姜 晨，忽星歌，姜 琳，徐榮佳，張佳佳，徐穎慧，郭雨昕，白 雪，黃詩(shī)琦

益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠PPARγ/NF-κB信號(hào)通路的影響

姜 晨，忽星歌，姜 琳，徐榮佳，張佳佳，徐穎慧，郭雨昕，白 雪，黃詩(shī)琦

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300381

觀察益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病模型大鼠的治療作用，并基于過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路探討其作用機(jī)制。隨機(jī)選取10只SD大鼠作為對(duì)照組，其余大鼠以“牛血清白蛋白＋四氯化碳＋脂多糖”聯(lián)合用藥免疫誘導(dǎo)的方法建立IgA腎病模型，IgA腎病大鼠隨機(jī)分為模型組及益腎化濕顆粒低、高劑量（1.35、5.40 g/kg）組和潑尼松（5.40 mg/kg）組，每組15只。實(shí)驗(yàn)第7～14周，各給藥組ig藥物，對(duì)照組和模型組ig蒸餾水，1次/d，觀察大鼠的一般狀態(tài)。給藥結(jié)束后，檢測(cè)各組大鼠24 h尿蛋白，考察各組大鼠腎組織病理情況；采用免疫組化法檢測(cè)各組大鼠腎組織腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況；采用Western blotting法檢測(cè)各組大鼠腎組織PPARγ和NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白p65、p-p65蛋白表達(dá)情況。益腎化濕顆粒能夠顯著降低IgA腎病大鼠24 h尿蛋白、尿素氮和血肌酐水平（＜0.05、0.01），減少I(mǎi)gA腎病大鼠腎小球系膜區(qū)IgA沉積，顯著降低腎組織TNF-α沉積（＜0.05）；益腎化濕顆粒高劑量組大鼠腎組織p65和p-p65蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），PPARγ蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05）。益腎化濕顆粒能夠減少I(mǎi)gA腎病大鼠24 h尿蛋白，改善腎功能及腎組織病理?yè)p傷，延緩IgA腎病進(jìn)展，其作用機(jī)制可能與調(diào)控PPARγ/NF-κB通路有關(guān)。

IgA腎?。灰婺I化濕顆粒；腎組織損傷；過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ；核因子-κB

IgA腎病是全世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾?。╬rimary acute glomerulo-nephritis，PCGN），是導(dǎo)致終末期腎臟病的主要原因之一，在亞洲地區(qū)尤為高發(fā)。以IgA為主的免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)沉積是IgA腎病典型病理表現(xiàn)。沉積在腎小球中的IgA免疫復(fù)合物介導(dǎo)細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β），可誘導(dǎo)炎癥和腎小球硬化[1]，繼而導(dǎo)致腎功能損傷，而這一系列的損傷主要通過(guò)各種炎癥通路的激活和能量代謝異常導(dǎo)致的氧化應(yīng)激、自噬與凋亡失衡而引起。研究表明，在IgA腎病過(guò)程中核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）炎癥通路被激活，相關(guān)蛋白高表達(dá)[2]。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARγ）是由配體激活的激素受體家族成員，參與細(xì)胞能量的代謝，也是參與腎臟病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵受體。PPARγ可以選擇性地抑制NF-κB等因子轉(zhuǎn)錄，從而抑制炎癥反應(yīng)，提示PPARγ的激活可能是IgA腎病潛在的保護(hù)機(jī)制之一。因此，調(diào)控PPARγ/NF-κB信號(hào)對(duì)治療IgA腎病有重要意義。

IgA腎病中醫(yī)病機(jī)以脾腎氣虛為主，兼見(jiàn)濕熱證、水濕證、血瘀證等[3]。益腎化濕顆粒益氣升陽(yáng)化濕的功效契合IgA腎病的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)，益氣升陽(yáng)法及益腎化濕顆粒中組方藥物能夠抑制腎病患者體內(nèi)炎性反應(yīng)，調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和內(nèi)皮功能，改善患者的腎功能，是治療慢性腎炎的有效方法[2,4]。研究表明，益氣健脾化濕法能夠通過(guò)上調(diào)PPARγ、抑制NF-κB等炎癥因子的表達(dá)，從而抑制炎癥反應(yīng)及調(diào)節(jié)免疫，并且能抑制Toll樣受體4（Toll like receptor 4，TLR4）介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，提高機(jī)體免疫力，減少炎性細(xì)胞造成的黏膜損傷[5-7]。因此，本研究通過(guò)建立IgA腎病大鼠模型，觀察腎組織病理以及腎組織PPARγ和NF-κB通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)，從而探討益腎化濕顆粒治療IgA腎病的具體作用機(jī)制，為臨床IgA腎病的治療提供新的依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠70只，體質(zhì)量180 g，6周齡，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2019-0008。動(dòng)物于天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，屏障環(huán)境，溫度20～25 ℃，濕度50%～70%，自由進(jìn)食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)TCM- LAEC2020056）。

1.2 藥品與試劑

益腎化濕顆粒（批號(hào)20201118，10 g/袋）購(gòu)自廣州康臣藥業(yè)有限公司；醋酸潑尼松片（批號(hào)2106023，5 mg/片）購(gòu)自浙江仙琚制藥股份有限公司；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、4%多聚甲醛、PBS溶液、DAPI、抗熒光淬滅封片劑、EDTA抗原修復(fù)緩沖液、TBST溶液、ECL發(fā)光液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；蓖麻油、四氯化碳購(gòu)自上?；S；尿蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京雷根生物技術(shù)有限公司；肌酐試劑盒（批號(hào)AUZ3562）、尿素氮試劑盒（批號(hào)AUZ3611）、蘇木素-伊紅（HE）染色套裝、Masson染色套裝（批號(hào)AF0003）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；HRP標(biāo)記的山羊抗兔抗體（批號(hào)GB23303）、p65抗體（批號(hào)GB11142）、β-actin小鼠單克隆抗體（批號(hào)GB12001）購(gòu)自武漢塞維爾生物科技公司；IL-1β單克隆抗體（批號(hào)ab254360）、TNF-α兔單克隆抗體（批號(hào)ab215188）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgA抗體（批號(hào)bs-10491R-FITC）購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；磷酸化p65（phosphorylated p65，p-p65）抗體（批號(hào)AF2006）購(gòu)自美國(guó)Affinity公司；PPARγ抗體（批號(hào)16643-1-AP）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.3 儀器

脫水機(jī)、染色機(jī)（意大利DIAPATH公司）；冰凍切片機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；凍臺(tái)（武漢俊杰公司）；病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）；BX51型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；超聲波細(xì)胞破碎儀（寧波新芝生物公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物造模、分組與給藥

70只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)選取10只作為對(duì)照組，從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之日起ig蒸餾水（600 mg/kg），隔日1次，連續(xù)8周；實(shí)驗(yàn)第6周和第8周尾iv 0.2 mL 0.9%氯化鈉溶液，1次/周。其余大鼠使用免疫誘導(dǎo)復(fù)合方法建立實(shí)驗(yàn)性IgA腎病模型[8]：從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之日起ig BSA（600 mg/kg），隔日1次，連續(xù)8周；頸部sc 0.1 mL四氯化碳和0.3 mL蓖麻油，1次/周，連續(xù)8周；實(shí)驗(yàn)第6周和第8周尾iv LPS（250 μg/kg），1次/周。第8周末測(cè)量每只大鼠尿蛋白水平，隨機(jī)取模型組和對(duì)照組大鼠各2只，取腎組織，包埋、固定，采用光鏡和免疫熒光檢測(cè)腎臟組織病理，觀察到模型組大鼠腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多，系膜區(qū)IgA沉積顯著，并伴有蛋白尿，而對(duì)照組無(wú)上述明顯表現(xiàn)，則確認(rèn)造模成功[9]。

將IgA腎病模型大鼠隨機(jī)分為模型組、益腎化濕顆粒低、高劑量（1.35、5.40 g/kg）組和潑尼松（5.40 mg/kg）組，每組15只。益腎化濕顆粒溶于蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為0.40 g/mL的溶液；醋酸潑尼松片溶于蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的混懸液。各給藥組ig相應(yīng)藥物，對(duì)照組和模型組ig等體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)8周。

2.2 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠尿蛋白的影響

給藥結(jié)束的前2 d，大鼠禁食不禁水，置入代謝籠，記錄24 h尿量，收集約10 mL中層尿液，離心，采用麗春紅比色法測(cè)定尿蛋白濃度，計(jì)算24 h尿蛋白含量。

2.3 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎功能的影響

給藥結(jié)束后，大鼠禁食12 h，吸入2.5%異氟烷麻醉，腹主動(dòng)脈采血8 mL，離心取血清，于?80 ℃冰箱保存，使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中肌酐和尿素氮水平。

2.4 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織病理的影響

大鼠處死后，取左腎組織，于4%多聚甲醛中固定，乙醇脫水、透明、浸蠟后，石蠟包埋并切片（厚3 μm），分別進(jìn)行HE、Masson染色，于顯微鏡下觀察并拍照。

2.5 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織IgA免疫熒光的影響

取各組大鼠腎組織石蠟切片，沖洗、修復(fù)后，加入IgA抗體孵育，用PBS溶液沖洗3遍；避光滴加FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgA抗體，37 ℃避光孵育50 min，用PBS溶液洗滌3次，稍甩干后，再滴加DAPI染液，室溫避光孵育10 min；滴加抗熒光淬滅劑后，用中性樹(shù)膠封片，于熒光顯微鏡下觀察并拍照。熒光強(qiáng)度分級(jí)半定量參照國(guó)際通用的五級(jí)半定量法判定[10]。

2.6 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)的影響

取各組大鼠腎組織石蠟切片，二甲苯常規(guī)脫水、抗原修復(fù)，加入3%雙氧水溶液，室溫孵育40 min；再加入3% BSA，室溫封閉30 min；分別加入IL-1β、TNF-α抗體，4 ℃孵育過(guò)夜；加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔抗體，室溫孵育50 min；DAB顯色并水洗后，蘇木素復(fù)染3～5 min，梯度乙醇脫水、二甲苯透明并中性樹(shù)膠封片，于顯微鏡下觀察并拍照，細(xì)胞核為藍(lán)色，陽(yáng)性表達(dá)為黃色。

2.7 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織PPARγ、p65和p-p65蛋白表達(dá)的影響

取各組大鼠右腎組織，置于5 mL凍存管中，于 ?80 ℃冰箱保存。加入裂解液研磨提取蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度，煮沸5 min使蛋白變性。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，加入脫脂牛奶，室溫封閉30 min；加入PPARγ、p65、p-p65和β-actin抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，加入TBST溶液洗滌5次，5 min/次；加入FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgA抗體，室溫孵育90 min，加入TBST溶液洗滌5次，5 min/次；加入ECL發(fā)光液顯影，曝光后使用Alpha軟件分析條帶。

2.8 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠的一般情況

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中模型組大鼠死亡2只，潑尼松組死亡1只，解剖顯示大鼠皮下及腹腔膿腫。對(duì)照組大鼠在精神狀態(tài)、活動(dòng)性、皮毛光澤度、飲食情況以及大小便方面表現(xiàn)良好。模型組大鼠則出現(xiàn)不同程度的精神不佳、食量減少、活動(dòng)減少、皮毛光澤度下降及顏色較黃等情況，體質(zhì)量較對(duì)照組有所降低。模型組sc四氯化碳時(shí)，皮下會(huì)有硬結(jié)出現(xiàn)，且脫毛較為嚴(yán)重；并且在尾iv LPS后會(huì)出現(xiàn)較之前更為嚴(yán)重的精神不振、食欲下降以及活動(dòng)減少等現(xiàn)象。給予藥物干預(yù)后，各給藥組大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食情況都較之前有所改善。

3.2 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠24 h尿蛋白定量分析

如表1所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠24 h尿蛋白明顯增加（＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠24 h尿蛋白均顯著降低（＜0.01）。益腎化濕顆粒兩組與潑尼松組無(wú)顯著差異。

3.3 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎功能的影響

如表1所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血肌酐、尿素氮均顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，各給藥組大鼠血肌酐、尿毒氮水平顯著降低（＜0.05、0.01）。

3.4 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織病理的影響

HE染色和Masson染色結(jié)果（圖1）顯示，模型組大鼠的腎組織呈現(xiàn)不同程度的系膜細(xì)胞增生、系膜基質(zhì)增多的病理改變，部分可見(jiàn)毛細(xì)血管襻受壓，管腔狹窄及球囊黏連。各給藥組腎小球系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多的狀況稍有緩解。

如圖2所示，模型組大鼠腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)分支及顆粒狀I(lǐng)gA沉積，表明IgAN模型制備成功。除對(duì)照組外，其余各組IgA免疫熒光染色結(jié)果評(píng)分分級(jí)大多處于＋～＋＋，各給藥組腎小球系膜區(qū)IgA熒光強(qiáng)度明顯減弱。

表1 各組大鼠24 h尿蛋白及腎功能相關(guān)指標(biāo)水平()

Table 1 24 h urine protein and renal function-related index levels of rats in each group ()

組別劑量/(g·kg?1)n/只24 h尿蛋白/mg血肌酐/(μmol·L?1)尿素氮/(mmol·L?1) 對(duì)照—828.88±6.8331.74±4.074.98±0.69 模型—1195.84±12.33##64.35±19.04##8.90±2.97## 益腎化濕顆粒1.351534.81±6.51**31.13±2.25**5.95±1.26* 5.401525.87±9.45**28.94±4.06**5.68±0.99* 潑尼松0.005 41429.26±9.77**29.30±1.35**5.41±0.50*

與對(duì)照組比較：##＜0.001；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

##< 0.01control group;*< 0.05**< 0.01model group

圖1 各組大鼠腎組織病理變化

3.5 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)的影響

如圖3所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠腎組織IL-1β、TNF-α陽(yáng)性表達(dá)顯著增加（＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠腎組織TNF-α沉積顯著減少（＜0.05），IL-1β沉積呈下降趨勢(shì)。

3.6 益腎化濕顆粒對(duì)IgA腎病大鼠腎組織PPARγ/NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的影響

如圖4所示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎組織p65和p-p65蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05），益腎化濕顆粒高劑量組和潑尼松組大鼠腎組織p65和p-p65蛋白表達(dá)水平明顯降低（＜0.05）。然而，模型組大鼠腎組織PPARγ蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組無(wú)顯著差異，但存在升高趨勢(shì)；益腎化濕高劑量組PPARγ蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05）。提示益腎化濕顆粒高劑量組可能上調(diào)PPARγ蛋白表達(dá)，抑制NF-κB信號(hào)通路。

圖2 各組大鼠腎組織IgA沉積情況

與對(duì)照組比較：#P＜0.05；與模型組比較：*P＜0.05，下圖同

圖4 各組大鼠腎組織p65、p-p65和PPARγ蛋白表達(dá)情況

4 討論

IgA腎病是一種自身免疫性疾病，各種原因?qū)е碌暮琁gA的免疫復(fù)合物的沉積以及免疫復(fù)合物介導(dǎo)的原位系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、促硬化介質(zhì)生成及足細(xì)胞凋亡等是IgA腎病發(fā)病的主要機(jī)制。中醫(yī)認(rèn)為IgA腎病以脾腎氣虛為本，兼見(jiàn)濕熱證、水濕證、血瘀證及風(fēng)濕證，歷代各醫(yī)家也善用益氣健脾化濕之法治療IgA腎病[11-13]。“風(fēng)”“濕”等致病因素在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中被認(rèn)為是導(dǎo)致免疫炎癥反應(yīng)的重要因素，而脾虛運(yùn)化障礙下，水谷精微轉(zhuǎn)運(yùn)異常，引發(fā)能量代謝障礙，可促使細(xì)胞線粒體功能及結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，影響正常細(xì)胞代謝和調(diào)節(jié)功能[14]。益腎化濕顆粒是健脾化濕代表方劑，重用黃芪為君，以升陽(yáng)固表、益氣利水；配伍人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草補(bǔ)氣養(yǎng)胃；柴胡、獨(dú)活、羌活、防風(fēng)為升舉清陽(yáng)、祛風(fēng)除濕；半夏、陳皮、澤瀉、黃連除濕清熱；白芍固護(hù)陰液，防升陽(yáng)祛風(fēng)燥濕太過(guò)；全方共奏益腎健脾、升陽(yáng)化濕、祛風(fēng)利水之功效[15]，契合IgA腎病病因病機(jī)。本研究結(jié)果顯示，益腎化濕顆?？梢悦黠@改善IgA腎病大鼠24 h尿蛋白及腎功能，對(duì)IgA腎病有明顯的治療作用。從微觀病理學(xué)角度，益腎化濕顆粒能明顯減輕腎小球系膜細(xì)胞增生、基質(zhì)增多及免疫復(fù)合物的沉積。

NF-κB通路被稱(chēng)為炎癥的中央信號(hào)傳導(dǎo)途徑[16]，參與免疫應(yīng)答、炎癥等生命過(guò)程，通常被活性氧、TNF-α和IL-1β等多種細(xì)胞外應(yīng)激刺激所激活[17]。研究表明，NF-κB信號(hào)通路的活化是終末期腎病和IgA腎病疾病發(fā)展的關(guān)鍵[18-21]。生理狀態(tài)下，NF-κB主要位于細(xì)胞質(zhì)中，與NF-κB抑制蛋白（inhibitor ofNF-κB，IκB）構(gòu)成的復(fù)合物不活躍；當(dāng)細(xì)胞受到刺激后，由IκB蛋白的信號(hào)誘導(dǎo)降解，造成NF-κB的活化，進(jìn)而引起p65釋放和核易位[17]。雖然這種暴露引起的p65誘導(dǎo)激活通常是短暫的，但足以上調(diào)具有多種活性的靶基因的反式激活，包括細(xì)胞增殖、炎性細(xì)胞因子、趨化因子、凋亡介體的上調(diào)[21]。PPAR家族調(diào)控參與細(xì)胞增殖、分化以及炎癥和免疫相關(guān)蛋白的表達(dá)。PPARγ主要在脂肪組織、腸、腎上皮和免疫系統(tǒng)中表達(dá)，其編碼蛋白PPARγ可抑制p65的磷酸化和核易位從而調(diào)控NF-κB表達(dá)，進(jìn)一步降低TNF-α水平，在炎癥反應(yīng)及IgA腎病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要治療作用[22]。在巨噬細(xì)胞中，PPARγ還可作為炎癥的負(fù)調(diào)節(jié)劑[23]。此外，脂代謝異常與腎間質(zhì)纖維化、腎功能衰竭密切相關(guān)，PPAR家族（PPARα、PPARβ、PPARγ）同時(shí)也是參與調(diào)控脂肪細(xì)胞分化和葡萄糖穩(wěn)態(tài)關(guān)鍵細(xì)胞因子[24]，抑制PPARα/類(lèi)視黃醇X受體α（retinoid X receptor α，RXRA）通路后，氧化脂肪酸水平下調(diào)繼而血清三酰甘油升高，促進(jìn)IgA腎病腎小球硬化進(jìn)展[25-26]。

本研究結(jié)果證明了益腎化濕顆粒能夠降低NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵因子的蛋白表達(dá)，其治療IgA腎病的機(jī)制可能通過(guò)上調(diào)PPARγ蛋白從而調(diào)控NF-κB信號(hào)通路。結(jié)果顯示，模型組大鼠腎組織p65、p-p65蛋白表達(dá)水平顯著升高，佐證了NF-κB信號(hào)通路的活化參與IgA腎病的發(fā)展過(guò)程。益腎化濕顆粒和潑尼松均能有效降低p65和p-p65的蛋白表達(dá)，通過(guò)調(diào)控炎癥經(jīng)典通路治療IgA腎病。PPARγ蛋白檢測(cè)結(jié)果中，潑尼松并沒(méi)有發(fā)揮調(diào)節(jié)PPARγ的作用，而益腎化濕顆粒高劑量組能夠顯著升高PPARγ蛋白表達(dá)水平，從而體現(xiàn)了對(duì)疾病的正向反饋?zhàn)饔谩Ｒ婺I化濕顆粒是否確實(shí)通過(guò)調(diào)控PPARγ抑制NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮抗炎、調(diào)節(jié)免疫的作用有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，益腎化濕顆粒能改善IgA腎病大鼠蛋白尿及腎組織病理?yè)p傷，從而保護(hù)腎臟功能，其機(jī)制可能與調(diào)控PPAR-γ/NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of Yishen Huashi Granules on regulation of PPARγ/NF-κB signaling pathway in IgA nephropathy rats

JIANG Chen, HU Xing-ge, JIANG Lin, XU Rong-jia, ZHANG Jia-jia, XU Ying-hui, GUO Yu-xin, BAI Xue, HUANG Shi-qi

First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, National Clinical Research Center for Chinese Medicine Acupuncture and Moxibustion, Tianjin 300381, China

To investigate the therapeutic effect of Yishen Huashi Granules (益腎化濕顆粒) on IgA nephropathy rats, and explore its mechanism based on peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ)/nuclear factor-κB (NF-κB) signaling pathway.Ten SD rats were randomly selected as control group. IgA nephropathy models were established in other rats by immune induction with the combination of bovine serum albumin, carbon tetrachloride and lipopolysaccharide. IgA nephropathy rats were randomly divided into model group, Yishen Huashi Granules low-, high-dose (1.35, 5.40 g/kg) groups and prednisone (5.40 mg/kg) group, with 15 rats in each group. During 7—14 weeks, rats in each administration group were ig drugs, rats in control group and model group were ig distilled water, once a day, the general state of rats were observed. After administration, 24 h urine protein of rats in each group was detected, and pathological condition of kidney tissue of rats in each group were investigated; Protein positive expressions of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) were detected by immunohistochemical method; Western blotting was used to detect the protein expressions of PPARγ and NF-κB signaling pathway key proteins p65 and p-p65 in kidney tissues of rats in each group.Yishen Huashi Granules significantly reduced 24 h urine protein, urea nitrogen and blood creatinine levels of IgA nephropathy rats (< 0.05, 0.01), reduced IgA deposition in glomerular mesangial area of ??IgA nephropathy rats, and significantly reduced TNF-α deposition in renal tissue (< 0.05); Protein expression levels of p65 and p-p65 in kidney tissue of rats in Yishen Huashi Granules high-dose group were significantly reduced (< 0.05), and PPARγ protein expression level was significantly increased (< 0.05).Yishen Huashi Granules can reduce 24 h urine protein in rats with IgA nephropathy, improve renal function and renal tissue pathological damage, and delay the progression of IgA nephropathy. Its mechanism may be related to the regulation of PPARγ/NF-κB pathway.

IgA nephropathy; Yishen Huashi Granules; kidney tissue damage; peroxisome proliferator-activated receptor γ; nuclear factor-κB

R285.5

A

0253 - 2670(2022)03 - 0751 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.03.014

2021-11-11

益腎化濕顆粒臨床應(yīng)用研究和基礎(chǔ)研究開(kāi)放課題（康藥合字2020第336號(hào)）

姜 晨（1982—），女，博士，副主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合治療腎臟病。Tel: 18622662919 E-mail: jcdoctor_tcm@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]