(臨沂國眾醫(yī)學(xué)檢驗有限公司，山東 臨沂 276000)

乳腺癌易感基因(Breast cancer susceptibility gene，BRCA)是重要的抑癌基因，包括BRCA1和BRCA2。BRCA在DNA修復(fù)的同源性重組機(jī)制中扮演重要角色，BRCA基因突變會導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定性顯著增加。胚系BRCA1/2突變(gBRCAm)將顯著提高乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌以及其他癌癥的發(fā)病風(fēng)險，且發(fā)病呈年輕化趨勢。相關(guān)研究表明，約5%-10%的乳腺癌和15%-22%的卵巢癌是由BRCA1/2基因突變導(dǎo)致的[1]。BRCA基因致病性突變使女性發(fā)生乳腺癌風(fēng)險提高5倍，發(fā)生卵巢癌風(fēng)險提高10-30倍[2]。因此，通過BRCA基因檢測，了解其狀態(tài)，有助于采取預(yù)防性手術(shù)及評估家屬遺傳風(fēng)險。

1 材料與方法

1.1研究對象 選取2019年8月—2020年6月在本公司實驗室進(jìn)行BRCA基因檢測的乳腺癌患者94例，其中男1例，女93例；年齡26-68歲，平均(41.16±8.93)歲；其中10例有乳腺癌家族遺傳史。

1.2方法 核酸抽提及純度測定：抽取患者靜脈血5 mL，采用北京天根血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，提取后采用超微量核酸蛋白測定儀進(jìn)行DNA濃度及純度測定。文庫制備及NGS測序由杭州聯(lián)川基因診斷技術(shù)有限公司完成。所有核酸序列位置編碼參考美國國家生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站的GenBank上的野生型cDNA序列；采用Blast程序確定檢測的位點是否引起氨基酸編碼改變，把檢測到的位點在乳腺癌信息中心網(wǎng)站上進(jìn)行對照，確定是否為新的突變位點。BRCA基因變異風(fēng)險程度參考《BRCA數(shù)據(jù)解讀中國專家共識》。

2 結(jié)果

94例乳腺癌患者中，共檢測到10例致病性突變，突變率為10.64%，其中2例有乳腺癌家族遺傳史，8例為散發(fā)，二者比較無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.03，P=0.31)。其中6例存在BRCA1基因突變，突變率為6.38%(6/94)；4例存在BRCA2基因突變，突變率為4.26%(4/94)；二者比較無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.42，P=0.516)。所有突變位點均經(jīng)一代測序驗證，結(jié)果一致。突變情況見表1，致病性突變位點測序見圖1。

表1 乳腺癌基因突變位點

圖1 致病性突變的測序圖譜

BRCA1基因中發(fā)現(xiàn)5個突變位點,其中1個為新發(fā)現(xiàn)位點突變c.5511-5524delGGTGTTGGACAGTG(p.Trp1837fs)，且經(jīng)一代測序驗證，結(jié)果一致，該突變?yōu)橐拼a突變，推測導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止；其余4個為已報道的致病點突變(c.212G>A;c.5539T>C)和致病剪切位點突變(c.212+1G>T;c.135-2A>G)，可引起 BRCA1基因轉(zhuǎn)錄后剪切異常，進(jìn)而影響其蛋白功能。

BRCA2基因中發(fā)現(xiàn)3個突變位點，2個為新發(fā)現(xiàn)位點：c.5895delT和c.1498-1499insT，均為移碼突變。c.5895delT(p.His1966fs)推測導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止；c.1498-1499insT (p.Gly500fs)屬于功能缺失性變異，該變異是非重復(fù)區(qū)域內(nèi)單個核苷酸的插入，可能影響蛋白質(zhì)功能。另外1個為已報道的致病性突變c.8504C>A，導(dǎo)致蛋白發(fā)生截短變異。

3 討論

近年來研究表明，BRCA1/2突變在乳腺癌的發(fā)病過程中起著非常重要的作用。BRCA1基因定位于人類染色體17q21，長度約81 kb，BRCA1蛋白和多種相關(guān)蛋白共同作用維持基因組的穩(wěn)定，同時在DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡等機(jī)制中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。BRCA2是一種抑癌基因，位于第13號染色體13q12.3位置，全長84193 bp，編碼3418個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)通過同源重組及部分調(diào)節(jié)RAD51的活性參與DNA損傷的修復(fù)，進(jìn)而阻止癌細(xì)胞的生長發(fā)育[3]。

BRCA基因突變率在不同人群存在較大差異[4-5]。本研究結(jié)果顯示，BRCA1的突變率(6.38%)高于BRCA2(4.26%)，但二者尚無統(tǒng)計學(xué)意義。這可能與人群的選擇及檢測方法不同有關(guān)。本次研究中，有家族遺傳史的乳腺癌患者中有一對母女(9號和10號)發(fā)生了相同的基因突變，提示我們有家族遺傳史的高風(fēng)險人群，應(yīng)及早進(jìn)行基因篩查，提前做好健康管理及干預(yù)，具有非常重要的意義。

總之，本次對94例乳腺癌患者進(jìn)行的BRCA1/2檢測，共發(fā)現(xiàn)3個新的突變位點，這3個位點突變類型均為移碼突變，涵蓋BRCA1和BRCA2基因區(qū)域。這一實驗結(jié)果進(jìn)一步豐富了乳腺癌患者BRCA基因突變譜，也為中國人群BRCA基因相關(guān)研究提供一定的基礎(chǔ)資料，并為未來的臨床基因檢測提供了篩查模式。