高 磊，馮 崴，王廷濤，王茂松

原發(fā)性高血壓是缺血性心肌病最重要的危險因素之一，現(xiàn)有研究[1]表明，高血壓合并的心肌梗死是由遺傳因素和環(huán)境因素等綜合作用的結(jié)果。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)不僅在高血壓發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用，而且是高血壓誘發(fā)心肌梗死過程中重要的影響因子。人血管緊張素Ⅱ受體1(AGTR1)介導(dǎo)了血管緊張素AngⅡ主要效應(yīng)的發(fā)生[2]，所以在高血壓的研究中AGTR1基因一直是研究的重點。本研究對AGTR1 A1166C基因多態(tài)性在健康成人、高血壓病人、高血壓合并心肌梗死病人間的分布頻率進(jìn)行比較，以探討AGTR1基因和高血壓合并心肌梗死的相關(guān)性?，F(xiàn)作報道。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2017-2018年我院體檢中心體檢的健康成人121名作為正常組；選擇同期體檢中心體檢的高血壓病人105例作為高血壓組；選擇同期急診收治的高血壓合并心肌梗死病人95例作為高血壓合并心肌梗死組(合并組)。合并組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)原發(fā)性高血壓合并心肌梗死病人，其中原發(fā)性高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)為收縮壓≥140 mmHg和/或舒張壓≥90 mmHg，且經(jīng)心電圖和心肌酶檢測確診為急性心肌梗死；(2)病人無高血壓腎病等高血壓并發(fā)癥；(3)病人無腦梗死或者心肌梗死等血栓病史；(4)病人無精神障礙疾??；(5)自愿入組。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)繼發(fā)性高血壓；(2)既往有缺血性卒中、心肌梗死病史或血栓栓塞性疾病；(3)患有高血壓腎病等高血壓繼發(fā)性疾??；(4)妊娠期、哺乳期婦女；(5)精神障礙疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會論證同意，病人均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法 病人禁食12 h后取外周靜脈血5 mL，采用DNA提取試劑盒提取外周血總DNA，引物設(shè)計按照Doria等設(shè)計，引物1：5′-CAC CAT GTT TTG AGG TT-3′；引物2：5′-CGA GTT TCT GAC ATT GTT C-3′。PCR擴(kuò)增目的片段基因，反應(yīng)步驟：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共循環(huán)30次，72 ℃終末循環(huán)10 min，最后在4 ℃終止反應(yīng)。A1166C的變異導(dǎo)致Dde Ⅰ限制性內(nèi)切酶切位點的出現(xiàn)，PCR產(chǎn)物用Dde Ⅰ在37 ℃酶切1 h。2%瓊脂糖凝膠電泳(恒壓120 V，電泳液為1×TAE)，紫外燈下觀察結(jié)果。

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為AGTR1 3′端非編碼區(qū)5′末端1 058～1 331 bp之間274 bp的DNA。擴(kuò)增產(chǎn)物中無A1166C突變切點則為274 bp，若擴(kuò)增片段中存在A-C堿基替換則產(chǎn)生Dde Ⅰ切點，經(jīng)過酶切后產(chǎn)生165 bp和109 bp的片段。AA基因有一條274 bp片段，CC基因含有165 bp和109 bp 2條片段，含有以上三條片段的為AC雜合基因。電泳結(jié)果見圖1。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用方差分析、q檢驗、χ2檢驗、秩和檢驗和Fisher′s確切概率法。

2 結(jié)果

2.1 3組一般資料比較 3組性別、年齡、體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高血壓組和合并組舒張壓、收縮壓均高于正常組(P<0.05)，高血壓組與合并組舒張壓、收縮壓和糖尿病、高血脂患病情況差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

表1 3組病人一般資料比較[n；百分率(%)]

2.2 3組AGTR1 A1166C變異分布頻率 正常組、高血壓組和合并組的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)；3組基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，A等位基因與C等位基因差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。

2.3 合并組不同高血壓分級病人的AGTR1 A1166C多態(tài)性 按照高血壓分級標(biāo)準(zhǔn)：1級高血壓(輕度)，收縮壓140～159 mmHg或舒張壓90～99 mmHg；2級高血壓(中度)，收縮壓160～179 mmHg或舒張壓100～109 mmHg；3級高血壓(重度)，收縮壓≥180 mmHg或舒張壓≥110 mmHg；單純收縮期高血壓，收縮壓≥140 mmHg和舒張壓<90 mmHg。合并組不同高血壓分級病人AA基因和等位基因A分布頻率間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表2 3組基因型和等位基因分布[n；百分率(%)]

表3 合并組不同高血壓分級病人AGTR1 A1166C多態(tài)性[n；百分率(%)]

3 討論

腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)相關(guān)的基因一直是被認(rèn)為原發(fā)性高血壓，腎性高血壓病發(fā)病的重要調(diào)控基因[3-5]，因為該系統(tǒng)對于全身和腎臟內(nèi)的血流動力學(xué)有著顯著的調(diào)控作用，而高血壓一直被認(rèn)為是心肌梗死發(fā)生的獨立高危因素之一。在高血壓病人中AngⅡ可以通過激活血管緊張素受體和下游通路[6-7]，引起血壓的增高。在改善高血壓的狀態(tài)后，應(yīng)用RAAS抑制劑可以明顯改善心肌梗死的發(fā)生，但是仍然有相當(dāng)一部分病人在血壓控制良好的情況下仍然出現(xiàn)心肌梗死，這表明高血壓合并心肌梗死的發(fā)生可能存在個體易感性。

人類AGTR1基因位于3q21～25，僅含有一個外顯子結(jié)構(gòu)，A1166C位于3端的非編碼區(qū)，不編碼蛋白，但是可能對于基因的調(diào)控轉(zhuǎn)錄和翻譯發(fā)揮作用。目前對于AGTR A1166C基因多態(tài)性對于高血壓和心肌梗死的發(fā)生關(guān)系鮮有報道，從生物學(xué)上看，AngⅡ的作用主要由AGTR1介導(dǎo)[7-9]，AGTR1主要分布在成人血管、腎、心、腦、肝等部位，和血流動力的調(diào)節(jié)密切相關(guān)[10-11]。

本研究以臨床中病人為研究對象，從病人資料來看，體檢中心體檢健康成人和高血壓病人以及高血壓合并心肌梗死的病人，在性別、年齡等方面無明顯差別，排除了年齡等因素造成的結(jié)果不準(zhǔn)確。基因多態(tài)性結(jié)果顯示，3組基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義，A等位基因與C等位基因差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示AGTR1基因可能高血壓合并心肌梗死發(fā)生的易感基因。在高血壓分級合并心肌梗死中發(fā)現(xiàn)，合并組不同高血壓分級病人AA基因和等位基因A分布頻率間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中A等位基因在1、2級高血壓病人中頻率較高，而C主要在3級高血壓中頻率較高，提示高血壓分級也可能與該等位基因分布頻率有關(guān)，相關(guān)等位基因頻率變高可能會導(dǎo)致心肌梗死的發(fā)生。

綜上，本文通過探討AGTR1與高血壓合并心肌梗死的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)AGTR A1166C基因多態(tài)性與心肌梗死的發(fā)生有一定關(guān)系，對于高血壓病人進(jìn)行心肌梗死易感性篩查有一定意義，對臨床診斷和預(yù)防心肌梗死有借鑒價值，但是由于基因作用的復(fù)雜性，AGTR1基因與心肌梗死發(fā)生關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。