陳寧，張遠(yuǎn)杏，黃權(quán)華

（深圳華潤(rùn)九新藥業(yè)有限公司，廣東 深圳 518049）

鹽酸米托蒽醌在臨床上又稱米西寧，屬于蒽醌類化療藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與阿霉素相似，同屬細(xì)胞周期非特異性的廣譜抗癌藥，抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于阿霉素類藥物，而心臟毒性則較阿霉素輕，臨床上主要用于治療惡性淋巴瘤、晚期乳腺癌等疾?。??2］?？寡鮿┦亲⑸湟褐幸环N普遍使用的附加劑，可延緩藥物氧化，增加藥物的穩(wěn)定性和有效性［3］。注射劑中常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉和焦亞硫酸鈉等，一般濃度為0.1%~0.2%。本研究中鹽酸米托蒽醌注射液中添加的抗氧劑為焦亞硫酸鈉，處方濃度為10μg/mL。抗氧劑作為功能性輔料，有必要對(duì)其在效期內(nèi)的含量變化進(jìn)行檢測(cè)。

對(duì)于焦亞硫酸鈉的測(cè)定，常用的檢測(cè)方法主要包括電位滴定法、紫外分光光度法、液相色譜法和離子色譜法等［4?11］。其中，電位滴定法測(cè)定注射液時(shí)，所需樣品量較大、靈敏度較低，不適用于制劑中痕量焦亞硫酸鈉的測(cè)定；使用紫外分光光度法和液相色譜法時(shí)，由于鹽酸米托蒽醌注射液為深藍(lán)色蒽醌類注射液，顏色較深，且鹽酸米托蒽醌干擾焦亞硫酸鈉的測(cè)定導(dǎo)致準(zhǔn)確度不夠；而離子色譜法具有專屬、靈敏、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景良好。本文利用離子色譜法對(duì)含有強(qiáng)紫外吸收成分的蒽醌類注射液中的焦亞硫酸鈉含量進(jìn)行了測(cè)定，解決了鹽酸米托蒽醌干擾焦亞硫酸鈉測(cè)定這一問(wèn)題，為蒽醌類注射液中抗氧劑焦亞硫酸鈉含量的測(cè)定提供了一種高效、可靠的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Dionex AQ?1200型離子色譜儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；XS205 Dual Range型電子分析天平（瑞士Mettler?Toledo公司）。

1.2 試藥

鹽酸米托蒽醌注射液（批號(hào)：011190801、011190802、011190803、011190804、011190805、011190806、011190901、20180101、20180102、20180103，深圳華潤(rùn)九新藥業(yè)有限公司）；諾肖林（批號(hào)：P00033S，Pharma GmbH Co.KG）；焦亞硫酸 鈉（Aladdin，批 號(hào)：J1816049，質(zhì) 量 分 數(shù)：99.99%）；甲醛（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DionexⅠonPac AS11?HC（4.0mm×250mm）；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：25μL；淋洗液：KOH溶液（淋洗液自動(dòng)發(fā)生器），按表1進(jìn)行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫程序Table 1 The gradient elution program

2.2 溶液的配制

2.2.1 稀釋劑（穩(wěn)定劑）0.2%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲醛水溶液。

2.2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液 取焦亞硫酸鈉10.17 mg，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 對(duì)照品溶液 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.4 供試品溶液 精密量取鹽酸米托蒽醌注射液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，稀釋成質(zhì)量濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取上述溶液25μL注入離子色譜儀，記錄色譜圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，在該色譜條件下，焦亞硫酸鈉色譜峰與相鄰輔料色譜峰分離度為2.64，理論塔板數(shù)為11 605，符合要求。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的色譜圖Figure 1 Chromatogram of system suitability solution

2.3.2 專屬性試驗(yàn) 空白溶劑溶液：取0.2%甲醛溶液作為溶劑空白溶液。混合輔料空白溶液：按處方比例分別稱取除焦亞硫酸鈉外的各輔料，共置1 L量瓶中，超純水溶解，定容至刻度，搖勻，精密移取1 mL至10 mL棕色量瓶中，加入0.2%甲醛溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液作為混合輔料空白溶液。對(duì)照品溶液：同“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液。加標(biāo)供試品溶液：分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL、鹽酸米托蒽醌注射液1 mL，置同一10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過(guò)濾，續(xù)濾液作為加標(biāo)供試品溶液。

取上述溶液分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖見(jiàn)圖2?？梢?jiàn)，空白溶劑溶液、空白輔料溶液在焦亞硫酸鈉出峰處無(wú)干擾，符合要求，專屬性良好。

圖2 專屬性試驗(yàn)色譜圖Figure 2 Chromatogram of specificity

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋，制成質(zhì)量濃度分別為0.101 7、1.017 0、3.051 0、5.085 0、8.136 0、10.170 0、12.204 0、15.255 0、20.340 0μg/mL的溶液作為系列對(duì)照品溶液。按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，同時(shí)記錄色譜圖。以樣品濃度（X,μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果顯示焦亞硫酸鈉在0.101 7~20.340 0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.077 5X-0.046（r=0.998）。

2.3.4 定量限與檢測(cè)限 精密量取“2.3.3”項(xiàng)下的系列對(duì)照品溶液，逐級(jí)定量稀釋，進(jìn)樣并記錄色譜圖，定量限（LOQ）以信噪比為10∶1的濃度進(jìn)行計(jì)算，檢測(cè)限（LOD）以信噪比為3∶1的濃度計(jì)算。結(jié)果得焦亞硫酸鈉的定量限為0.10μg/mL，檢測(cè)限為0.05μg/mL。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2”項(xiàng)方法配制供試品溶液6份，精密量取供試品溶液1.00 mL，置10 mL棕色容量瓶中，分別精密加入焦亞硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（100.1μg/mL）1.00 mL共6份，再按照供試品溶液制備方法制備，即得100%限度加標(biāo)供試品溶液。供試品溶液和100%限度加標(biāo)供試品溶液分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算焦亞硫酸鈉的含量。結(jié)果表明，6份供試品溶液未檢出焦亞硫酸鈉，6份100%限度加標(biāo)供試品溶液焦亞硫酸鈉的平均質(zhì)量濃度為9.04μg/mL，RSD為2.1%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2”項(xiàng)下配制對(duì)照品儲(chǔ)備液，再稀釋成質(zhì)量濃度為10μg/mL的對(duì)照品溶液，按“2.2.5”項(xiàng)下配制100%限度供試品溶液，于室溫放置0、4、8、12、24、36 h后進(jìn)樣分析，記錄峰面積，分別計(jì)算對(duì)照品溶液、100%限度供試品溶液放置不同時(shí)間后主峰峰面積與0時(shí)峰面積的RSD值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of solution stability tests

結(jié)果表明，對(duì)照品溶液、100%限度供試品溶液在室溫下放置8 h，主峰峰面積與0時(shí)峰面積的RSD值＜2%，放置12 h后RSD值＞2%，表明焦亞硫酸鈉對(duì)照品溶液及100%限度加標(biāo)供試品溶液在室溫下存放8 h時(shí)穩(wěn)定性良好。

2.3.7加樣回收率試驗(yàn) 精密量取鹽酸米托蒽醌注射液1.00 mL，置10 mL棕色量瓶中，共9份，分別精密加入焦亞硫酸鈉對(duì)照品溶液（100.1μg/mL）0.80、1.00、1.20 mL各3份，按“2.2.4”項(xiàng)方法制備供試品溶液，即得80%、100%、120%3個(gè)濃度的回收率樣品溶液，注入離子色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算焦亞硫酸鈉的含量，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 焦亞硫酸鈉加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of recovery tests of sodium pyrosulfite(n=9)

可見(jiàn)，9份焦亞硫酸鈉的回收率范圍為90.12%~92.69%，滿足90%~108%要求，RSD為1.1%，小于6.0%，符合要求，表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.8 樣品檢測(cè) 取10批自制鹽酸米托蒽醌注射液（011190801、011190802、011190803、011190804、011190805、011190806、011190901、20180101、20180102、20180103）各2份，及1批參比制劑諾肖林（P00033S），按“2.2”項(xiàng)方法配制供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，其中9批自制樣品及參比制劑中均未檢測(cè)出焦亞硫酸鈉，1批自制樣品中焦亞硫酸鈉質(zhì)量濃度為6.45 ng/mL，RD為0.0%（n=2），表明成品中焦亞硫酸鈉僅殘留微量或無(wú)殘留，自制樣品與參比制劑一致。

3 討論

本研究通過(guò)KOH淋洗液梯度洗脫的方式建立了測(cè)定鹽酸米托蒽醌注射液中痕量抗氧劑焦亞硫酸鈉含量的離子色譜方法，該方法具有較高的專屬性、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。本文方法中焦亞硫酸鈉的檢測(cè)限為0.05μg/mL，定量限為0.10μg/mL，分別為按處方組成折算供試品溶液理論含量10μg/mL的0.5%、1%，方法靈敏度滿足測(cè)定要求。因供試品中未檢出焦亞硫酸鈉，僅用供試品不能確定考察方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性，故方法學(xué)考察時(shí)平行對(duì)比加入處方量焦亞硫酸鈉的100%限度加標(biāo)供試品溶液的測(cè)定結(jié)果；另外，采用100%限度供試品溶液考察流速（1.0±0.1）mL/min條件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，測(cè)得該流速條件下樣品中焦亞硫酸鈉含量的RSD為2.0%，表明流速的微小變動(dòng)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小，方法耐用性良好。

鹽酸米托蒽醌較易被氧化，焦亞硫酸鈉作為抗氧劑，在生產(chǎn)過(guò)程中保護(hù)鹽酸米托蒽醌不被氧化，成品檢測(cè)結(jié)果顯示焦亞硫酸鈉僅殘留微量或無(wú)殘留。經(jīng)鹽酸米托蒽醌注射液穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，焦亞硫酸鈉的處方量達(dá)到使用目的，且無(wú)論是焦亞硫酸鈉殘留量或成品穩(wěn)定性趨勢(shì)均與參比制劑一致。焦亞硫酸鈉溶于水，久置空氣中，則氧化成硫酸鈉，參考文獻(xiàn)[12]采用0.2%甲醛溶液作為溶劑，能起到抗氧化作用，提高供試品溶液穩(wěn)定性，保證測(cè)定準(zhǔn)確。

本研究所建方法可準(zhǔn)確測(cè)定鹽酸米托蒽醌注射液中抗氧劑焦亞硫酸鈉的含量，適用于該品種中焦亞硫酸鈉殘留量的控制。