郭陣雨，趙新軍，2，馬軍仁

(1.伊犁師范大學(xué)新疆凝聚態(tài)相變與微結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室，伊寧 835000;2.伊犁師范大學(xué) 微納電傳感器技術(shù)與仿生器械實(shí)驗(yàn)室，伊寧 835000)

1 引 言

慢性肝臟炎癥會(huì)誘發(fā)肝癌( HCC) ，例如: 如慢性乙型肝炎( HBV) 或丙型肝炎( HCV) 、非酒精性脂肪肝炎( NASH) 會(huì)導(dǎo)致肝炎轉(zhuǎn)化為HCC.感染HBV 或HCV 病毒后會(huì)造成肝細(xì)胞基因改變，從而導(dǎo)致HCC 的發(fā)生發(fā)展.NASH 臨床表現(xiàn)為代謝綜合征，生物學(xué)和流行病學(xué)研究表明，NASH可進(jìn)展為HCC 或其他晚期肝?。?，2］.

目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在NASH -HCC 轉(zhuǎn)變過(guò)程中，脂肪變性發(fā)展和自噬功能降低均與NASH 有關(guān)［3-5］，炎癥和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激則會(huì)在很大程度上影響NASH 的發(fā)病.近年的研究［6］也初步確認(rèn)了patatin - like phospholipase domain containing 3( PNPLA3) 基因、transmembrane 6 superfamily member 2( TM6SF2) 基因和其他致病基因的功能障礙與NASH 有關(guān)，盡管這些基因的功能尚未完全確定，但是發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性與HCC 的發(fā)生有關(guān).NASH 發(fā)病的多因素特征及其進(jìn)展決定了脂肪變性微環(huán)境中NASH - HCC 發(fā)生的致病復(fù)雜性，Wolf 等人［7］通過(guò)基因敲除操作，研究了小鼠細(xì)胞的適應(yīng)免疫性在NASH - HCC 轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用，該研究表明抑制Th17 細(xì)胞分化或阻斷IL -17A 信號(hào)傳導(dǎo)可阻止NASH 和隨后的HCC 發(fā)生.Yoshimoto 等人［8］的研究證明了腸道菌群在NASH進(jìn)展中的重要作用，并發(fā)現(xiàn)衰老的肝星狀細(xì)胞( HSC) 對(duì)于將脂肪變性肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞是至關(guān)重要的.在NASH—肝癌的發(fā)展過(guò)程中，脂代謝異常是NASH 轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟┑囊粋€(gè)重要促成因素，脂質(zhì)的分解不僅為細(xì)胞提供能量，而且還調(diào)節(jié)其他的細(xì)胞過(guò)程，如激活致癌信號(hào)通路.Zhu等人［9］研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白Nogo -B 的缺失會(huì)減少原發(fā)HCC 中STAT3 的磷酸化，這樣Nogo-B 可以通過(guò)調(diào)節(jié)IL -6/STAT3 信號(hào)影響HCC 的發(fā)生.最近，Tian 等人［10］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在NASH 向HCC 轉(zhuǎn)化過(guò)程中，Low density lipoprotein ( LDL) 蛋白先被氧化為oxidized low density lipoprotein ( oxLDL) ，oxLDL 會(huì)誘導(dǎo)Nogo-B 表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而提升Hippo 信號(hào)通路中Yes-associated protein ( YAP) 的活性，激活HCC 基因的表達(dá).Ye 等人［11］的研究則發(fā)現(xiàn)，在NASH所致HCC 的進(jìn)展過(guò)程中，冠狀動(dòng)脈疾病相關(guān)連接蛋白JCAD 通過(guò)抑制Hippo 信號(hào)通路中l(wèi)arge tumor suppressor homolog 2 ( LATS2) 激酶，抑制YAP 蛋白磷酸化，促進(jìn)NASH 發(fā)展為HCC.深刻理解NASH 誘發(fā)HCC 發(fā)生發(fā)展的信號(hào)通路特性，對(duì)于設(shè)計(jì)阻斷NASH 誘發(fā)的HCC 治療方案是非常必要的.在激活基因通路研究方面，之前的理論結(jié)果［12-16］已經(jīng)定量揭示了腫瘤抑制的物理機(jī)制.在慢性NASH 微環(huán)境中，oxLDL 通過(guò)誘導(dǎo)Nogo-B 表達(dá)上調(diào)提高YAP 的活性，激活HCC 基因的表達(dá)［10］.同時(shí)，JCAD 通過(guò)抑制Hippo 信號(hào)通路中的LATS2 提升YAP 的活性，促進(jìn)HCC 的發(fā)生發(fā)展［11］.與JCAD 調(diào)控效應(yīng)相反，LATS2 則促進(jìn)YAP 磷酸化，限制其活性，進(jìn)而降低了connective tissue growth factor ( CTGF) 等增殖因子的表達(dá)，抑制HCC 細(xì)胞生長(zhǎng)增殖［11，17］.那么，Nogo-B、JCAD 與LATS2 是如何協(xié)同調(diào)控NASH-HCC的發(fā)生發(fā)展，當(dāng)前仍然沒(méi)有深刻理解.

本文建立理論模型研究Nogo -B 誘導(dǎo)oxLDL降解，以及JCAD 與LATS2 相互作用調(diào)節(jié)YAP磷酸化，協(xié)同調(diào)控HCC 基因激活的動(dòng)力學(xué)機(jī)制.分析Nogo - B 誘導(dǎo)的oxLDL 降解、JCAD 與LATS2 調(diào)節(jié)YAP 磷酸化，激活致癌因子的信號(hào)通路特性，進(jìn)一步深刻揭示NASH 誘發(fā)HCC 的致癌機(jī)理.

2 理論模型

在NASH 所致的HCC 進(jìn)展過(guò)程中，我們考慮: (1) Nogo-B 通過(guò)激活DoxLDL -Nogo -B -YAP 通路［12］，導(dǎo)致HCC 的發(fā)生發(fā)展; (2) JCAD與LATS2 相互作用，并抑制YAP 磷酸化，未被磷酸化的YAP 激活下游Hippo 信號(hào)通路中下游與腫瘤形成相關(guān)的基因，從而導(dǎo)致HCC 的發(fā)生發(fā)展.模型示意圖為:

基于我們之前的研究［12］，Nogo -B 與Autophagy-related 5 gene ( ATG5) 相互作用形成復(fù)合體NA，進(jìn)而促進(jìn)oxLDL 降解產(chǎn)生講解后的ox-LDL( DoxLDL).JCAD 與LATS2 相互作用，與JCAD 結(jié)合的LATS2 標(biāo)記為BLATS2，JCAD 與BLATS2 作用形成的復(fù)合體為JB，形成NA 和JB的反應(yīng)均為二級(jí)反應(yīng).JB 抑制YAP 磷酸化，增進(jìn)YAP 活性，磷酸化的YAP 標(biāo)記為pYAP.未與JCAD 結(jié)合的LATS2 標(biāo)記為FLATS2，F(xiàn)LATS2 則促進(jìn)YAP 磷酸化，抑制YAP 活性.基于Hill 動(dòng)力學(xué)與Michaelis-Menten 方程［18，19］，可以獲得各組分濃度隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)方程組為:

以上方程組中，C=［DoxLDL］+［oxLDL］，表示DoxLDL 和oxLDL 的總濃度.LATS2 激酶的總濃度為［LATS2］=［FLATS2］+［BLATS2］，方程(9) 中Hill 系數(shù)為n=3.累積的肝臟脂肪誘導(dǎo)JCAD 的表達(dá)，并與LATS2 相互作用抑制YAP 磷酸化，被磷酸化的YAP 會(huì)滯留在細(xì)胞質(zhì)中，而未被磷酸化的YAP 則會(huì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核與TEAD 結(jié)合，激活下游的Hippo 信號(hào)通路中下游connective tissue growth factor ( CTGF) 、cysteine -rich 61 ( Cyr61) 、cyclin D1( CCND1) 和glioma -associated oncogene homologue( GLI -2) 等與細(xì)胞增殖和腫瘤形成相關(guān)的基因，從而導(dǎo)致HCC 的發(fā)生發(fā)展［11］.在這里我們考慮CTGF 代表CYR61、CCND1 和GLI-2 等與細(xì)胞增殖和腫瘤形成相關(guān)的基因.

3 結(jié)果與討論

Tian 等人［10］的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)oxLDL 降解完成需要約5 ～10 小時(shí)，DoxLDL 通過(guò)oxLDL -Nogo -B-YAP 信號(hào)通路激活下游HCC 基因.Ye 等人的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)［15］JCAD 通過(guò)抑制LATS2 激酶活性提升YAP 激活促進(jìn)NASH 進(jìn)展為HCC.為了符合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取適當(dāng)?shù)膮?shù)值( 如表1 所示) ，可以考察分析Nogo-B 與JCAD 誘導(dǎo)肝癌基因激活通路的動(dòng)力學(xué)特性.

表1 模型中的參數(shù)取值Table 1 Standard parameter values of the model

圖2a 呈現(xiàn)了DoxLDL、oxLDL 隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系，以及［LPC］隨［DoxLDL］的變化關(guān)系.從圖2a 可以看出，DoxLDL 在短時(shí)間內(nèi)很快升高到了一定的濃度值，并趨于穩(wěn)定，［oxLDL］則在短時(shí)間內(nèi)很快降低，并趨于較低穩(wěn)定值不變.由此表明，在較短的時(shí)間內(nèi)oxLDL 降解，產(chǎn)生了大量的DoxLDL，并且在10 小時(shí)后oxLDL 降解完成，DoxLDL 維持一定的恒定值( oxLDL 已經(jīng)降解完成) 不變，進(jìn)而促進(jìn) Lysophosphatidylcholine( LPC) 合成，激活大量Lysopho - sphatidic acid( LPA) ( 圖1a 插圖) ，啟動(dòng)下游信號(hào)通路.從圖2b 中LPC 隨DoxLDL 演化的函數(shù)關(guān)系可以看出，隨著［DoxLDL］的增加，［LPC］首先緩慢增加，當(dāng)［DoxLDL］增加到約14 nM ，也就是oxLDL 幾乎完全降解時(shí)，［LPC］出現(xiàn)了急劇增長(zhǎng).圖2b 中的插入圖表明［LPC］經(jīng)過(guò)約20 小時(shí)升到了較大的穩(wěn)定值，并開(kāi)始維持這一較高的濃度值不變，反映出DoxLDL 對(duì)LPC 合成調(diào)節(jié)的時(shí)滯性.這是由于，在隨著oxLDL 降解使得DoxLDL 濃度升高，一定濃度的DoxLDL 才能對(duì)LPC 合成有顯著的促進(jìn)作用，致使LPC 的濃度經(jīng)過(guò)約20 小時(shí)很快提升，并升高到了較大的濃度值.由此表明，ox-LDL 的降解到一定程度，降解的oxLDL 達(dá)到一定的濃度值，會(huì)很快激活大量下游激活因子( autotaxin( ATX) 、LPA 等) ，之后便會(huì)在很大程度上提高Hippo 信號(hào)通路中YAP 的活性，激活下游癌基因( CTGF 等) 的表達(dá).oxLDL 在降解為DoxLDL的過(guò)程中，Nogo-B 起著重要的調(diào)控作用［10］，ox-LDL 通過(guò)CD36 大量攝入細(xì)胞內(nèi)，誘導(dǎo)Nogo -B和CCAAT 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β ( CEBPβ) 表達(dá)上調(diào)( 如模型圖1) ，在oxLDL 的降解過(guò)程中，Nogo -B 通過(guò)與ATG5 反應(yīng)結(jié)合形成復(fù)合體NA，NA 調(diào)節(jié)oxLDL 的降解產(chǎn)生降解后的DoxLDL.另外，CEBPβ 能夠增強(qiáng)Nogo-B 基因的轉(zhuǎn)錄活性，協(xié)同誘導(dǎo)Nogo - B 表達(dá)上調(diào)［20］.為了考察NA 促進(jìn)oxLDL 的降解，以及于CEBPβ 協(xié)同誘導(dǎo)Nogo-B表達(dá)上調(diào)效應(yīng)，可以考察Nogo -B 和復(fù)合體NA濃度隨時(shí)間的演化.

圖1 Nogo-B 與JCAD 誘導(dǎo)肝癌基因激活的模型示意圖.Fig.1 Schematic depiction of the model of Nogo -B and JCAD inducing hepatocellular carcinoma gene activation.

圖2 ［DoxLDL］、［oxLDL］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系( a) ，以及［LPC］隨［DoxLDL］的變化關(guān)系( b).Fig.2 Temporal evolutions of the levels of［DoxLDL］and［oxLDL］( a).The［LPC］as a function of［DoxLDL］( b).

圖3a 和3b 顯示了Nogo-B 與NA 濃度隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系.從圖3a 可以看出，Nogo-B 經(jīng)過(guò)約25 小時(shí)時(shí)間升高到了最大的濃度值，然后趨于穩(wěn)定，由此表明，經(jīng)過(guò)約25 小時(shí)Nogo-B的表達(dá)可以上調(diào)到最高水平，而后輕微減小并趨于穩(wěn)定值不變.圖3b 顯示NA 經(jīng)過(guò)約25 小時(shí)升高到了最大值，之后也呈現(xiàn)出最高表達(dá)水平而后趨于穩(wěn)定值不變.比較圖3a 中Nogo -B 的演化和圖3b 中NA 的演化特性，可以發(fā)現(xiàn)，Nogo -B和NA 呈現(xiàn)了相似的隨時(shí)間演化特性，但是NA演化幅值遠(yuǎn)大于Nogo -B 幅值.由此表明，Nogo-B 與ATG5 的結(jié)合反應(yīng)決定著的NA 的合成，通過(guò)NA 的合成，ATG5 放大了Nogo -B 表達(dá)的信號(hào)，使得Nogo-B 的激活效應(yīng)增強(qiáng)，很快提升了oxLDL 的降解( 圖3b 插圖) ，促進(jìn)了大量的LPA 合成.這樣，通過(guò)Nogo-B 增強(qiáng)LPA 的合成激活YAP; 當(dāng)ATG5 敲減后，NA 的合成被限制.實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)［10］，Nogo - B 的表達(dá)與LPA濃度密切相關(guān)，并且部分Nogo-B 通過(guò)LPA 介導(dǎo)的YAP 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)腫瘤發(fā)生.在這里，我們發(fā)現(xiàn)部分Nogo-B 通過(guò)與ATG5 合成NA，在很大程度上激活YAP 信號(hào)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展.圖3b 也顯示了NA 濃度隨時(shí)間演化出現(xiàn)了最大值，這是由于CEBPβ 增強(qiáng)了Nogo-B 的轉(zhuǎn)錄激活.

圖3 ［Nogo-B］與［NA］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系Fig.3 Temporal evolutions of the levels of［Nogo - B］and［NA］.

圖4 呈現(xiàn)了［CEBPβ］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系，以及［Nogo - B］隨［CEBPβ］改變的函數(shù)關(guān)系.從圖4a 可以看出，CEBPβ 極快地升高到了最大值，然后持續(xù)極短時(shí)間后急劇降低并趨于穩(wěn)定.由此表明，CEBPβ 隨時(shí)間演化的初始階段呈現(xiàn)了脈沖式觸發(fā)信號(hào)，增強(qiáng)了Nogo -B 的轉(zhuǎn)錄激活，提升了Nogo - B 表達(dá)水平.這種觸發(fā)增強(qiáng)，是oxLDL 調(diào)節(jié)Nogo-B 激活的補(bǔ)充，CEBPβ通過(guò)短暫的觸發(fā)信號(hào)促進(jìn)Nogo -B 表達(dá)上調(diào)，與oxLDL 協(xié)同增強(qiáng)了oxLDL -Nogo -B -YAP 通路的激活.實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)［7］，CEBPβ 的表達(dá)提升的同時(shí)也增強(qiáng)了Nogo-B 的表達(dá)，Nogo -B 的表達(dá)水平與CEBPβ 的表達(dá)呈正相關(guān).如圖4b 所示，［Nogo - B］隨［CEBPβ］的增加始于近似的線性增長(zhǎng)，表明了Nogo -B 表達(dá)與CEBPβ 表達(dá)的正相關(guān)性，以及高表達(dá)的Nogo - B 只需較短時(shí)間CEBPβ 的刺激.從圖4b 還可以看出，當(dāng)CEBPβ濃度開(kāi)始減少時(shí)，Nogo -B 呈現(xiàn)了趨于不變的穩(wěn)態(tài)，并且穩(wěn)態(tài)范圍較大，直至濃度從38 nM 減少到15 nM 以?xún)?nèi)，Nogo-B 幾乎趨于不變.這進(jìn)一步表明了，CEBPβ 通過(guò)觸發(fā)短暫的激活信號(hào)，與oxLDL 協(xié)同激活了穩(wěn)定的oxLDL-Nogo -B -YAP通路［10］.由此可以推斷，CEBPβ 的敲減會(huì)在一定程度上阻礙oxLDL 誘導(dǎo)的Nogo-B 激活表達(dá)，從而影響YAP、CTGF 的激活表達(dá)水平.為了進(jìn)一步確定YAP、CTGF 的激活表達(dá)對(duì)Nogo -B 的依賴(lài)性，可以考察［YAP］與［CTGF］隨［Nogo -B］的變化關(guān)系.

圖4 ［CEBPβ］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系( a) ，以及［Nogo - B］隨［CEBPβ］變化的函數(shù)關(guān)系( b).Fig.4 Temporal evolution of the level of ［CEBPβ］( a) ，and ［Nogo - B］as a function of［CEBPβ］( b).

圖5 顯示了［YAP］與［CTGF］隨［Nogo -B］變化的函數(shù)關(guān)系，如圖5 所示，［YAP］和［CTGF］隨［Nogo - B］的增大而增加表明，Nogo-B 的激活表達(dá)促使了YAP 和CTGF 的表達(dá)上調(diào).由此可以確定，YAP 和CTGF 的活性依賴(lài)于Nogo-B.Nogo -B 誘導(dǎo)oxLDL 降解提升了YAP表達(dá)水平，并激活下游CTGF 等基因表達(dá).從圖5 還可以看出，當(dāng)Nogo -B 濃度增加到一定值，然后當(dāng)Nogo-B 濃度再減小時(shí)，YAP 和CTGF 都呈現(xiàn)了趨于不變的穩(wěn)態(tài)，由此進(jìn)一步表明，Nogo-B 表達(dá)上調(diào)誘導(dǎo)的oxLDL 降解，激活了穩(wěn)定的oxLDL-Nogo -B -YAP -CTGF 通路.因此可以推斷，Nogo-B 高表達(dá)所調(diào)控的信號(hào)通路途徑中，Hippo 信號(hào)傳導(dǎo)在異位Nogo -B 激活表達(dá)后被高度激活，這與Tian 等人［10］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符.Nogo-B 通過(guò)促進(jìn)oxLDL 降解，提升下游LPC 表達(dá)水平，由此導(dǎo)致LPA 在Nogo-B 表達(dá)上調(diào)后會(huì)顯著增加，LPA 已被證明可以調(diào)節(jié)Hippo 途徑信號(hào)［10，22］.由于Nogo -B 通過(guò)提高LPA 表達(dá)水平來(lái)刺激YAP 活性，降低了YAP 的磷酸化，并增加了下游靶結(jié)締組織生長(zhǎng)因子( 例如CTGF 等) 的轉(zhuǎn)錄水平，因此，形成了基于Nogo -B 的穩(wěn)定的信號(hào)通路.

圖5 ［YAP］與［CTGF］隨［Nogo -B］變化的函數(shù)關(guān)系.Fig.5 ［YAP］and［CTGF］as a function of［Nogo-B］

實(shí)驗(yàn)研究［11，22］也表明JCAD 與Hippo 信號(hào)通路中關(guān)鍵分子LATS2 激酶相互作用，抑制YAP磷酸化.去磷酸化后YAP 進(jìn)入細(xì)胞核，與TEAD分子結(jié)合，激活下游細(xì)胞增殖及腫瘤形成的相關(guān)因子( CTGF 等)［23，24］.

圖6 呈現(xiàn)了在不同 JCAD 濃度條件下，［CTGF］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系.從圖6 可以看出，［CTGF］隨著時(shí)間演化，逐漸升到了較大的穩(wěn)定值，表明CTGF 被激活并達(dá)到一定的表達(dá)水平.比較圖中不同JCAD 濃度時(shí)的［CTGF］幅值，可以發(fā)現(xiàn)，［JCAD］=15 nM 時(shí)的［CTGF］幅值明顯高于［JCAD］為5 nM 時(shí)的幅值，這表明，在較高的JCAD 濃度條件下對(duì)CTGF 的激活幅度，大于在低濃度下對(duì)CTGF 的激活幅度，并且，隨著JCAD 濃度的增加，CTGF 增加到穩(wěn)定值的時(shí)間變短.由此表明，JCAD 在較大程度上調(diào)控著CTGF 的激活速度與表達(dá)水平.這是由于JCAD 與LATS2 相互作用，增強(qiáng)了在Hippo 途徑中YAP 去磷酸化的能力，進(jìn)而上調(diào)了CTGF 等HCC 細(xì)胞增殖因子.然而，沉默的JCAD 會(huì)產(chǎn)生相反的效果，JCAD 的低水平表達(dá)則會(huì)降低與LATS2 的結(jié)合作用，使得LATS2 促使YAP 磷酸化的能力增強(qiáng)，抑制HCC 的生長(zhǎng)增殖.實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)［11，17］，在正常肝組織中，JCAD 一直維持低表達(dá)水平，在NASH-HCC 標(biāo)本中JCAD 的表達(dá)水平明顯偏高.因此，JCAD 的過(guò)表達(dá)促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)和增殖，表明了JCAD 在NASH 向HCC 過(guò)渡期間，激活Hippo 信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的新作用.

圖6 不同［JCAD］條件下，［CTGF］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系.Fig.6 Temporal evolutions of the level of［CTGF］at different［JCAD］.

JCAD 通過(guò)與激酶LATS2 結(jié)合反應(yīng)，調(diào)控YAP 的磷酸化.在Hippo 信號(hào)通路中，LATS2 是調(diào)控YAP 的磷酸化水平的另一個(gè)重要調(diào)節(jié)子，其功能與JCAD 相反［11］.為了進(jìn)一步研究激酶LATS2 在Hippo 信號(hào)通路中抑制NASH 發(fā)展為HCC 中的作用，可以考察不同F(xiàn)LATS2 濃度條件下［CTGF］隨時(shí)間的演化關(guān)系.

圖7 顯示了在不同F(xiàn)LATS2 濃度條件下，［CTGF］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系.比較圖中FLATS2 濃度在［FLATS2］=5 nM、［FLATS2］=10 nM 和［FLATS2］=15 nM 時(shí)的CTGF 濃度幅值，可以發(fā)現(xiàn)，［FLATS2］=15 nM 時(shí)的CTGF 幅值明顯低于濃度為［FLATS2］=5 nM 時(shí)的幅值，這是由于隨著FLATS2 的增加，F(xiàn)LATS2 對(duì)CTGF的抑制程度增加.與JCAD 調(diào)控效應(yīng)相反，隨著FLATS2 濃度的減少，CTGF 增加到穩(wěn)定值的時(shí)間變短，濃度幅值變大.由此表明，較高濃度的FLATS2 則會(huì)較大程度地促進(jìn)YAP 磷酸化，抑制YAP 活性，進(jìn)而降低了CTGF 等增殖因子的表達(dá)水平，較為顯著地抑制了HCC 細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖.因此可以得出，LATS2 確實(shí)可以充當(dāng)Hippo 信號(hào)通路的下游調(diào)節(jié)因子，從而影響HCC 細(xì)胞的增殖.Ye 等人［11］的實(shí)驗(yàn)的確發(fā)現(xiàn)，在Hippo 信號(hào)通路中，LATS2 可以使YAP 磷酸化以抑制CTGF 等表達(dá)，進(jìn)而抑制脂肪肝病誘導(dǎo)的HCC 發(fā)生發(fā)展.

圖7 不同［FLATS2］條件下，［CTGF］隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)關(guān)系.Fig.7 Temporal evolutions of the level of［CTGF］at different［FLATS2］.

4 結(jié) 語(yǔ)

本文建立理論模型研究Nogo -B 與JCAD 誘導(dǎo)非酒精HCC 基因激活.理論模型考慮: ( 1)Nogo-B 通過(guò)激活DoxLDL - Nogo - B - YAP 通路［12］，促使HCC 發(fā)生發(fā)展; (2) JCAD 與LATS2相互作用抑制YAP 磷酸化，未被磷酸化的YAP激活Hippo 信號(hào)通路中下游與腫瘤形成相關(guān)的增殖因子，導(dǎo)致HCC 的發(fā)生發(fā)展.研究發(fā)現(xiàn)，ox-LDL 在很短的時(shí)間內(nèi)降解，產(chǎn)生了大量降解后的DoxLDL，進(jìn)而很快激活下游通路信號(hào)( LPC、ATX、LPA 等) ，在很大程度上提升了Hippo 信號(hào)通路中YAP 的活性，激活下游CTGF 等癌基因.通過(guò)分析Nogo-B 隨時(shí)間演化的動(dòng)力學(xué)特性，可以發(fā)現(xiàn)，Nogo - B 與ATG5 的結(jié)合反應(yīng)放大了Nogo-B 表達(dá)信號(hào)，促進(jìn)LPA 合成并激活YAP.作為oxLDL 激活Nogo -B 的補(bǔ)充，CEBPβ 呈現(xiàn)了脈沖式觸發(fā)信號(hào)增強(qiáng)了Nogo -B 的激活表達(dá)，并促進(jìn)oxLDL 迅速降解，協(xié)同增強(qiáng)了穩(wěn)定的Dox-LDL-Nogo-B -YAP -CTGF 通路信號(hào)激活.另外，JCAD 蛋白可以與LATS2 相互作用，促使YAP 去磷酸化，去磷酸化的YAP 上調(diào)CTGF 等增殖因子，表明了較高濃度的JCAD 調(diào)控CTGF 表達(dá)水平提升.與JCAD 調(diào)控效應(yīng)相反，F(xiàn)LATS2 通過(guò)抑制YAP 活性，降低CTGF 等增殖因子的表達(dá)水平.由此也表明了JCAD、LATS2 在NASH 向轉(zhuǎn)變HCC 過(guò)程中，激活Hippo 信號(hào)通路的新作用.事實(shí)上，Nogo -B 可以誘導(dǎo)oxLDL 的自噬和降解［25］，在NASH-HCC 的轉(zhuǎn)化過(guò)程中，脂肪變性發(fā)展和自噬功能降低均與NASH 有關(guān)［26，27］，炎癥和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激也會(huì)在很大程度上影響NASH 的發(fā)病［28］，Nogo-B 的缺失會(huì)減少原發(fā)性HCC 中STAT3 的磷酸化，這樣Nogo -B 還可以通過(guò)調(diào)節(jié)IL-6/STAT3 信號(hào)影響HCC 的發(fā)生發(fā)展.病理研究數(shù)據(jù)表明，未折疊的蛋白質(zhì)反應(yīng)UPR( unfolded protein response) 激活，在促進(jìn)非酒精性脂肪肝病發(fā)展為HCC 進(jìn)程中也會(huì)起著很重要的作用［29-31］.本文中只考慮Nogo -B 與JCAD 誘導(dǎo)HCC 基因激活的一種致癌機(jī)制，理論結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)［10，11］，表明了Nogo-B 表達(dá)上調(diào)，會(huì)在很大程度上促使HCC 發(fā)生發(fā)展，以及JCAD 蛋白與LATS2 激酶也在很大程度上調(diào)控CTGF 等HCC 細(xì)胞的增殖，進(jìn)而調(diào)節(jié)癌基因表達(dá)通路的動(dòng)力學(xué)行為.