潘繼飛，薛 松，王 鑫，渠廣民，封 靜，陳建英*

（1.山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省皮膚與黏膜給藥工程技術(shù)研究中心，山東 濟(jì)南 250101；2.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101；3.山東省食品藥品審評查驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250014）

辛酰水楊酸（capryloyl salicylic acid，簡稱CSA），化學(xué)名為2-羥基-5-（1-氧代辛基）苯甲酸，是近年來由國外開發(fā)，在化妝品和皮膚外用制劑中應(yīng)用的活性化合物[1]。CSA既保持了水楊酸剝除老化角質(zhì)的功效，又增強(qiáng)了與皮膚細(xì)胞的親和力，更容易滲透入角質(zhì)層，可作為美白淡斑、延緩衰老、治療黑頭粉刺的外用成分[2]。CSA具有較強(qiáng)的疏水性，在制劑中通常溶于油相中，經(jīng)乳化后配制為膏霜或乳液，痤瘡的產(chǎn)生多與皮脂分泌旺盛和毛孔堵塞有關(guān)，含油脂的產(chǎn)品無疑加劇這一誘因。

膠束屬于膠體分散體系，粒徑較脂質(zhì)體和微粒更小，一般在5～100 nm，聚合物膠束疏水內(nèi)核和親水外殼的載藥體系具有增溶難溶藥物、提高生物利用度、靶向和緩釋等優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于抗腫瘤藥物的研究開發(fā)[3-5]。在日化領(lǐng)域，聚合物膠束可包載疏水性成分用于在駐留型護(hù)膚品中，避免油脂成分的使用，賦予產(chǎn)品清爽、滋潤的膚感[6-8]。

目前，CSA納米膠束制劑尚未見研究報(bào)道，CSA的含量測定方法國內(nèi)僅見報(bào)道采用反相色譜測定法[9-10]，但該方法成本高，耗時(shí)長，不利于推廣應(yīng)用。本研究采用直接溶解法制備了CSA納米膠束，同時(shí)建立了一種更簡捷的測定含量的高效液相色譜法（HPLC），用于檢測納米膠束型制劑中辛酰水楊酸的含量，以期為拓展CSA的應(yīng)用及CSA納米膠束制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（LC-20AT型泵、SPD-M20A型檢測器、Lab Solution液相色譜數(shù)據(jù)工作站，日本島津公司）；XA105DU分析天平（Mettler Toledo）；PB-10 pH計(jì)（賽多利斯）；Nano-ZS90馬爾文動(dòng)態(tài)激光光散射粒度儀（馬爾文帕納科）；ZEISS EVO 鎢燈絲掃描電子顯微鏡（卡爾蔡司）。

1.2 材料

辛酰水楊酸（上海麥克林C860254，純度≥98 %）；乙腈、甲醇為色譜純試劑；其余為分析純試劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 CSA納米膠束制劑的制備

取CSA原料2.5～5.0 g，溶于20 ml丙二醇和40 ml PEG30蓖麻油，加入適量防腐劑，緩慢加入純化水至1000 ml，0.45 μm微孔濾膜過濾，獲得自組裝納米膠束溶液。

2.2 CSA納米膠束的粒徑測定

按照2.1項(xiàng)中CSA膠束的制備方法，制備0.25 %和0.5 %的CSA膠束溶液及空白膠束溶液，采用激光粒度分布儀測定膠束的粒徑分布及Zeta電位?？瞻啄z束、0.25 %和0.50 %的CSA膠束平均粒徑（Di）值分別為11.30，8.86和7.96 nm，多分散系數(shù)（PDI）值分別為0.112，0.164和0.157，粒徑分布2～12 nm，不同CSA濃度的膠束Zeta電位均呈現(xiàn)負(fù)值，且隨著CSA濃度的增加膠束的粒徑減小（圖1和表1）。

圖1 不同濃度CSA納米膠束及空白膠束的粒徑分布圖

表1 不同濃度CSA納米膠束及空白膠束的表征

2.3 CSA納米膠束的SEM

將制備得到的CSA膠束稀釋5倍后滴在銅網(wǎng)上，靜置10 min，用濾紙從銅網(wǎng)的底部將溶液吸走。待銅網(wǎng)干燥后，噴金，置掃描電鏡下觀察膠束的形態(tài)。圖2中A、B、C圖分別是空白膠束、CSA濃度為0.25 %和0.5 %膠束的SEM照片。

圖2 自組裝CSA納米膠束的SEM照片（A：空白膠束；B：0.25 %CSA膠束；C：0.5 %CSA膠束）

2.4 納米膠束中CSA的含量測定

2.4.1 溶液制備 空白溶液：照CSA溶液劑處方配制不含CSA的空白供試品溶液。精密量取0.2 ml置入50 ml量瓶，加入甲醇流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液制備：精密稱取CSA約20 mg置入100 ml量瓶，加入適量甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml置入10 ml量瓶，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻。制成每1 ml中含有CSA約0.02 mg的對照品溶液。供試品溶液制備：精密量取CSA納米膠束溶液0.4 ml置入100 ml量瓶，加入甲醇并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 色譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（48:30:22），檢測波長225 nm，柱溫40 ℃，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣體積10 μl。理論板數(shù)按CSA峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，拖尾因子不高于1.5。

2.4.3 波長選擇 取CSA對照品溶液，DAD檢測器在190～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，見圖2，結(jié)果表明，CSA有兩個(gè)紫外吸收峰，波長分別為225 nm和269 nm，225 nm的吸收值高于269 nm，因此選擇225 nm為檢測波長。

2.4.4 專屬性試驗(yàn) 分別取空白溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，CSA保留時(shí)間約4.8 min，空白溶液在CSA出峰位置無干擾，表明本色譜條件專屬性良好。見圖3～5。

圖3 空白溶液HPLC圖譜

圖4 辛酰水楊酸對照品溶液HPLC圖譜

圖5 供試品溶液HPLC圖譜

2.4.5 線性試驗(yàn) 精密稱取CSA對照品約20 mg，置入100 ml量瓶，加入適量甲醇使完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密量取0.5，1，2，3，4，5 ml分別置入10 ml量瓶，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)做線性回歸，求得CSA的線性回歸方程為A=50483C+10595，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，結(jié)果表明，CSA濃度在4.10～41.14 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.6 精密度試驗(yàn) 精密量取CSA對照品溶液10 μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖及峰面積，計(jì)算RSD為0.15 %，表明儀器精密度良好。取同一批樣品，連續(xù)配制6份供試品溶液，記錄色譜圖及峰面積，計(jì)算含量RSD為0.56 %，表明方法精密度良好。

2.4.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取CSA對照品適量（約相當(dāng)于CSA處方量的80 %，100 %，120 %），按處方加入其它輔料，分別平行配制3份，照2.1項(xiàng)下配制成供試品溶液。依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.8 樣品含量測定 按照2.1項(xiàng)下制備本品3批樣品，按照2.2.1項(xiàng)下制備供試品及對照品溶液，按照2.2.2項(xiàng)下色譜條件，分別取10 μl注入色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，含量結(jié)果分別為102.90 %，99.60 %，104.85 %。

3 討論

本研究首次制備了自組裝CSA納米膠束制劑，獲得了粒徑小于20 nm、粒徑分布均勻的納米膠束溶液。CSA的加入使膠束粒徑減小，高濃度CSA納米膠束粒徑小于低濃度CSA納米膠束。目前國內(nèi)已報(bào)道的CSA含量測定方法流動(dòng)相為乙腈-5 mmol/L癸烷磺酸鈉（含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1 %磷酸），其中的離子對試劑癸烷磺酸鈉和色譜柱的固定相結(jié)合產(chǎn)生不可逆吸附，進(jìn)而影響固定相活性位點(diǎn)，從而達(dá)到分析樣品的作用，該方法中離子對試劑較難從色譜柱上沖洗干凈而造成色譜柱使用壽命的縮短，大大提高了該分析方法的耗材成本；此外，該方法需要較長的平衡時(shí)間使流動(dòng)相中的離子對和硅羥基發(fā)生作用，色譜柱需要較長的清洗時(shí)間也提高了該分析方法的時(shí)間成本。本研究建立了納米膠束制劑中CSA的HPLC含量測定方法，采用甲醇-乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（48:30:22）為流動(dòng)相，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法專屬性好、準(zhǔn)確度和精密度高，具有方便、快捷、適用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，填補(bǔ)了現(xiàn)行檢測方法的空白，為CSA制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供依據(jù)。CSA納米膠束制劑的長期穩(wěn)定性和安全性有待進(jìn)一步試驗(yàn)研究。