文/戴旭平 王靜波 徐立蒲* 王小亮 王澎 葉仕根

本文研究了在飼料中添加益生菌發(fā)酵的黃芪對雜交鱘生長性能和成活率的影響。將益生菌發(fā)酵的黃芪投喂給體重為（19±1）g的雜交鱘，試驗設(shè)8個組，每組14尾～18尾，設(shè)3個重復(fù)。結(jié)果顯示，飼料中添加發(fā)酵黃芪對雜交鱘的生長性能沒有顯著影響，但發(fā)酵黃芪添加量為5‰～10‰時，可有效提高雜交鱘的成活率。

我國是世界鱘魚養(yǎng)殖大國，雜交鱘是主養(yǎng)品種。然而，隨著雜交鱘養(yǎng)殖密度增高，水環(huán)境惡化、病害頻發(fā)、抗生素使用過度等問題威脅到鱘魚養(yǎng)殖行業(yè)健康發(fā)展。目前已報道的鱘魚致病菌有嗜水氣單胞菌Aeromonas hydrophila、豚鼠氣單胞菌Aeromonas carvia、類志賀鄰單胞菌Plesiomonas shigelloides、停乳鏈球菌Streptococcus dysgalactiae和海豚鏈球菌Streptococcus iniae等。其中鏈球菌引起的疾病尤為嚴(yán)重，尚無有效防治藥物。黃芪是常用的補(bǔ)氣中草藥，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激等功效，但由于其有效成分難以被動物機(jī)體吸收利用，因此，提高藥效是目前亟待解決的問題。益生菌發(fā)酵中藥能夠溶出有效活性成分，增強(qiáng)藥效，兩者相輔相成。本試驗旨在研究益生菌發(fā)酵的黃芪對雜交鱘生長性能及成活率的影響，為發(fā)酵中藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的推廣提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）主要儀器

超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。其它還有電磁爐、移液槍、電子天平、顯微鏡、三角瓶、培養(yǎng)皿、接種環(huán)等。

（二）益生菌、黃芪等

益生菌為枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和糞腸球菌Enterococcus faecalis，取自北京市水產(chǎn)技術(shù)推廣站實(shí)驗室，另準(zhǔn)備黃芪和發(fā)酵培養(yǎng)基麥麩。

（三）攻毒用菌種

海豚鏈球菌，為北京市水產(chǎn)技術(shù)推廣站實(shí)驗室保存。

（四）試驗魚

雜交鱘購自河北省涿州市高英宇隆水產(chǎn)養(yǎng)殖有限責(zé)任公司，體重（19±1）g。

（五）飼料

飼料營養(yǎng)成分為：粗蛋白質(zhì)≥48.0%，粗脂肪≥8.0%，粗纖維≤5.0%，粗灰分≤1 4.0%，水分≤1 2.0%，賴氨酸≥2.6%，總磷≥0.9%。

（六）試驗設(shè)計

1.養(yǎng)殖管理

將購回的雜交鱘在室內(nèi)水族箱（規(guī)格：0.7m×0.5m×0.45m；1m×0.5m×0.45m）中暫養(yǎng)7d，暫養(yǎng)期間每日按體重1%投喂1次配合飼料。7d后挑選規(guī)格整齊，健康的鱘魚410尾，隨機(jī)分為8個試驗組（T0、T5、T10、T20、T40、TY、TH、TJ），每組14尾～18尾（按水族箱規(guī)格投放不同尾數(shù)），設(shè)3個平行，共24個組。

對照組T0和疫苗組TY投喂配合飼料；疫苗組TY將1.0×109cfu/mL鏈球菌用甲醛溶液于28℃滅活48h。鏈球菌滅活疫苗浸泡免疫鱘魚終濃度將為1.0×106cfu/mL；發(fā)酵中藥組（T5、T10、T20、T40）投喂的飼料分別按5‰、10‰、20‰、40‰添加發(fā)酵黃芪；黃芪添加組TH按飼料的1%添加破碎后的黃芪；益生菌組TJ以兩種益生菌（枯草芽孢桿菌、糞腸球菌）按1:1混合后按1%添加。每天投喂2次，日投喂率2%。

試驗期間用充氣泵增氧，保持溶氧5.9mg/L～8.2mg/L，水溫控制在（21±1）℃，pH7.8～8.2。每日清污，每2d換水1次，換水量1/4，試驗持續(xù)19d。試驗結(jié)束后，每尾稱重并記錄尾數(shù)，用于計算生長性能指標(biāo)、增重率。

2.攻毒試驗

每尾魚測量后，進(jìn)行鏈球菌攻毒。采用生長16h的1.0×104cfu/mL鏈球菌菌液浸泡感染各組雜交鱘20min，再分裝至各水族箱中。每日觀察魚健康狀況，記錄感染魚癥狀，并及時撈出死亡個體，記錄死亡尾數(shù)及時間，對瀕死魚體組織進(jìn)行劃線培養(yǎng)細(xì)菌并采用API鑒定條鑒定。試驗過程中水溫保持在（21±1）℃，養(yǎng)殖觀察14d。

（七）數(shù)據(jù)分析

成活率（%）=終末尾數(shù)／初始尾數(shù)×100

免疫保護(hù)率（%）=（1-試驗組死亡率／對照組死亡率）×100

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0

式中：Wt——第t天后各組魚平均體重（g）；

W0——初始時各組魚平均體重（g）。采用SPSS v26.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

二、結(jié)果

（一）生長指標(biāo)

如圖1所示，不同試驗組雜交鱘的增重率由高到低依次為T20＞T40＞T0＞TJ＞T5＞T10＞TY＞TH，但各組之間差異不顯著（P＞0.05）（見表1）。實(shí)驗結(jié)果表明飼料中添加發(fā)酵黃芪對雜交鱘的增重效果不明顯（見圖1）。

表1 不同處理對雜交鱘生長性能的影響

圖1 不同處理對雜交鱘增重率的影響

（二）成活率和免疫保護(hù)率

雜交鱘感染鏈球菌后觀察14d，如圖2所示，不同試驗組雜交鱘的成活率由高到低依次為T10＞T5＞TY＞T40＞T20＞TH＞T0＞TJ。益生菌組成活率低于對照組，對照組成活率低于黃芪組，但差異不顯著（P＞0.05）。疫苗組成活率顯著高于對照組（P＜0.05）。所有發(fā)酵黃芪組的成活率均高于對照組，但僅5‰、10‰發(fā)酵黃芪組與對照組差異顯著（P＜0.05）。實(shí)驗結(jié)果表明，發(fā)酵黃芪與疫苗均能提高雜交鱘的成活率，且發(fā)酵黃芪的效果優(yōu)于疫苗。

圖2 不同處理對雜交鱘成活率的影響

由圖3可見，5‰、10‰發(fā)酵黃芪組和疫苗組的免疫保護(hù)率顯著高于對照組、益生菌組、黃芪組及20‰、40‰發(fā)酵黃芪組（P＜0.05），也高于疫苗組。試驗結(jié)果表明，在飼料中添加發(fā)酵黃芪能有效提高雜交鱘的成活率和免疫保護(hù)率，但其添加量與雜交鱘成活率和免疫保護(hù)率并不成正比，添加量為5‰～10‰時效果最佳。

圖3 不同處理對雜交鱘免疫保護(hù)率的影響

三、討論

（一）益生菌發(fā)酵黃芪對雜交鱘生長指標(biāo)的影響

根據(jù)報道中草藥能促進(jìn)動物生長，如對羅非魚Oreochromis niloticus、紅笛鯛Lutjanus sanguineus、異育銀鯽Carassius auratus gibelio等都有促生長作用。而朱傳忠等研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能改善生長性能，但對增重率沒有產(chǎn)生顯著影響，該研究與本次試驗結(jié)果相似，即對增重率沒有產(chǎn)生顯著影響。中草藥對動物生長作用的不同影響可能與中藥產(chǎn)地質(zhì)量、中藥配伍、魚的品種及養(yǎng)殖時間有關(guān)。同時，有研究表明，飼料中添加益生菌能促進(jìn)鱘魚生長。而本研究益生菌試驗組的增重率與對照組沒有顯著差異，推測可能與養(yǎng)殖時間較短有關(guān)。

謝炎福等認(rèn)為發(fā)酵中藥有促進(jìn)澎澤鯽Pengze crucian carp幼魚生長，降低飼料用量的作用，其在飼料中添加0.3%益生菌發(fā)酵復(fù)方中藥飼喂黃河鯉Cyprinus carpio haematopterus，有明顯的促生長及降低餌料系數(shù)的作用。然而，本研究結(jié)果表明增重率在試驗組和對照組之間差異不顯著，其可能與發(fā)酵中藥種類、發(fā)酵菌株、實(shí)驗魚品種及養(yǎng)殖時間有關(guān)。

（二）益生菌發(fā)酵黃芪對雜交鱘成活率的影響

有研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能提高鯽魚Carassius auratus、大菱鲆Scophthalmus maximus、草魚Ctenopharyngodon idellus等的免疫力，增強(qiáng)抗病力。劉慧玲等研究發(fā)現(xiàn)添加1.0×104cfu/mL枯草芽孢桿菌組的羅非魚魚苗成活率顯著高于對照組（P<0.05）；有研究顯示，濃度為9×109cfu/g的彎曲乳桿菌能提高波斯鱘Acipenser persicus的存活率。而本研究將黃芪與益生菌分別添加到飼料中均沒有顯著提高雜交鱘的成活率，中草藥和益生菌對鱘魚成活率的影響有待進(jìn)一步研究。

但中草藥經(jīng)發(fā)酵后，中草藥細(xì)胞中的營養(yǎng)成分和有益成分容易被魚類利用。發(fā)酵有利于促進(jìn)中藥有效成分在魚體內(nèi)的吸收、運(yùn)輸和代謝，提高中藥藥效，改善中藥口味，分解部分有毒物質(zhì)。李澤鑫等研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵銀杏葉和發(fā)酵甘草能提高斜帶石斑魚Epinepheluscoioides在亞硝酸鹽脅迫下的耐受性和存活率。有研究顯示，高脂飼料中添加發(fā)酵中藥對草魚生長性能沒有顯著影響，但能提高其養(yǎng)殖過程中的存活率和抗嗜水氣單胞菌感染能力，增強(qiáng)魚體的免疫機(jī)能。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵黃芪添加量在10‰的試驗組，顯著降低了鏈球菌感染中的累計死亡率，提高了養(yǎng)殖成活率。表明發(fā)酵黃芪增強(qiáng)了雜交鱘的免疫力，提高了機(jī)體的抗病能力。而發(fā)酵中藥和中藥均有提高雜交鱘成活率、增強(qiáng)抗病力的作用，且發(fā)酵中藥的效果優(yōu)于中藥。

四、結(jié)論

飼料中添加益生菌發(fā)酵黃芪對雜交鱘的生長性能沒有顯著影響，但發(fā)酵黃芪添加量為5‰～10‰時，可提高雜交鱘抵抗鏈球菌感染的能力。