夏芳

（蕪湖市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心，安徽蕪湖 241000）

當(dāng)機(jī)體代謝功能紊亂，或近期采食大量高蛋白時(shí)，會導(dǎo)致體內(nèi)產(chǎn)生較多的尿酸鹽，這是鵝發(fā)生痛風(fēng)的一個(gè)重要原因。近期有研究表明，鵝感染星狀病毒也是痛風(fēng)發(fā)生的一個(gè)主要原因，并不是單純的營養(yǎng)代謝性疾病所引起[1-2]。

星狀病毒（astroviruses，AstV）是一種單股無囊膜的RNA病毒，根據(jù)宿主類型不同，可分為哺乳動(dòng)物星狀病毒和禽星狀病毒，其中鵝星狀病毒（goose astrovirus，GAstV）屬于禽星狀病毒[3]。 近幾年，GAstV 嚴(yán)重危害我國鵝養(yǎng)殖業(yè)，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病毒主要侵染21 d內(nèi)的小鵝，發(fā)病高峰在10 d前后，可致雛鵝精神沉郁、采食量減少或食欲廢絕、關(guān)節(jié)腫大，甚至死亡，嚴(yán)重時(shí)其死亡率達(dá)30%甚至更高[4-7]。因此，亟須加強(qiáng)對鵝痛風(fēng)病的診斷與防控。

2020年7月，安徽省蕪湖市繁昌區(qū)一家養(yǎng)鵝場發(fā)生了一起關(guān)節(jié)腫脹、喙部尿酸鹽沉積的疾病，懷疑是鵝痛風(fēng)。筆者通過臨床診斷結(jié)合實(shí)驗(yàn)室PCR診斷的方法，對疾病做出診斷，確認(rèn)該疾病是鵝感染星狀病毒以及飼料營養(yǎng)過剩所引起鵝痛風(fēng)。筆者總結(jié)了診斷與防控過程，以期為基層獸醫(yī)工作者在疾病診斷方面提供參考，從而更好地預(yù)防該疾病，減少鵝痛風(fēng)疾病所帶來的經(jīng)濟(jì)損失。

1 發(fā)病過程與臨床癥狀

養(yǎng)鵝場位于蕪湖市繁昌區(qū)內(nèi)，目前鵝存欄量約1 000只。從4月底開始陸續(xù)發(fā)病，發(fā)病的大多數(shù)是雛鵝。詢問訴主可知，小鵝瘟疫苗、免疫過鵝副黏病毒和禽流感滅活疫苗均已注射過，給雛鵝喂養(yǎng)肉雞飼料。病鵝臨床癥狀主要表現(xiàn)為神情低迷，采食量減退或食欲廢絕，不喜走動(dòng)，病情嚴(yán)重的會不自覺排白色糞便，嚴(yán)重的還出現(xiàn)死亡，場里發(fā)病較為嚴(yán)重。

2 剖檢

剖檢時(shí)在病死鵝的心臟、肝臟等地方可見清晰的尿酸鹽沉積，在腎臟、肝臟表面可見白色斑點(diǎn)，是尿酸鹽沉積所致，輸尿管腫脹并向外擴(kuò)張，有石灰樣內(nèi)容物，病鵝多處關(guān)節(jié)腔可見白色斑點(diǎn)。

3 診斷

結(jié)合訴主交代的發(fā)病經(jīng)過，根據(jù)臨床癥狀以及解剖情況，可初步診斷為鵝痛風(fēng)。為進(jìn)一步確診，在無菌條件下采集發(fā)病雛鵝的腎臟、肝臟等器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室PCR檢測。

3.1 病料采集

鑷子無菌采集病死鵝的腎臟、肝臟，用生理鹽水（NaCl）反復(fù)沖洗3次后，放入高壓滅菌過的試管中，隨后在-80℃冰箱下存放，送往實(shí)驗(yàn)室檢測。

3.2 病毒核酸提取

將采集的適量病料放入含有青霉素和鏈霉素的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）中進(jìn)行研磨，將研磨好的病料放入1.5 mL離心管中，反復(fù)凍融3次。之后使用離心機(jī)，在4℃條件下，設(shè)置轉(zhuǎn)速為12 000 r/min，離心3 min。取300 μL上清液后，置于干凈的1.5 mL EP管中，使用病毒核酸DNA/RNA試劑盒提取病毒RNA，試劑盒購于天根生化科技（北京）有限公司。之后使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄以獲取病毒cDNA作為PCR模板。

3.3 RT-PCR檢測

查閱文獻(xiàn)可知該病毒的ORF2序列能夠作為PCR檢測的靶基因[8]，對病毒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列如下：上游引物F為5'-AGATAGACAGCAGGATT T-3'；下游引物R為5'-CCTTGTCCAGTTGTATTC-3'。產(chǎn)物大小115 bp，引物由上海生工公司合成。PCR反應(yīng)體系見表1。

表1 鵝星狀病毒PCR反應(yīng)體系

擴(kuò)增程序如下：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，60℃退火 30 s，72℃延伸 10 s，共計(jì) 35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠，電泳條件為恒定電壓110 V，時(shí)間30 min，之后使用凝膠成像儀進(jìn)行觀察。

3.4 RT-PCR檢測結(jié)果

以提取的病毒DNA為模板，利用合成的引物成功擴(kuò)增出明亮的115 bp大小的目的片段，與預(yù)期相符（圖1）。PCR產(chǎn)物送公司測序，證實(shí)有鵝星狀病毒感染。結(jié)合臨床癥狀以及實(shí)驗(yàn)室PCR診斷可確認(rèn)該養(yǎng)殖場患有鵝痛風(fēng)。

4 發(fā)病原因

4.1 飼料因素

飼料中鵝能食用的蛋白質(zhì)含量為16%～18%，有些養(yǎng)殖場為了加快雛鵝生長，會投喂雞飼料，但雞飼料中的蛋白質(zhì)含量與鵝所需要的蛋白質(zhì)含量不同，其蛋白質(zhì)量一般在21%以上，會造成雛鵝攝入過多的蛋白質(zhì)，機(jī)體無法代謝，在鵝體內(nèi)大量堆積，尿酸鹽沉積在內(nèi)臟及骨骼上，從而出現(xiàn)痛風(fēng)。

4.2 環(huán)境因素

當(dāng)飼養(yǎng)管理不當(dāng)、通風(fēng)不良、飼養(yǎng)密度過大時(shí)會造成舍內(nèi)有害氣體濃度升高，導(dǎo)致雛鵝抵抗力下降、環(huán)境中病原菌大量繁殖，嚴(yán)重影響雛鵝健康發(fā)展，加重了痛風(fēng)的發(fā)病率。

5 防控措施

5.1 切斷傳播途徑

目前，市面上尚未研究出預(yù)防GAstV的疫苗以及藥物，主要采取以預(yù)防為主的措施防控GAstV。采取封閉式的飼養(yǎng)環(huán)境，與此同時(shí)完善防疫流程，實(shí)施全進(jìn)全出制度。根據(jù)GAstV的傳播方式，定期消毒，及時(shí)對糞便進(jìn)行清理，確保有一個(gè)良好的衛(wèi)生環(huán)境。養(yǎng)鵝場要保持良好的通風(fēng)環(huán)境，需要定期換氣，防止氨氣、硫化氫等有害氣體累積，以免降低雛鵝抵抗力。對進(jìn)出養(yǎng)鵝場的外來車輛、外來人員嚴(yán)格消毒，消毒隔離后方可進(jìn)入養(yǎng)殖場。對于引進(jìn)的雛鵝應(yīng)隔離觀察2周后，若無異常，方可合欄，避免外界的病原體進(jìn)入養(yǎng)殖場，切斷傳染源。若發(fā)現(xiàn)疑似病例，及時(shí)進(jìn)行消毒隔離，防止該病傳播，并限制人員進(jìn)出鵝舍，對養(yǎng)鵝場的地面、水線等進(jìn)行消毒，對患病鵝接觸過的垃圾、糞便做到無害化處理，從根源上切斷傳播途徑，并對發(fā)病鵝采取相應(yīng)的治療方案。

5.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

鵝的每個(gè)生長階段對營養(yǎng)的需求均有差異，飼養(yǎng)者需合理調(diào)整飼料搭配，確保飼料營養(yǎng)全面，禁止喂養(yǎng)雞飼料，不隨意提高飼料中蛋白質(zhì)和鈣的含量。蛋白質(zhì)含量應(yīng)控制在16%～18%，雛鵝才能排出尿酸等代謝產(chǎn)物，避免其在體內(nèi)積累，防止痛風(fēng)發(fā)生。同時(shí)應(yīng)保障飲水充足，發(fā)現(xiàn)霉變飼料盡早丟棄，增加青綠飼料在飼喂料中的百分比。飼養(yǎng)密度不能太大，使雛鵝有充足的活動(dòng)空間，加強(qiáng)雛鵝運(yùn)動(dòng)，以此提高雛鵝對疾病的抵抗力。這些措施可以降低營養(yǎng)代謝型痛風(fēng)的發(fā)病率。

6 結(jié)語

2017年以來，隨著鵝飼養(yǎng)量的增加，我國部分地區(qū)陸續(xù)大范圍出現(xiàn)鵝痛風(fēng)病例，各品種鵝（如長樂灰鵝、揚(yáng)州白鵝、皖西白鵝等）均有發(fā)生[2，9]?；加轩Z痛風(fēng)的雛鵝多表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)遲緩、食欲減退、腹瀉，部分雛鵝腿、翅關(guān)節(jié)腫脹明顯。剖檢病死鵝的肝臟、心臟、腎臟及輸尿管等，可見白色斑點(diǎn)，為尿酸鹽沉積[10]。近年來，有試驗(yàn)表明鵝痛風(fēng)病例中均存在星狀病毒[11]，然而由鵝星狀病毒引起的雛鵝痛風(fēng)，其發(fā)病機(jī)制尚未了解，故一旦發(fā)現(xiàn)該病毒應(yīng)盡快采取隔離、控制、消毒等措施。

根據(jù)訴主描述，該養(yǎng)殖場中一直喂養(yǎng)的是雞飼料，其蛋白質(zhì)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于雛鵝所需要的量，導(dǎo)致蛋白質(zhì)在體內(nèi)聚積，這是雛鵝患鵝痛風(fēng)的一大重要因素。此外，通過實(shí)驗(yàn)室PCR診斷檢測到了GAstV，這與之前的鵝痛風(fēng)也可能是由GAstV引起的相關(guān)報(bào)道一致。

對于營養(yǎng)代謝失衡所導(dǎo)致的痛風(fēng)，可以減少飼料中蛋白質(zhì)含量，增加一定量的青綠飼料。同時(shí)在水中添加含有中藥成分的腎肝解毒液、0.5%碳酸氫鈉、維生素等，增強(qiáng)機(jī)體代謝能力。目前，尚無針對GAstV的藥物和疫苗，故若感染了GAstV，應(yīng)盡早將其進(jìn)行隔離治療，對病鵝接觸過的環(huán)境進(jìn)行消毒，避免該病毒傳播。痛風(fēng)發(fā)病后沒有特效藥，多種致病因素相互作用，導(dǎo)致其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病雛鵝治愈率低，給全國養(yǎng)殖場造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，鵝痛風(fēng)要以預(yù)防為主、綜合防控，減少該病的發(fā)生，促進(jìn)我國養(yǎng)鵝業(yè)健康綠色發(fā)展。