李 靖 王一卓

近年來，胰腺癌發(fā)病率呈上升趨勢，且有年輕化傾向[1]。胰腺癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未明了，有研究[2]發(fā)現(xiàn)，基因突變在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。 剪切因子3B亞基1(subunit 1 of splicing factor 3b，SF3B1)基因是u2小核核糖核蛋白復(fù)合物(small nuclear ribonucleoprotein，snrnp)的一個(gè)重要組成成分，是突變最為頻繁的剪切因子編碼基因[1]。SF3B1基因在很多癌癥中表達(dá)，導(dǎo)致在3′剪接位點(diǎn)發(fā)生核糖核酸異常剪接[2]，SF3B1基因突變存在很多癌癥類型[3]中，如乳腺癌、肝癌、增生異常綜合征、白血病等。但探討SF3B1在胰腺癌組織中的表達(dá)及其意義文獻(xiàn)鮮有報(bào)道。為此，本文分析胰腺癌組織中的SF3B1基因表達(dá)水平及與胰腺癌TNM分期及不同分化程度的相關(guān)性，以判斷胰腺癌病情的嚴(yán)重程度，并指導(dǎo)后期臨床治療，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年9月至2019年8月空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的胰腺癌且均接受了根治術(shù)治療的48例患者臨床資料，其中男31例，女17例；年齡48～82歲，平均(55.94±5.29)歲；腫瘤分化程度[5]：高分化16例、中度分化15例、低分化12例、未分化5例；TNM分期[6]：Ⅰ期(腫瘤直徑<2 cm，無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)3例、Ⅱ期(腫瘤直徑2.1～4.0 cm，緊靠腫瘤淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移)11例、Ⅲ期(腫瘤直徑4.1～6 cm，第1站與第3站之間存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，胰腺包膜與后腹膜出現(xiàn)浸潤)16例、Ⅳ期(腫瘤直徑>6.1 cm，第3站出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，侵犯鄰邊內(nèi)臟、后腹膜與前述靜脈廣泛浸潤)18例；伴淋巴結(jié)組織29例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例。所有患者在根治術(shù)中均切除癌組織及癌旁組織(距離癌灶組織≤2 cm)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合《胰腺癌綜合診治指南(2018版)》[4]胰腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)手術(shù)病理標(biāo)本確診；③術(shù)前未行放、化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心肝腎等重要臟器功能障礙者；②合并其他惡性腫瘤；合并免疫系統(tǒng)疾病、全身感染性疾病、血液系統(tǒng)疾病、肝腎功能障礙等其他基礎(chǔ)疾病；③失訪者。

1.2 方法 比較患者癌組織及癌旁組織標(biāo)本SF3B1基因的陽性表達(dá)率，比較胰腺癌不同分化程度、不同TNM分期的SF3B1陽性表達(dá)率； 采用Pearson相關(guān)分析SF3B1基因陽性率與胰腺癌患者不同分化程度、TNM分期的關(guān)系。

1.2.1 SF3B1基因表達(dá)檢測 采用熒光定量PCR法檢測SF3B1基因表達(dá)水平。SF3B1基因表達(dá)陽性：細(xì)胞漿、細(xì)胞膜或細(xì)胞核中有棕褐色沉淀。

1.2.2 切片制備 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本取胰腺癌組織與癌旁組織，所有臨床標(biāo)本切除后經(jīng)HE染色病理學(xué)確認(rèn)性質(zhì)，液氮冷凍后凍存在-80℃超低溫冰箱中保存待用,操作人員嚴(yán)格按照免疫組化染色方法步驟進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 SF3B1基因在患者癌組織、癌旁組織中的陽性率比較 癌灶組織中的SF3B1基因陽性率77.08%(37/48)高于癌旁組織16.67%(8/48)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.179，P<0.001)。

2.2 不同分化程度的胰腺癌患者SF3B1陽性率比較 高分化患者的SF3B1陽性率高于未分化患者(χ2=4.012，P<0.05)，中分化、低分化與未分化患者的SF3B1陽性率對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.089，P>0.05)，高分化與中分化、低分化患者SF3B1陽性率組間對比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.657，P>0.05)。見表1。

表1 不同分化程度的胰腺癌患者SF3B1陽性率比較

2.3 不同TNM分期的胰腺癌患者SF3B1陽性率比較 不同TNM分期的胰腺癌患者SF3B1基因陽性率對比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.923，P<0.05)。見表2。

表2 不同TNM分期的胰腺癌患者SF3B1陽性率比較

2.4 SF3B1基因陽性率與胰腺癌分化程度、TNM分期的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，SF3B1基因陽性率與胰腺癌分化程度呈正相關(guān)，與TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 SF3B1基因陽性率與胰腺癌分化程度、TNM分期的關(guān)系

3 討論

胰腺癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有高侵襲性，早期容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此類患者早期癥狀不典型，多合并黃疸、消瘦、腹部包塊等，多數(shù)患者就診時(shí)已合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或處于病情晚期，錯(cuò)過最佳手術(shù)治愈時(shí)機(jī)。因此，尋找確診胰腺癌的生物學(xué)指標(biāo)，分析其與胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，對于疾病早發(fā)現(xiàn)、早治療及預(yù)后評估具有積極意義[7-8]。有研究[9-11]發(fā)現(xiàn)，對于胰腺癌的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)評估多基于細(xì)胞遺傳學(xué)特性。 SF3B1基因在乳腺癌、骨髓增生異常綜合征等癌癥發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[12-14]。本文探討分析胰腺癌組織中SF3B1基因的表達(dá)情況及其與腫瘤分化程度、分期的相關(guān)性，旨為SF3B1基因在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供參考。

RNA剪切對維持蛋白質(zhì)多樣性起著重要作用，為真核細(xì)胞基因表達(dá)中重要生物學(xué)過程，普遍存在真核細(xì)胞中，可促成熟mRNA生成，剪切因子突變變化在基因序列調(diào)控，或因產(chǎn)生不同剪接變異體最終會(huì)導(dǎo)致遺傳性癌癥，剪接體成分突變、異常剪接活性為癌癥表現(xiàn)的一個(gè)標(biāo)志[15-16]。SF3B1處于染色體2q33.1，編碼U2小分子核糖核蛋白復(fù)合體的核心成分[17]。U2-snRNP處于剪接體的催化部位，可識(shí)別并限定內(nèi)含子-外顯子連接處3剪接位點(diǎn)，剪切體經(jīng)構(gòu)想改變顯露不同結(jié)構(gòu)域，與mRNA特異性結(jié)合，而且參與mRNA前體剪接加工，起到調(diào)節(jié)剪接變異多樣性[18]。董志雯等[19]報(bào)道的SF3B1基因在胰腺癌中的陽性表達(dá)率為4%。本研究顯示，胰腺癌患者癌灶組織中的SF3B1基因陽性率(77.08%)高于癌旁組織(16.67%)(P<0.05)，表明癌組織SF3B1基因表達(dá)顯著高于癌旁正常組織,提示SF3B1基因可能是胰腺癌基因診斷和治療的靶點(diǎn)之一，但國內(nèi)外并無相關(guān)研究，其結(jié)果的客觀性仍需臨床研究進(jìn)一步證實(shí)。

本次研究還顯示，TNM分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期的胰腺癌患者SF3B1陽性率分別為100.00%、36.36%、6.25%、0.00%，高分化、中分化、低分化、未分化的胰腺癌患者SF3B1陽性率分別為31.25%、13.33%、8.33%、0.00%。Pearson相關(guān)分析顯示，SF3B1基因陽性率與胰腺癌分化程度、TNM分期的相關(guān)系數(shù)為0.368、 -0.548。表明SF3B1基因陽性率與胰腺癌患者分化程度呈正相關(guān)，與TNM分期呈負(fù)相關(guān)。由此研究提示，SF3B1陽性率越高，則疾病分化程度越高，臨床可根據(jù)SF3B1陽性率水平評估患者病情嚴(yán)重程度。SF3B1基因作為分子學(xué)異常的指標(biāo)，參與選擇性剪接而誘發(fā)疾病發(fā)生，與胰腺癌病情嚴(yán)重程度相關(guān)，這可為后期臨床開展治療提供指導(dǎo)思路。

綜上所述，胰腺癌患者癌旁組織中的SF3B1基因陽性率高于癌灶組織，SF3B1基因陽性率與胰腺癌分化程度呈正相關(guān)，SF3B1基因陽性率與胰腺癌TNM分期呈負(fù)相關(guān)。SF3B1基因可能是胰腺癌的抑癌因子，但本次研究僅對SF3B1基因的陽性率進(jìn)行了研究，并未對SF3B1基因編碼的蛋白水平進(jìn)行研究，擬在后續(xù)研究中提升改進(jìn)，以驗(yàn)證本研究結(jié)果。