衛(wèi)秀余，歐偉業(yè)，彭俊平，胡永明，李 江，婁昆鵬

（1.上海市奉賢區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 奉賢 201499；2.浙江美保龍生物技術(shù)有限公司，浙江 金華 321017）

浙江某規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病疫苗為某國(guó)外品牌Bartha-K61毒株，基礎(chǔ)母豬一年4次普免，生產(chǎn)成績(jī)較穩(wěn)定，偽狂犬病gE抗體近幾年一直保持陰性。為了驗(yàn)證某公司生產(chǎn)的偽狂犬病C株自然缺失株活疫苗的免疫效果[1]，2020年1—6月設(shè)計(jì)為期6個(gè)月的免疫跟蹤試驗(yàn)，通過與在使用的某品牌Bartha-K61株活疫苗平行對(duì)比，采用IDEXX偽狂犬病ELISA試劑盒檢測(cè)抗體陽(yáng)性率、抗體滴度等指標(biāo)來評(píng)價(jià)了解免疫效果差異，為該場(chǎng)偽狂犬病疫苗選擇、免疫方案優(yōu)化提供參考依據(jù)[2]。

1 材料與方法

選取預(yù)產(chǎn)期為2020年1月初的妊娠母豬29頭放置單獨(dú)分娩舍，所產(chǎn)仔豬作為試驗(yàn)組，另選分娩期相同的29頭母豬放置在另一棟分娩舍，所產(chǎn)仔豬作為對(duì)照組。試驗(yàn)組免疫C株偽狂犬病疫苗，對(duì)照組免疫Bartha-K61株偽狂犬病疫苗。免疫程序均為仔豬60日齡首免，100日齡二免，兩組平行采血方案均為首免前1天第1批采血（即59日齡），二免前1天第2批采血（即99日齡），二免后30天第3批采血（即130日齡），二免后60天第4批采血（即160日齡）（圖1）。

圖1 平行對(duì)比試驗(yàn)免疫和采血方案

兩組每批分別隨機(jī)選10頭仔豬采血并送至上海某知名獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)偽狂犬病gB和gE抗體。檢測(cè)采用IDEXX競(jìng)爭(zhēng)ELISA偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒，PRV-gB試劑盒批號(hào)為HS620，PRV-gE試劑盒批號(hào)為L(zhǎng)S283。標(biāo)準(zhǔn)為NY/T 678—2003，酶標(biāo)儀型號(hào)為INFINTE F50。

2 結(jié)果與討論

兩組4批次采血檢測(cè)PRV-gE抗體值如圖2，從多批次檢測(cè)結(jié)果來看，PRV-gE無抗體陽(yáng)性豬只，說明該場(chǎng)未發(fā)現(xiàn)偽狂犬病野毒感染，因此PRV-gB抗體均為疫苗免疫產(chǎn)生的抗體。圖3為PRV-gB抗體值，第2批采血時(shí)為首免后40天，二免前1天，即仔豬99日齡時(shí)，從檢測(cè)值看試驗(yàn)組S/N均值為0.28，陽(yáng)性率80%；對(duì)照組S/N均值為0.60，陽(yáng)性率40%。從母源抗體看試驗(yàn)組略高于對(duì)照組，但是在首免后試驗(yàn)組gB抗體值和陽(yáng)性率仍均高于對(duì)照組，這說明偽狂犬病C株活疫苗突破母源抗體干擾能力更強(qiáng)。

圖2 兩組共4批次PRV-gE抗體值

圖3 兩組共4批次PRV-gB抗體值

據(jù)某知名獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室近兩年的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，豬場(chǎng)偽狂犬病疫苗首次注射免疫時(shí)間普遍存在偏早的問題，一是導(dǎo)致疫苗免疫與母源抗體干擾大；二是導(dǎo)致中大豬免疫抗體保護(hù)力不足，特別是如今肥育日齡延長(zhǎng)時(shí)問題更顯突出[3]。偽狂犬病C株活疫苗的優(yōu)勢(shì)是在未能準(zhǔn)確測(cè)定首免日齡的情況下，突破母源抗體干擾能力更強(qiáng)，更適合作為豬場(chǎng)偽狂犬病免疫用苗。

第4批采血為二免后60天，兩組PRV-gB抗體陽(yáng)性率均為100%，試驗(yàn)組S/N均值0.06，對(duì)照組S/N均值0.16，可見試驗(yàn)組抗體滴度均值明顯優(yōu)于對(duì)照組。為了更進(jìn)一步了解兩組PRV-gB抗體半衰期、陽(yáng)性值維持時(shí)間，按照實(shí)驗(yàn)室慣用做法，將兩組共20份血清分別按照1∶40稀釋后復(fù)檢gB抗體，檢測(cè)值見表1。從檢測(cè)結(jié)果可知，稀釋后復(fù)檢試驗(yàn)組抗體S/N均值為0.63，陽(yáng)性率80%，對(duì)照組S/N均值為0.81，陽(yáng)性率僅為20%，試驗(yàn)組抗體均值和陽(yáng)性率均明顯優(yōu)于對(duì)照組，即C株偽狂犬病免疫組gB抗體滴度更高，抗體半衰期和陽(yáng)性值維持時(shí)間更長(zhǎng)，免疫效果更好。

表1 兩組第4批次1∶40稀釋PRV-gB抗體值

據(jù)了解，IDEXX偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒為了服務(wù)美國(guó)農(nóng)場(chǎng)偽狂犬病監(jiān)測(cè)，在gE抗體陰性，農(nóng)場(chǎng)不免疫偽狂犬病疫苗的情況下，通常監(jiān)測(cè)gB抗體陰陽(yáng)性來判斷是否感染[4]。此方法常用作美國(guó)偽狂犬病監(jiān)測(cè)的初篩步驟，因此設(shè)置的靈敏度很高。但是，中國(guó)絕大多數(shù)豬場(chǎng)是免疫偽狂犬病疫苗，不論有無偽狂犬病野毒感染，gB抗體值往往為陽(yáng)性，因此我們看到的檢測(cè)報(bào)告gB抗體往往是高比例的陽(yáng)性，幾乎不存在全陰的豬場(chǎng)，這點(diǎn)正好和美國(guó)相反，這個(gè)時(shí)候gB抗體陽(yáng)性的高靈敏度對(duì)于中國(guó)豬場(chǎng)來說未必是優(yōu)點(diǎn)。以本場(chǎng)為例，在gE抗體陰性的情況下，第4批采血試驗(yàn)組（C株）和對(duì)照組（Bartha-K61株）gB抗體均為陽(yáng)性，區(qū)分度低，不能直觀展示免疫效果差異。因此獸醫(yī)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在用IDEXX試劑盒檢測(cè)gB抗體時(shí)，常對(duì)待檢血清1∶40稀釋復(fù)檢gB抗體，此時(shí)陰陽(yáng)性比例高低、免疫效果的差異才能更好地區(qū)分出來，也能更好地反映豬場(chǎng)保護(hù)性抗體水平的真實(shí)性。

總之，通過偽狂犬病C株和Bartha-K61株的平行免疫對(duì)比試驗(yàn)可知，某公司生產(chǎn)的C株偽狂犬病疫苗突破母源抗體干擾能力更強(qiáng)，產(chǎn)生的免疫抗體滴度更高、維持時(shí)間更長(zhǎng)。本研究為規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病疫苗毒株的選擇提供參考依據(jù)。