非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是與遺傳易感和代謝功能障礙密切相關(guān)的脂肪性肝病，疾病譜包括單純性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相關(guān)肝纖維化和肝硬化

。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，世界范圍內(nèi)普通人群NAFLD發(fā)病率已達(dá)28.01/1 000人年～52.34/1 000人年

。而在國(guó)內(nèi)，隨著肥胖和代謝綜合征的流行，NASH的發(fā)病率逐年上升，已成為我國(guó)第一大慢性肝病

。目前NASH缺乏理想的治療藥物，研究證實(shí)了中醫(yī)藥治療NASH的顯著療效

。前期的文獻(xiàn)和臨床研究結(jié)果表明，NASH發(fā)病的關(guān)鍵在于脾胃升降功能失職，據(jù)此我們采用理中湯加味聯(lián)合背俞穴位埋線治療NASH，這種聯(lián)合治療方案療效較單純中藥或單純背俞穴位埋線治療的療效更加顯著且療程縮短

。核因子-κB( NF-κB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在肝臟炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞生存和增生等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用

。NF-κB通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑被激活，進(jìn)而促進(jìn)炎癥因子的釋放，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死，激活炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)

。抑制IKK/IKB/NF-κB信號(hào)通路的激活是減輕肝組織炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵

。本研究利用理中湯加味聯(lián)合穴位埋線干預(yù)NASH模型大鼠，觀察其治療效果，探尋可能存在的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及造模 SPF級(jí)健康SD雄性大鼠70只，體質(zhì)量(120±20)g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)SCXK(湘)2016-0002]。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)選10只作為空白組，其余60只以高脂飼料(膽固醇2%+豬油4%+標(biāo)準(zhǔn)飼料58%)喂養(yǎng)12周制備NASH大鼠模型。第12周末隨機(jī)處死10只大鼠進(jìn)行肝組織活檢，組織病理切片陽(yáng)性提示NASH造模成功；造模成功后，剩余50只大鼠隨機(jī)分為模型組、中藥+埋線組、穴埋組、中藥組、維生素E軟膠囊(西藥)組，每組10只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理規(guī)定進(jìn)行飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要試劑和儀器 大鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)ELISA試劑盒(美國(guó)invitrogen公司)；Anti-IL6 抗體ab9324、Anti-IL1β抗體ab9722、Anti-NF-κB p65抗體ab16502、Anti-TNF-α抗體ab6671、Anti-IKK -α抗體ab32041(英國(guó)acbcam公司)；低溫冰箱(Thermo Forma 702)；光學(xué)顯微鏡(日本Olympus 公司)；DYY-電泳儀、凝膠掃描成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad)；7170S型全自動(dòng)生化分析儀、低溫離心機(jī)(日本日立公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 理中湯加味：人參、山藥、赤芍、丹參、山楂、首烏、益智仁、白芍各20 g，干姜、白術(shù)、炙甘草、茯苓、澤瀉各15 g，蒼術(shù)、陳皮、厚樸各10 g。上述藥品均為農(nóng)本方顆粒[培力(南寧)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)]，購(gòu)于柳州市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，上方加500 ml蒸餾水煎煮，直至每2 ml藥液中的生藥含量約8.75 g。維生素E軟膠囊(桂南藥股份有限公司)。

1.4 干預(yù)方法 空白組大鼠正常飼養(yǎng)，模型組大鼠予高脂飲食至干預(yù)結(jié)束，埋線組大鼠參照文獻(xiàn)

，選取雙側(cè)脾俞、胃俞、肝俞、腎俞，常規(guī)皮膚消毒后，先從左側(cè)開(kāi)始，用埋線針將長(zhǎng)0.5 cm 0號(hào)羊腸線埋入穴位，同法操作右側(cè)，1次/周。中藥組大鼠予理中湯加味混懸液8.75 g·kg

·d

灌胃給藥，1次/d。中藥+埋線組大鼠聯(lián)合中藥組、埋線組治療方法進(jìn)行治療。西藥組大鼠予維生素E軟膠囊250 mg·kg

·d

灌胃，1次/d。連續(xù)干預(yù)4周，期間繼續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)。

1.5 觀察指標(biāo) ①觀察大鼠一般情況，包括精神狀態(tài)、毛色、活動(dòng)、大便、飲食、飲水等。②檢測(cè)大鼠肝指數(shù)，肝指數(shù)=肝臟濕質(zhì)量(g)/大鼠體質(zhì)量(g)×100%。③測(cè)定血清中肝功能(ALT、AST)、血脂(TC、TG、LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)含量。胰島素抵抗指數(shù)按穩(wěn)態(tài)胰島素評(píng)價(jià)指數(shù)(HOMA-IR)計(jì)算，計(jì)算公式為HOMA-IR=FINS×FBG/22.5。④HE染色觀察肝組織形態(tài)。⑤檢測(cè)血清 IL-1β、IL-6、TNF-α含量。⑥檢測(cè)肝組織中IKK-α、NF-κB p65、IL-1β 、IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)情況。

區(qū)縣級(jí)電視臺(tái)不重視優(yōu)秀人才培養(yǎng)，在制作電視專題節(jié)目時(shí)往往缺乏相應(yīng)的獎(jiǎng)罰機(jī)制，沒(méi)有將地區(qū)優(yōu)點(diǎn)以及特色體現(xiàn)出來(lái)，在節(jié)目題材選擇上存在缺乏吸引力的狀況，其所使用的多媒體技術(shù)以及相應(yīng)的節(jié)目制作技術(shù)還存在著很大的提升空間，在宣傳方式和制作內(nèi)容上都還需要進(jìn)一步提高。

2.6 各組大鼠 IKK-α、NF-κBp65、IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白表達(dá)情況 見(jiàn)圖2、3。

2.1 各組大鼠一般情況 空白組大鼠毛發(fā)色正常,活動(dòng)敏捷,精神、納食、二便均正常,對(duì)外界反應(yīng)靈敏。模型組及各干預(yù)組大鼠隨著喂養(yǎng)周期延長(zhǎng)，體質(zhì)量出現(xiàn)進(jìn)行性增加，毛發(fā)雜亂、色暗，納食減少，大便溏，精神倦怠，少動(dòng)，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍。干預(yù)后，各干預(yù)組大鼠進(jìn)食、飲水及大便稀溏癥狀有所好轉(zhuǎn),體型肥胖不同程度減輕，大鼠毛色、精神、活動(dòng)等方面均改善。其中中藥+埋線組大鼠在活動(dòng)、動(dòng)作、納食、二便、精神等方面，與空白組比較，肉眼觀察無(wú)明顯差異。

2 結(jié)果

在冬棚蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中不穩(wěn)定因素有很多，如氣候、天氣、水質(zhì)、底質(zhì)變化，苗種、管理等。如何保持穩(wěn)定，提高成活率？

2.2 各組大鼠肝臟組織形態(tài)變化情況 空白組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)明顯脂肪變性及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組大鼠肝組織重度脂肪變，肝細(xì)胞有較大脂肪細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，呈“氣球狀”改變，可見(jiàn)肝小葉內(nèi)為主的大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。中藥+埋線組大鼠肝臟脂肪變性不同程度減輕，肝細(xì)胞有再生現(xiàn)象，炎性細(xì)胞明顯降低甚至消失。埋線組大鼠肝臟脂肪變性程度有所減輕，肝細(xì)胞再生，炎性細(xì)胞減少。中藥組大鼠肝臟病理組織學(xué)變化性質(zhì)與埋線組相似。西藥組大鼠肝臟有脂肪變性和“氣球征”，肝小葉內(nèi)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)圖1。

2.5 各組大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α情況 見(jiàn)表3。

2.4 各組大鼠肝功能、血脂、HOMA-IR情況 見(jiàn)表2。

2.3 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕重、肝指數(shù)情況 見(jiàn)表1。

雪螢一怔：“江老師這不是帶給你了嗎？”狗子說(shuō)：“他今天才給我的。以前那么久，他都沒(méi)給我。你一定是才買的。”雪螢哭笑不得，說(shuō)：“是是是，阿姨太忙，忘了，對(duì)不起?！?/p>

3 討論

NASH以肝細(xì)胞脂肪變合并肝小葉內(nèi)炎癥和肝細(xì)胞氣球樣變性或伴有纖維化為特征，是非酒精性單純性脂肪肝進(jìn)展至肝硬化及肝細(xì)胞癌的中間階段

。NASH治療的目標(biāo)是阻止、延緩或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展。NASH作為NAFLD發(fā)展的重要中間環(huán)節(jié)，是干預(yù)治療NAFLD的靶階段。目前NAFLD的主要治療方式包括改變生活方式、針對(duì)代謝綜合征的藥物以及減肥手術(shù)，然而這些治療難以使NASH逆轉(zhuǎn)，目前尚無(wú)公認(rèn)的特效藥可以推薦作為NASH的常規(guī)治療

。近些年，中醫(yī)藥在治療NAFLD方面取得了可喜的成績(jī)，大量的臨床和基礎(chǔ)研究均表明中醫(yī)藥對(duì)NASH有明顯療效

。NASH的發(fā)生源于脾胃對(duì)飲食中的水谷精微的運(yùn)化和輸布異常，最后導(dǎo)致痰、濕、濁、瘀、熱蘊(yùn)結(jié)肝體，導(dǎo)致本病的發(fā)生，因而本病發(fā)生的關(guān)鍵在于脾胃升降功能失職

。且團(tuán)隊(duì)通過(guò)對(duì)古籍文獻(xiàn)的整理發(fā)現(xiàn)，歷代醫(yī)家治療NASH多集中于溫陽(yáng)、健脾、祛濕、理氣等方面

。據(jù)此我們使用理中湯加味治療NASH患者，并取得一定的療效。理中湯源于《傷寒論》，是治療脾胃運(yùn)化失職的經(jīng)典方劑。我們?cè)诶碇袦珳仄⒔∵\(yùn)基礎(chǔ)上，加用茯苓、山藥益氣健脾；蒼術(shù)、陳皮、厚樸祛濕化痰、行氣和胃；赤芍、丹參、山楂清熱涼血散瘀；益智仁、澤瀉溫腎降濁；首烏、白芍養(yǎng)血柔肝。諸藥合用，以求標(biāo)本兼治。前期研究發(fā)現(xiàn)，脾升胃降功能失衡的經(jīng)絡(luò)病機(jī)根本為任督二脈經(jīng)氣的升降交匯失衡，背俞穴位埋線可通過(guò)調(diào)節(jié)任督二脈經(jīng)氣之升降交匯，進(jìn)而調(diào)理脾胃升降。穴位埋線有別于普通針刺的是其通過(guò)在固定穴位上埋入可吸收的羊腸線，達(dá)到持續(xù)刺激的作用，作用刺激更強(qiáng)，作用時(shí)間更久，療效更好。通過(guò)對(duì)肝俞、脾俞、胃俞、腎俞進(jìn)行長(zhǎng)期持續(xù)刺激作用，可提高其興奮性和傳導(dǎo)性，調(diào)節(jié)任督二脈經(jīng)氣之升降交匯，進(jìn)一步發(fā)揮調(diào)理脾胃之功能。本研究結(jié)果顯示，干預(yù)后中藥+埋線組大鼠在進(jìn)食飲水、體質(zhì)量、精神及活動(dòng)等方面較其他干預(yù)組改善更為明顯。這可能與干預(yù)后大鼠脾胃恢復(fù)運(yùn)化功能有關(guān)。

此外，除了晴雯與黛玉相似，我認(rèn)為妙玉與黛玉也具有可比性，她們都是姑蘇人，妙玉也是一個(gè)有錢人家的子弟，她小時(shí)候也遇到了僧道，僧人建議她出家，最終妙玉選擇了代發(fā)修行，此外，她們都擅長(zhǎng)寫詩(shī)，而且妙玉對(duì)寶玉也有一定的情愫，所以黛玉和妙玉也有可比性。

高脂飲食能引起血清中游離脂肪酸(FFA)增加，F(xiàn)FA在體內(nèi)不斷積累引起肝損傷，細(xì)胞膜通透性增高，導(dǎo)致細(xì)胞中ALT、AST溢出進(jìn)入血液

，引起血清中ALT、AST含量上升。NASH的“多重平行打擊”發(fā)病機(jī)制已被廣泛接受。以IR為中心引起的肝臟脂肪浸潤(rùn)產(chǎn)生大量FFA，機(jī)體氧化途徑無(wú)法處理過(guò)量FFA則會(huì)誘導(dǎo)TG及TC的合成，引起肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)度積聚誘發(fā)脂肪變性

。同時(shí)FFA增多又可誘導(dǎo)活性氧簇物質(zhì)(ROS)的增加

。持續(xù)存在的ROS可以激活肝臟中Kupffer細(xì)胞(KCs)，釋放大量的細(xì)胞因子，如NF-κB。同時(shí)，IKK-α被肝組織中過(guò)量積累的FFA激活，通過(guò)激活I(lǐng)KK復(fù)合體將IκB蛋白磷酸化，使其蛋白酶體降解，促使NF-κB 磷酸化并轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞核，活化的NF-κB 在細(xì)胞核內(nèi)調(diào)控TNF-α、IL-6和IL-1β等相關(guān)炎癥細(xì)胞因子大量產(chǎn)生

，引起炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而同時(shí)NF-κB活化后釋放出來(lái)的炎癥因子可再次作用并激活NF-κB，放大炎癥反應(yīng)級(jí)連，形成惡性循環(huán)

，促進(jìn)和加重NASH的發(fā)生和發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥+埋線組大鼠較其他干預(yù)組HOMA-IR、TG、TC、 LDL-C 、炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平及肝組織IKK/IKB/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)下降更顯著。提示理中湯加味聯(lián)合穴位埋線可能改善NASH大鼠胰島素抵抗，降低血脂水平，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，抑制IKK/IKB/NF-κB 信號(hào)通路活化，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)保護(hù)肝臟。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組，中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)脂肪性肝病專家委員會(huì).非酒精性脂肪性肝病防治指南(2018年更新版)[J].實(shí)用肝臟病雜志，2018,21(2):177-186.

[2] Younossi ZM, Koenig AB, Abdelatif D,

. Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease-Meta-analytic assessment of prevalence, incidence, and outcomes[J]. Hepatology,2016,64(1):73-84.

[3] 潘勤,范建高.腸源性高血氨在非酒精性脂肪性肝炎發(fā)病中的作用[J].實(shí)用肝臟病雜志,2020,23(6):761-764.

[4] 黃鴻娜,符燕青,黃晶晶,等.非酒精性脂肪肝中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志,2020,47(11):201-203.

[5] 周曉玲,謝勝,肖文勝，等.穴位埋線結(jié)合強(qiáng)肝消脂飲對(duì)非酒精性脂肪肝血清瘦素水平及胰島素抵抗指數(shù)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)急癥,2010,19(11):1845-1847.

[6] Marra F.Nuclear factor-kappaB inhibition and non-alcoholic steatohepatitis:inflammation as a target for therapy[J].Gut, 2008, 57:570-572.

[7] 高嬋嬋,李京濤,魏海梁,等.基于TLR4/NF-κB/NLRP3信號(hào)通路探討M1型巨噬細(xì)胞極化在肝硬化-肝性腦病發(fā)病中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代消化及介入診療,2020,25(10):1321-1323，1328.

[8] Wei J, Shi M, Wu WQ,

.IkB kinase-beta inhibitor attenuates hepatic fibrosis in mice[J].World J Gastroenterol,2011,17 (47):5203-5213

[9] 鄭利巖,張小傾,王熙,等.實(shí)驗(yàn)大鼠常用經(jīng)穴檢測(cè)與定位[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(10):2058-2060.

[10] Younossi ZM,Stepanova M,Anstee QM,

.Reduced patient-reported outcome scores associate with level of fibrosis in patients with nonalcoholic steatohepatitis[J].Clin Gastroenterol Hepatol,2019,17(12):2552-2560.

[11] 李紅山,應(yīng)豪,賀曉立,等.祛痰活血方治療非酒精性脂肪性肝炎的臨床觀察[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2018,36(7):1554-1556.

[12] 呂寶偉,馮春青,孫建光.補(bǔ)腎降濁飲對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠胰島素抵抗的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2018,24(12):107-113.

[13] 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會(huì).非酒精性脂肪性肝病中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)(2017年)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2017,25(11):805-811.

[14] 李澤鵬,池曉玲,周曉玲,等.基于古籍整理的脂肪肝歷代方藥證治分析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2016,31(10):4307-4308.

[15] 李澤鵬,池曉玲,周曉玲,等.清代古籍中脂肪肝方藥證治探析[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2019,30(3):731-732.

[16] 周曉玲,謝勝,肖文勝,等.強(qiáng)肝消脂飲對(duì)非酒精性脂肪肝血清瘦素水平及胰島素抵抗指數(shù)的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(11):2174-2175.

[17] Ma Z,Chu L,Liu H,

.Beneficial effects of paeoniflorin on non-alcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in rats[J].Sci Rep,2017,7:44819.

[18] Qureshi K，Abrams GA．Metabolic liver disease of obesity and role of adipose tissue in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disea-se[J]. World J Gastroenterol，2007，13:3540-3553.

[19] Ye Q,Wang X,Wang Q,

.Cytochrome P4502E1 inhibitor,chlormethiazole,decreases lipopolysaccharide-induced inflammation in rat Kupffer cells with ethanol treatment[J].Hepatol Res,2013,43(10):1115.

[20] SUN SC. The noncanonical NF-κB pathway[J]. Immunol Rev,2012,246(1):125.

[21] Morgan MJ, Liu ZG. Crosstalk of reactive oxygen species and NF-κB signaling[J]. Cell Res,2011,21(1):103-115.