張 飛,劉利芳,劉曉華,王建國,韓 霜,聶妙蘭

(內(nèi)蒙古鴻茅藥業(yè)有限責(zé)任公司,內(nèi)蒙古 烏蘭察布 013750)

鴻茅健酒由紅景天、藏紅花、天麻、人參、枸杞子、山藥、茯苓、桑椹、黃精、覆盆子10味蒙中藥材經(jīng)提取、濃縮、調(diào)配制成的酒劑,為保持處方中蒙中藥材質(zhì)量、提取工藝穩(wěn)定、產(chǎn)品質(zhì)量一致性,采用以水飽和正丁醇萃取法測定鴻茅健酒總皂苷含量,作為評價(jià)該產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)。

1 實(shí)驗(yàn)器材

1.1 儀器

分析天平(型號XPR10)梅特勒;紫外/可見分光光度計(jì) (型號756)上海奧普勒儀器有限公司; 離心機(jī)(型號TG16-Ⅱ)長沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 試劑與試藥

人參皂苷Re(批號110754-201827)中國食品藥品檢定研究院提供; Amberlite-XAD-2 大孔樹脂(批號XAD-2-9003)BIOSZUNE LIFE SCIENCES DEP;其他試劑均為分析純。

1.3 供試品

鴻茅健酒(批號:20180401;20190601;20200401;20200402;20200403;20200901)鴻茅藥業(yè)提供。

2 顯色原理

總皂苷在高氯酸的作用下與香草醛反應(yīng),產(chǎn)生特征的紫紅色,在560 nm波長處有最大吸收。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 提取方法的選擇

3.1.1 大孔樹脂柱層析法

樣品前處理:精密吸取樣品10.0 mL,置水浴上揮盡乙醇后,用水轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,并用水稀釋至刻度,樣品液備用。

層析柱制備:用10 mL注射器作層析管,內(nèi)裝3cm大孔樹脂,上加1 cm中性氧化鋁。先用25 mL 70%乙醇洗柱,棄去洗脫液,再用約25 mL水洗脫至無醇味,棄去洗脫液。

供試品制備與測定:向制備好的層析柱內(nèi)加入處理后的樣品液0.5 mL,用25 mL水洗柱,棄去洗脫液,再用25 mL或以上70%乙醇洗脫人參皂苷至洗脫液無色,收集洗脫液于蒸發(fā)皿中,置于60℃水浴揮干,殘?jiān)蒙倭考状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,在紫外/可見分光光度計(jì)掃描。

3.1.2 水飽和正丁醇萃取法:

供試品溶液制備:精密吸取樣品10.0 mL,置水浴蒸至近干,用15mL水溶解并水轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,分別加入20 mL水飽和正丁醇萃取,分取正丁醇液(必要時(shí)可離心),重復(fù)萃取3次,合并正丁醇液用20 mL氨試液洗滌2次,棄去氨試液,正丁醇液水浴蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,即得。

顯色與測定:分別精密吸取供試品溶液0.5mL,二份,分別置于10 mL納氏比色管中,置水浴中揮干溶劑,其中一份加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,另一份加入1.0mL高氯酸,混勻,使溶解,兩管同時(shí)置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,在紫外/可見分光光度計(jì)掃描。

圖1 兩種提取方法與對照品掃描圖

3.2 結(jié)論

大孔樹脂柱層析法制備樣品顯色后與標(biāo)準(zhǔn)品顯色后顏色不一致,水飽和正丁醇萃取法制備樣品顯色后與標(biāo)準(zhǔn)品顯色后顏色基本一致并且在560nm處有相同的吸收峰,因此,選擇采用水飽和正丁醇萃取法。

4 方法學(xué)考察

4.1 線性范圍

吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.4mg/mL)0 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL于10 mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,于560 nm波長處測定吸光度,結(jié)果顯示:以吸光度為橫坐標(biāo),以人參皂苷Re的質(zhì)量(mg)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,人參皂苷Re在0.096mg～0.288mg之間,呈良好的線性關(guān)系。詳見表1和圖2。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)結(jié)果

圖2 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線

4.2 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6份,按3.1.2制備供試液并顯色與測定,記錄吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取對應(yīng)的量(mg)。

樣品中總皂苷的含量(以人參皂苷Re計(jì)),按式計(jì)算,結(jié)果表明,在規(guī)定條件下6次測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)為3.3%,認(rèn)為測定方法較穩(wěn)定,重復(fù)性良好。詳見表2。

式中:

Xi——樣品中總皂苷的含量(以人參皂苷Re計(jì)),單位為毫克每百毫升(mg/100mL);

Ci——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出被測液中人參皂苷Re的量,單位為毫克(mg);

V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升(mL);

V0——被測定樣液的顯色體積,單位為毫升(mL);

m——樣品的取樣體積,單位為毫升(mL);

100——單位轉(zhuǎn)換。

4.3 樣品測定

取不同批號樣品,按4.2方法測定、計(jì)算,結(jié)果詳見表3。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表3 不同批次樣品測定結(jié)果

5 討論

5.1 鴻茅健酒中的總皂苷比較穩(wěn)定,兩年之內(nèi)的產(chǎn)品總皂苷含量勻大于48mg/100mL,可以作為評價(jià)該產(chǎn)品的質(zhì)量指標(biāo)之一。

5.2 本比色法是樣品萃取蒸干后顯色測定。由于鴻茅健酒的顏色較深,為消除其它組分顏色的干擾,采用不加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液作為空白,可以有效地解決其它組分顏色在560nm處有吸收干擾的問題。