的病情進(jìn)展［5］。為了揭示HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 在胎膜早破孕產(chǎn)婦體內(nèi)的變化意義，從而為臨床上胎膜早破的病情評估提供參考，本次研究探討了HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 水平的表達(dá)情況與胎膜早破患者關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 一般資料

選取2019年2月至2020年8月在?？谑协偵絽^(qū)婦幼保健院接受治療的50 例胎膜早破孕產(chǎn)婦為胎膜早破組。年齡23～40 歲，平均（27.45±2.58）歲納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華婦產(chǎn)科學(xué)（第3 版）［6］中胎膜早破的標(biāo)準(zhǔn)：孕婦出現(xiàn)陰道流液，窺陰器檢查見羊水自宮頸口流出，且陰道酸堿度測定pH 值升高；②年齡≥18 周歲；③首次妊娠者；④均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有精神異常；②合并凝血功能障礙者；③伴有心血管、內(nèi)分泌及風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病者。選取50 例健康原產(chǎn)婦為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18 周歲；②首次妊娠，③無嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者，排除標(biāo)準(zhǔn)同胎膜早破組，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)共納入50 例，年齡25～41 歲，平均（28.01±3.01）歲。本項(xiàng)研究經(jīng)倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有入試者均知情同意。

1.2 研究方法

采用一次性靜脈血采集器進(jìn)行肘部靜脈血采集，采集5 mL 靜脈血后自然放置，取上清液體進(jìn)行檢測。采用貝克曼庫爾特公司UniCel DxI 800 免疫發(fā)光儀器進(jìn)行HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 的檢測，配套試劑盒購自北京九強(qiáng)生物公司，批號20190112。

采用ELISA 法進(jìn)行白細(xì)胞介素?6（interleukin?6，IL?6）、高敏C 反應(yīng)蛋白（high?sensitivity C?reactive protein，CRP）、T 血清腫瘤壞死因子（serum tumor ne?crosis factor，TNF?α）的檢測，采用十字交叉的方法進(jìn)行抗原濃度的測定，采用碳酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原稀釋，加入96 孔的酶標(biāo)板中，蓋好酶標(biāo)板蓋后置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5 min，輕輕叩擊酶標(biāo)板甩干。每孔中加入5%的脫脂牛奶200 μL，置于4℃冰箱過夜，蒸餾水沖洗3 次，每次5 min，加入稀釋好的抗體，蒸餾水沖洗3 次，每次5 min，每孔中加入100 μL 的底物，顯色后在酶標(biāo)儀上進(jìn)行吸光度的檢測，酶標(biāo)抗體均由南京建成生物研究所提供。

1.3 評價指標(biāo)

兩組HBD?2、pgrmc1、HIF 1α、炎癥因子（IL?6、CRP、TNF?α）水平，并分析胎膜早破患者HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 與炎癥因子水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計分析

采用SPSS 11.5 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計量資料用（±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)。Pearson 相關(guān)分析法分析胎膜早破患者HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 與IL?6、CRP、TNF?α水平的相關(guān)性。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象的基線資料比較

對比胎膜早破組和對照組的年齡、孕前BMI、心率、收縮壓、舒張壓情況，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 兩組研究對象的基線資料比較（±s）Table 1 Comparison of baseline data of two groups of subjects（±s）

表1 兩組研究對象的基線資料比較（±s）Table 1 Comparison of baseline data of two groups of subjects（±s）

組別胎膜早破組對照組t 值P 值n 50 50年齡（歲）27.45±2.58 28.01±3.01-0.999 0.320孕前BMI（kg/m2）22.81±1.44 22.56±1.81 0.764 0.447心率（次/min）74.84±7.55 72.91±7.26 1.303 0.196收縮壓（mmHg）113.75±8.50 112.41±7.82 0.820 0.414舒張壓（mmHg）68.56±6.60 70.20±7.51-1.160 0.249

2.2 兩組HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 水平的比較

胎膜早破組患者的HBD?2、HIF 1α 水平高于對照組，pgrmc1 水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 水平的比較（±s）Table 2 Comparison of the levels of HBD?2，pgrmc1 and HIF 1α between the two groups（±s）

表2 兩組HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 水平的比較（±s）Table 2 Comparison of the levels of HBD?2，pgrmc1 and HIF 1α between the two groups（±s）

組別胎膜早破組對照組t 值P 值n 50 50 HBD?2（ng/L）658.17±13.64 420.42±9.67 100.547<0.05 pgrmc1 0.46±0.09 0.84±0.11-18.906<0.05 HIF 1α（pg/mL）96.27±8.35 52.34±6.03 30.159<0.05

2.3 兩組炎癥因子水平的比較

胎膜早破組患者的IL?6、CRP、TNF?α 水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 兩組研究對象炎癥因子水平的比較（±s）Table 3 Comparison of the levels of inflammatory factors in two groups of subjects（±s）

表3 兩組研究對象炎癥因子水平的比較（±s）Table 3 Comparison of the levels of inflammatory factors in two groups of subjects（±s）

組別胎膜早破組對照組t 值P 值n 50 50 IL?6（mg/L）38.03±2.14 12.11±3.28 46.799<0.05 CRP（mg/L）65.48±5.25 15.23±2.97 58.907<0.05 TNF?α（ng/L）94.62±9.04 10.53±3.25 61.896<0.05

2.4 胎膜早破患者HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 與炎癥因子水平的相關(guān)性

胎膜早破患者HBD?2、HIF 1α 水平與IL?6、CRP、TNF?α 水平正相關(guān)，pgrmc1 與IL?6、CRP、TNF?α 水平負(fù)相關(guān)（P<0.05）。見表4。

表4 胎膜早破患者HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 與炎癥因子水平的相關(guān)性Table 4 Correlation of HBD?2，pgrmc1，HIF 1α and inflammatory factor levels in patients with premature rupture of membranes

3 討論

不同病理性因素導(dǎo)致的胎膜組織張力的改變，或者胎膜機(jī)械性損傷因素導(dǎo)致的纖維間質(zhì)的損害，均能夠促進(jìn)胎膜早破的發(fā)生。在不同孕周中胎膜早破的發(fā)生，能夠通過影響到羊水量的改變，加劇羊水性狀的改變，最終影響到新生兒臨床結(jié)局［7］。在臨床隨訪觀察過程中，可以發(fā)現(xiàn)胎膜早破的發(fā)生能夠通過誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的激活，從而增加產(chǎn)褥期感染或者圍產(chǎn)期宮內(nèi)感染風(fēng)險。越來越多的研究關(guān)注到，不同細(xì)胞因子的改變，能夠在炎癥反應(yīng)的激活和胎膜組織損傷過程中發(fā)揮作用。超敏C 反應(yīng)蛋白或者降鈣素原能夠在胎膜早破的發(fā)生過程中起到作用，但對于超敏C反應(yīng)蛋白等指標(biāo)的分析，并不能完全揭示胎膜早破的發(fā)生機(jī)理［8］。本次研究對于胎膜早破孕產(chǎn)婦血清中HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 的表達(dá)分析，能夠在揭示胎膜早破的部分發(fā)病機(jī)理的同時，為臨床上胎膜早破遠(yuǎn)期病情的評估提供依據(jù)。

HBD?2 作為防御素相關(guān)因子，其在病原體感染入侵的過程中可以顯著釋放，釋放的HBD?2 能夠在機(jī)體T 淋巴細(xì)胞功能免疫激活、組織細(xì)胞損傷修復(fù)方面發(fā)揮作用?；A(chǔ)機(jī)制領(lǐng)域的分析還表明，HBD?2 還能夠提高血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，提高炎癥性因子的擴(kuò)散風(fēng)險［9］；pgrmc1 是孕激素受體調(diào)控因子，其對于孕激素生理效應(yīng)的影響，能夠影響到胎膜上皮細(xì)胞的損傷修復(fù)能力，促進(jìn)胎膜上皮細(xì)胞的凋亡；HIF 1α 是缺氧誘導(dǎo)因子，其對于下游中性粒細(xì)胞的激活，能夠提高炎癥細(xì)胞對于絨毛膜或者羊膜囊的損傷程度［10?12］。

本次研究發(fā)現(xiàn)在胎膜早破孕產(chǎn)婦血清中，HBD?2、HIF 1α 的表達(dá)濃度明顯的上升，而pgrmc1的表達(dá)濃度明顯的下降，相比于正常孕產(chǎn)婦組，其統(tǒng)計學(xué)差異均較為顯著，HBD?2、pgrmc1、HIF 1α在胎膜早破孕產(chǎn)婦血清中的異常波動，表明其可能在疾病的發(fā)生或者病情進(jìn)展過程中發(fā)揮了調(diào)控作用。HBD?2、HIF 1α 對于胎膜早破的影響，主要在于其能夠提高機(jī)體內(nèi)部炎癥信號通路的激活程度，促進(jìn)下游炎癥性細(xì)胞的上調(diào)程度，最終促進(jìn)羊膜囊、胎膜組織的破壞；pgrmc1 的表達(dá)缺失，失去了對于胎膜組織的保護(hù)作用，導(dǎo)致胎膜張力的改變和胎膜早破的發(fā)生。有少部分研究者也發(fā)現(xiàn)，在胎膜早破孕產(chǎn)婦血清中，HBD?2 的表達(dá)具有顯著的靈敏度，特別是在胎膜早破發(fā)生的6～8 h 內(nèi)，HBD?2 的濃度即可出現(xiàn)明顯的改變［13?15］。IL?6、CRP、TNF?α 是炎癥性相關(guān)指標(biāo)，其能夠通過加劇宮腔感染、絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞的損傷，進(jìn)而誘導(dǎo)胎膜早破孕產(chǎn)婦臨床結(jié)局的惡化。本次研究中，胎膜早破組孕產(chǎn)婦的IL?6、CRP、TNF?α 明顯高于對照組，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，IL?6、CRP、TNF?α 的上升對于病情的影響，主要在于其能夠激活中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞，影響到了機(jī)體的免疫屏障和羊水性質(zhì)，促進(jìn)了新生兒臨床結(jié)局的惡化。相關(guān)關(guān)系分析可見，胎膜早破患者HBD?2、HIF 1α 水平與IL?6、CRP、TNF?α水平正相關(guān)，pgrmc1 與IL?6、CRP、TNF?α 水平負(fù)相關(guān)，提示HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 與胎膜早破孕產(chǎn)婦體內(nèi)的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，這主要由于HBD?2、pgrmc1、HIF 1α 能夠加速病原體的入侵過程，提高組織破壞和繼發(fā)性炎癥反應(yīng)的上調(diào)程度。

綜上所述，胎膜早破患者的HBD?2、HIF 1α 水平較高，pgrmc1 水平較低，且與患者血清炎癥因子水平密切相關(guān)。