国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

可溶性Neuropilin-1在早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的診斷價(jià)值*

2022-01-16 10:34朱曉武楊守華
關(guān)鍵詞:鱗狀敏感度宮頸

朱曉武, 楊守華

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科,武漢 430022

宮頸癌是嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤之一,在發(fā)達(dá)國家,由于宮頸癌篩查的普及,大多數(shù)病例在在癌前病變階段就得到了診斷和治療;但在多數(shù)發(fā)展中國家,宮頸癌還是導(dǎo)致女性病死的主要原因之一。在世界范圍內(nèi),其發(fā)病率和死亡率均為女性惡性腫瘤的第4位[1]。血管新生和宮頸癌預(yù)后不佳或復(fù)發(fā)密切相關(guān)[2]。在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中,血管新生是一個(gè)重要的病理過程,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族成員及其受體在這個(gè)過程中起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。目前在許多腫瘤中,VEGF和它的受體VEGFR-1,VEGFR-2和Neuropilin-1(NRP-1)已經(jīng)成為重要的靶向治療靶點(diǎn)。作為VEGF受體的NRP-1在多種實(shí)體腫瘤中都過表達(dá)并參與腫瘤的進(jìn)程,可溶性的NRP-1(soluble NRP-1,sNRP-1)可以發(fā)揮拮抗細(xì)胞相關(guān)NRP-1功能的作用[3-5]。在前期研究中我們報(bào)道了sNRP-1和NRP-1蛋白在宮頸病變中的表達(dá)[6],在本研究中,我們分別檢測了早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌和癌前病變患者血清中的sNRP-1水平,結(jié)合對(duì)照進(jìn)一步分析其在宮頸疾病的早期診斷和預(yù)后中可能的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

血清樣本來自華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院2012年1月至2014年4月期間住院治療的患者,其中宮頸癌前病變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)組患者18例,均為CINⅡ~Ⅲ級(jí)(含原位癌);早期宮頸癌鱗癌(squamous cervical cancer,SCC)組患者31例,依據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO,2000)的標(biāo)準(zhǔn),均為從Ⅰa1到Ⅱa期患者;同期收集的20例對(duì)照組均為因子宮肌瘤或子宮腺肌癥來我科行婦科手術(shù)的患者,術(shù)前檢查排除宮頸病變或其他有惡性腫瘤史的患者。納入本研究的患者平均年齡44.7歲(24~66歲)。所有病例術(shù)前均未接受放化療并在術(shù)后得到病理檢測證實(shí),所有的浸潤癌病例都進(jìn)行了“廣泛子宮全切+盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)”,其中有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者9例,無轉(zhuǎn)移者22例,盆腔淋巴結(jié)狀態(tài)真實(shí)可靠。

1.2 試劑和方法

人NRP-1 ELISA試劑盒購自Cloud-clone Corp.(Huston,Texas),所有操作根據(jù)試劑盒說明書推薦的方案,采用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA方法檢測血清中的sNRP-1的濃度,重復(fù)3次,取平均值。研究所涉及的血樣均在早上采集,并在4 ℃離心以回收血清,所有血清樣本均臨時(shí)儲(chǔ)存于-80 ℃,每3個(gè)月分批集中用于實(shí)驗(yàn)。sNRP-1的濃度通過人NRP-1免疫測定進(jìn)行定量,其測量范圍為0.313至20 ng/mL。將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入到由生物素偶聯(lián)的人NRP-1特異抗體包被的微量滴定板小孔中,接下來將結(jié)合了辣根過氧化物(HRP)的抗生物素蛋白加入到每個(gè)孔中并孵育添加TMB底物溶液后,通過添加硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng),并使用分光光度計(jì)在(450±10)nm波長下進(jìn)行測量。根據(jù)通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,比較吸光度(A)值來確定樣品中sNRP-1的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有的分析都在SAS 6.12(SAS Institute,Cary,NC)或SPSS 12.0上進(jìn)行。連續(xù)變量的描述采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,采用線性回歸分析ELISA所得數(shù)據(jù),血液循環(huán)中sNRP-1的水平與臨床分期、轉(zhuǎn)移與否等臨床參數(shù)的關(guān)系采用T檢驗(yàn)和one-way ANOVA。ROC曲線用于分析sNRP-1的診斷價(jià)值,無瘤生存曲線(DFS)用于分析不同sNRP-1水平的宮頸癌患者的預(yù)后情況。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 sNRP-1在血清中的表達(dá)水平及意義

31例早期SCC和18例CIN患者血清中sNRP-1的水平均較對(duì)照組顯著升高[(11.41±0.52)ng/mLvs.(9.22±0.09)ng/mL,P=0.0016;(11.80±0.52)ng/mLvs.(9.22±0.09)ng/mL,P=0.0041],而早期SCC組與CIN組之間差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(11.41±0.52)ng/mLvs.(11.80±0.52)ng/mL,P=0.6891,見圖1A]。將31例SCC患者按盆腔淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移來進(jìn)一步分組后發(fā)現(xiàn),盆腔淋巴結(jié)陽性組的sNRP-1顯著升高[(13.31±1.09)ng/mLvs.(10.64±0.52)ng/mL,P=0.0177,見圖1B]。

2.2 sNRP-1對(duì)早期SCC和CIN患者的診斷價(jià)值分析

我們采用ROC曲線分析對(duì)照與CIN和早期SCC患者血清中的sNRP-1水平,研究sNRP-1是否對(duì)早期宮頸病變具有診斷價(jià)值。ROC曲線研究發(fā)現(xiàn)早期SCC患者血清sNRP-1水平與對(duì)照組之間存在顯著差異,AUC為0.8192,95%置信區(qū)間為0.7032~0.9352,P=0.0002(圖2A);對(duì)CIN組,也有相似的結(jié)論,AUC為0.7885,95%置信區(qū)間為0.6379~0.9352,P=0.0029(圖2B);將CIN組和早期SCC組合并后與良性對(duì)照比較,AUC為0.8072,95%置信區(qū)間為0.7068~0.9076,P<0.0001(圖2C)。

A:sNRP-1對(duì)早期SCC的診斷價(jià)值;B:sNRP-1對(duì)CIN的診斷價(jià)值;C:sNRP-1對(duì)早期SCC和CIN的診斷價(jià)值圖2 ROC曲線評(píng)估sNRP-1在早期SCC組和(或)CIN組中的診斷價(jià)值Fig.2 The diagnostic value of sNRP-1 for early stage SCC group and(or)CIN groups by ROC analysis

這些結(jié)果提示sNRP-1作為潛在的早期SCC和CIN血清學(xué)診斷指標(biāo)的可行性,通過ROC分析,對(duì)不同的sNRP-1水平作為診斷臨界點(diǎn)及其敏感度和特異度的分析。對(duì)早期宮頸鱗癌和癌前病變,sNRP-1值為8.808、8.969、9.131、9.293、9.535和9.778 ng/mL時(shí)對(duì)應(yīng)的敏感度(%)分別為97.96、87.76、79.59、73.47、65.31和59.18,特異度(%)分別為5.263、36.84、57.89、73.68、84.21和89.47。據(jù)此,sNRP-1為9.535 ng/mL是最佳的診斷閾值(敏感度和特異度之和最高),此時(shí)其敏感度為65.31%,特異度為84.21%,相似比4.14。

2.3 sNRP-1對(duì)早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后的預(yù)測價(jià)值

根據(jù)2.2的結(jié)果,以sNRP-1=9.535 ng/mL為節(jié)點(diǎn),將31例早期宮頸鱗癌分為高sNRP-1組(19例)和低sNRP-1組(12例),我們對(duì)其預(yù)后進(jìn)行隨訪。因?yàn)榧{入本研究的樣本量較小,到2018年12月底,死亡患者僅5例,復(fù)發(fā)患者有12例,我們以患者復(fù)發(fā)為主要參考指標(biāo),研究不同組別無瘤生存時(shí)間(DFS)的差異。隨訪時(shí)間為6~52個(gè)月,平均為36.9個(gè)月。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低sNRP-1組僅有2例復(fù)發(fā),高sNRP-1組有10例復(fù)發(fā),兩組之間的DFS之間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示sNRP-1對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞癌有預(yù)后價(jià)值(圖3)。

低sNRP-1組:sNRP-1≤9.535 ng/mL;高sNRP-1組:sNRP-1>9.535 ng/mL圖3 sNRP-1對(duì)早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌的預(yù)后價(jià)值Fig.3 Prognostic value of sNRP-1 in patients with early cervical squamous cell carcinoma

3 討論

實(shí)體腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移離不開血管新生,隨著VEGF家族在這個(gè)病理過程中的作用被逐步揭示,研究表明VEGF家族成員主要通過其受體如VEGFR-1、VEGFR-2和NRP-1發(fā)揮作用[7]。NRP-1是一個(gè)跨膜受體,不僅可以結(jié)合VEGF并與VEGFR-2形成復(fù)合物,而且還可以結(jié)合結(jié)構(gòu)和功能上不相關(guān)的傳統(tǒng)軸突引導(dǎo)信號(hào)SEMA-3。與VEGF的主要受體相比,NRP-1與多種配體和受體共同調(diào)控血管新生的機(jī)制尚未完全明確[4,8]。NRP-1通過VEGFR-2獨(dú)立調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的粘附,基于其作為VEGF活性增強(qiáng)劑和內(nèi)皮細(xì)胞粘附介體的雙重作用,NRP-1也成為抗血管生成藥物的分子靶標(biāo)。內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)NRP-1,并且在結(jié)合VEGF-A以增強(qiáng)血管生成后,NRP-1與受體酪氨酸激酶VEGFR-2結(jié)合[9-10]。然而,sNRP-1被認(rèn)為是NRP-1的拮抗劑,可以抑制NRP-1蛋白的功能[5]。NRP-1過表達(dá)在多種人類癌癥中都有報(bào)道,包括那些源自前列腺癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、鼻咽癌和腦癌的癌癥[11-16]。在大多數(shù)實(shí)體瘤中,NRP-1的高表達(dá)與臨床分期、血管生成、結(jié)節(jié)浸潤和較差的總生存率顯著相關(guān)[5,12-13,15,17]。

近年來,以NRP-1參與腫瘤進(jìn)程的機(jī)制和以其為靶點(diǎn)的抗腫瘤治療研究也取得了初步進(jìn)展,例如有研究發(fā)現(xiàn)NRP-1拮抗劑可以抑制腫瘤間質(zhì)內(nèi)的NRP-1(+)Tregs,進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤進(jìn)展的作用,對(duì)腫瘤外的Tregs影響有限,而NRP-1(+)Tregs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中又發(fā)揮了重要作用[18-19]。在胰腺癌中,通過對(duì)12個(gè)候選miRNAs的研究發(fā)現(xiàn),miR-141具有最強(qiáng)負(fù)向調(diào)節(jié)NRP-1的能力,miR-141/NRP-1具備成為胰腺癌腫瘤標(biāo)記分子和治療靶點(diǎn)的潛力[20]。在胃癌細(xì)胞中,miR-9-5p通過抑制NRP-1的表達(dá)來抑制胃癌細(xì)胞的增殖和遷移能力[21]。另有研究發(fā)現(xiàn)抗NRP-1單克隆抗體可以下調(diào)其裸鼠荷瘤模型中VEGF的表達(dá)水平,在體外實(shí)驗(yàn)中該抗體可以抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力,其機(jī)制可能是通過抑制Akt的磷酸化[22]。這些研究提示NRP-1參與了腫瘤的侵襲和遷移,而且是極具潛力的抗腫瘤治療的靶點(diǎn)。

在本研究中,我們通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)與良性對(duì)照相比,在早期SCC和CIN患者血清中的sNRP-1水平顯著增高,但CIN組和早期SCC組患者間并無差異,提示sNRP-1水平的升高是宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中存在于癌前病變階段的一個(gè)早期事件。進(jìn)一步分析ROC曲線,發(fā)現(xiàn)這種增高具備診斷早期宮頸鱗癌和CIN的潛力,結(jié)合敏感度和特異度分析,我們認(rèn)為sNRP-1等于9.535 ng/mL時(shí)是最佳的診斷節(jié)點(diǎn),此時(shí)其敏感度為65.31%,特異度為84.21%。同時(shí)經(jīng)過對(duì)31例患者DFS分析,我們發(fā)現(xiàn)高sNRP-1患者的預(yù)后較低sNRP-1患者預(yù)后更差,兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除了本課題組外,Yang等[23]也在河南省的宮頸癌患者中發(fā)現(xiàn)NRP-1蛋白在CIN和宮頸癌中均顯著升高,而且NRP-1表達(dá)水平的升高與不良預(yù)后有關(guān),提示其為宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后因素,我們的研究結(jié)果與該研究一致。同時(shí)另有研究表明在宮頸癌局部缺氧的微環(huán)境下,可以通過NRP-1來激活M2樣的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞TAM參與到宮頸癌的發(fā)展中。鑒于TAM在宮頸癌發(fā)展中的重要作用,提示NRP-1有望作為宮頸癌的靶向治療位點(diǎn)[24]。

綜上所述,我們研究發(fā)現(xiàn)sNRP-1在宮頸癌前病變和早期宮頸鱗癌中均顯著上升,而且sNRP-1濃度在9.535 ng/mL時(shí),其診斷早期宮頸病變的敏感度為65.31%,特異度為84.21%,同時(shí)sNRP-1對(duì)早期宮頸癌的預(yù)后具有預(yù)測價(jià)值。本研究顯示sNRP-1是極具潛力的早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)記分子,同時(shí)我們的結(jié)論還有待更大樣本的研究證實(shí)后推廣。

猜你喜歡
鱗狀敏感度宮頸
關(guān)于子宮頸鱗狀上皮細(xì)胞異常ICD-10編碼的建議
端粒酶相關(guān)蛋白1在宮頸鱗狀上皮病變中的表達(dá)*
宮頸錐切術(shù)治療宮頸上皮內(nèi)瘤變的效果分析
假體周圍感染聯(lián)合診斷方法的初步探討*
一種基于屬性的兩級(jí)敏感度計(jì)算模型
跨文化敏感度綜述
小學(xué)語文寫作教學(xué)存在的問題及對(duì)策
說說宮頸環(huán)形電切除術(shù)
長期吸煙容易患肺癌嗎?
改良宮頸錐切術(shù)治療宮頸疾病60例臨床觀察