丁細霞,王壓娣,陳滿君,陳鈺靜,余 楠,車小燕

急性呼吸道感染是導(dǎo)致兒童患病主要原因,據(jù)世界衛(wèi)生組織估計,每年有190萬兒童死于急性呼吸道感染,且以肺炎為主[1]。研究表明,70%～80%的急性呼吸道感染都是由病毒感染所致,主要包括流感病毒(Fl U)、腺病毒(ADV)、人類冠狀病毒(HCOV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒(HPIV)l～4型、偏肺病毒(HMPV)、人類博卡病毒(HBOV)和鼻病毒(HRV)等。而流感病毒,呼吸道合胞病毒及副流感病毒是導(dǎo)致5歲以下兒童肺炎的主要病原體[2-4]。迄今為止,國內(nèi)外對兒童呼吸道病原體感染的報道甚多,然而,急性呼吸道病毒的感染和傳播因人而異,不同國家、地區(qū)、不同研究人群以及不同的文化背景及社會經(jīng)濟水平,醫(yī)療保障系統(tǒng)及氣候因素的不同都會導(dǎo)致病原特征的差異。因此,了解本地區(qū)急性呼吸道病毒的病原學(xué)及臨床特征為指導(dǎo)和防控大規(guī)模流行提供重要數(shù)據(jù)。本研究通過采集廣州珠江醫(yī)院2009－2015年兒童急性上呼吸道感染患者的2 665份鼻拭子標(biāo)本,檢測常見的8種(16個亞型)呼吸道病毒,并分析其年齡、性別、季節(jié)分布、混合感染及臨床癥狀等情況,為指導(dǎo)臨床治療及防控提供相關(guān)數(shù)據(jù)。

1 對象與方法

1.1 對象 2009年11月至2015年9月在廣州珠江醫(yī)院門診及住院的急性上呼吸道感染兒童2 665例,年齡為2 d～14歲。入選病例標(biāo)準(zhǔn):發(fā)熱(體溫≥38℃)伴有咳嗽/流涕或咽痛之一者、缺乏實驗室確定診斷依據(jù)的急性上呼吸道感染患者納入研究。

1.2 方 法

1.2.1 標(biāo)本采集 收集符合病例標(biāo)準(zhǔn)的鼻拭子標(biāo)本,置入內(nèi)有3 m L的病毒分離液帶旋蓋試管中(Coupan采樣管),分裝后置－80℃冰箱保存待檢,采集標(biāo)本前告知詳細信息并征得患兒監(jiān)護人口頭知情同意。

1.2.2 病毒檢測 采用qRT-PCR方法檢測常見的8種(16個亞型)呼吸道病毒,其中流感病毒[5-6]、合胞病毒[7]、腺病毒[8]、博卡病毒[9]、副流感病毒[10-11]、鼻病毒[11]、冠狀病毒[12-14]、偏肺病毒[15]所用引物、探針均參考相關(guān)文獻并由上海生工生物工程有限公司合成,具體方法的優(yōu)化及鑒定參見前期工作[16]。病毒核酸提取試劑盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)購自美國Qiagen公司,PCR試劑(A Taqman fast virus one-step Master Mix kit)購自Life Technologies公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 臨床資料和實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)一使用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計分析,并使用Excel軟件繪制分布圖,使用卡方檢驗比較各種病毒感染率,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各種呼吸道病毒分布情況 所檢2 665份標(biāo)本中,1 566份標(biāo)本病毒核酸檢測為陽性,陽性率為58.8%,其中260份為混合感染。各種呼吸道病毒中以呼吸道合胞病毒檢出率最高,占22.5%(600/2 665);其次是鼻病毒,占13.0%(347/2 665);流感病毒占9.0%(241/2 665);副流感病毒7.6%(203/2 665);腺病毒占6.1%(163/2 665);偏肺病 毒占4.0%(106/2 665);冠狀病毒占3.7%(101/2 665);博卡病毒占3.5%(94/2 665)。男童病毒檢出率為60.4%(1 058/1 751),女 童 病 毒 檢出率為55.6%(508/914),男童呼吸道病毒感染率高于女童(χ2＝5.812,P＝0.016)(圖1)。住院患兒病毒檢出率為60.7%(1 344/2 215),門診患兒病毒檢出率為49.3%(222/450),住院患兒呼吸道病毒檢出率明顯高于門診患兒(χ2＝19.862,P＜0.01)。其中以流感病毒(χ2＝5.755,P＝0.019)、呼吸道合胞病毒(χ2＝38.797,P＜0.01)、博 卡 病 毒(χ2＝11.075,P＜0.000 1)、鼻病毒(χ2＝19.301,P＜0.01)等4種病毒在住院患兒中檢出率明顯高于門診患兒。其余4種病毒在住院患兒與門診患兒檢出率無統(tǒng)計學(xué)差異,副流感病毒(χ2＝2.266,P＝0.143)、腺病毒(χ2＝2.603,P＝0.107)、冠 狀 病 毒(χ2＝0.082,P＝0.892)、偏肺病毒(χ2＝1.064,P＝0.355)(圖2)。

圖1 男女患兒中8種呼吸道病毒的檢出情況Fig.1 Detection rates of the eight respiratory viruses in male and female children(%)

圖2 住院與門診患兒中8種呼吸道病毒分布情況Fig.2 Detection rates of the eight respiratory viruses in outpatients and inpatients(%)

2.2 年齡分布情況 兒童呼吸道病毒感染率隨著年齡增加而呈現(xiàn)逐漸降低趨勢(χ2＝52.117,P＜0.01),并以0～1歲組嬰幼兒呼吸道病毒檢出率最高,達64.3%(682/1 060)。其 次為2～3歲組(60.8%)和1～2歲組(55.8%)。在0～3歲的兒童患者中,RSV的檢出率最高(28.9%),其次是鼻病毒(14.0%),RSV是引起嬰幼兒呼吸道病毒感染最常見的病原體,總檢出率為22.5%;其次是鼻病毒,占13.0%;RSV和HRV也是引起兒童住院的最主要病原體,分別占住院兒童的24.8%和14.3%。流感病毒占總檢出率的9.0%,其在0～2歲兒童患者中檢出率不高,而在2～14歲兒童患者中檢出率一直處于較高水平,是引起門急診兒童呼吸道病毒感染的主要病原體(25.0%),圖3為各年齡段呼吸道病毒感染率分布圖。

圖3 不同年齡組兒童呼吸道病毒檢出率趨勢圖Fig.3 Age distribution of the incidence of the eight respiratory viruses

2.3 混合感染情況 在2 665份標(biāo)本中,兩種以上呼吸道病毒混合感染的標(biāo)本260份,為標(biāo)本總檢出率的9.8%(260/2 665),占陽性標(biāo)本數(shù)的16.6%(260/1 566)。在這260份混合感染標(biāo)本中,232份標(biāo)本為雙病毒混合感染,27份標(biāo)本為3種病毒混合感染,1份為4種病毒混合感染。具體結(jié)果見表1。在所有混合感染標(biāo)本中,呼吸道合胞病毒和鼻病毒混合感染標(biāo)本數(shù)為56.2%(146/260)和55.4%(144/260)。且混合感染主要集中在0～3歲兒童,占陽性標(biāo)本數(shù)的14.6%(229/1 566),占混合感染標(biāo)本數(shù)的88.1%(229/260)。春、夏、秋、冬混合感染標(biāo)本分別為130份、73份、25份和32份,分別占各季節(jié)標(biāo)本總數(shù)的12.7%、11.8%、5.1%和6.1%,且春夏季混合感染率高于秋冬季(χ2＝26.836,P＜0.01)。

表1 8種呼吸道病毒混合感染情況Tab.1 Co-infections with eight respiratory viruses

2.4 季節(jié)分布情況 6個研究年份組合圖顯示8種呼吸道病毒分布情況,見圖4。8種呼吸道病毒在四個季節(jié)中檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝89.992,P＜0.01),并以春季(69.0%)最高;夏季(55.3%)和冬季(56.4%)次之,秋季(44.0%)最低。其中,各種呼吸道病毒在4個季節(jié)中的檢出率均存在統(tǒng)計學(xué)差異,并以呼吸道合胞病毒在各個季節(jié)中檢出率最高,差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(χ2＝106.479,P＜0.01);流感病毒(χ2＝92.942,P＜0.01);副 流 感 病 毒(χ2＝35.001,P＜0.01);腺病毒(χ2＝18.816,P＜0.01);博卡病毒(χ2＝69.69,P＜0.01);冠 狀 病 毒(χ2＝22.151,P＜0.01);偏 肺 病 毒(χ2＝40.645,P＜0.01);鼻病毒(χ2＝60.520,P＜0.01)。

圖4 8種呼吸道病毒的季節(jié)分布Fig.4 Rates of detection of the eight viruses by season

吸道合胞病毒為引起是兒童呼吸道疾病的主要病原體,其在四個季節(jié)呼吸道病毒感染中均占主導(dǎo)地位;流感病毒主要流行于春、冬兩季,并以冬季(32.2%)為主;鼻病毒主要流行于春、秋兩個季節(jié);博卡病毒主要流行于夏季(15.7%);副流感病毒主要流行于夏季(22.2%)和秋季(17.7%);腺病毒主要流行于夏季(16.7%);偏肺病毒主要流行于春季(10.2%)、冠狀病毒病毒除春季外,散在流行于其他3個季節(jié)。

2.5 呼吸道病毒感染兒童的臨床特征 所有確診為呼吸道病毒感染的患兒中,各種呼吸道病毒感染患兒所出現(xiàn)的臨床癥狀,包括咳嗽、流涕、咽喉痛、咳痰、頭痛、乏力、寒戰(zhàn)、畏寒、肌肉酸痛、胸痛、氣促和呼吸困難等均存在統(tǒng)計學(xué)差異(χ2＝227.122,P＜0.01)。其中,以咳嗽為最常見的臨床癥狀,占病毒感染患兒的85.8%(1 344/1 566),其次為咳痰和流涕,分別占病毒感染患兒總數(shù)的40.2%(630/1 566)和30.4%(476/1 566),除流涕(P＝0.242)、胸痛(P＝0.158)、呼吸困難(P＝0.278)外,其他臨床癥狀在8種呼吸道病毒感染間略有差異(P＜0.05),見表2。

表2 8種呼吸道病毒感染者臨床癥狀的差異性比較Tab.2 Comparison of the differences in clinical symptoms of children with eight respiratory virus infections

流感病毒和冠狀病毒感染主要以咳嗽、流涕等臨床癥狀為主;其他六種呼吸道病毒包括:呼吸道合胞病毒、偏肺病毒、博卡病毒、副流感病毒、腺病毒和鼻病毒的感染主要以咳嗽、咳痰為主要臨床癥狀。

3 討 論

既往研究表明,呼吸道病毒感染是引起兒童肺炎、支氣管炎及毛細支氣管炎的主要原因,可直接導(dǎo)致較高的病死率,其中以呼吸道合胞病毒最為常見[17-18]。本研究統(tǒng)計分析了廣州珠江醫(yī)院2009年11月至2015年9月共2 665份有急性呼吸道感染癥狀的兒童患者標(biāo)本中流感病毒、腺病毒、博卡病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、副流感病毒、偏肺病毒、鼻病毒等8種呼吸道病毒的檢出情況。2 665份患兒鼻拭子標(biāo)本中,1 566份標(biāo)本呼吸道病毒核酸檢測陽性,陽性率為58.8%。8種呼吸道病毒中,呼吸道合胞病毒檢出率最高,占陽性標(biāo)本的38.3%,其次為鼻病毒,占陽性標(biāo)本的22.2%,這與我國河北[19]、上海[20]、重慶[21]、江蘇[22]等地區(qū)及國外報道[23-25]情況基本一致,說明呼吸道合胞病毒在不同氣候和地域都是引起兒童急性上呼吸道感染的主要病原體。

通過對各年齡組病毒感染率的比較發(fā)現(xiàn),兒童患者各個年齡段間呼吸道病毒感染率存在統(tǒng)計學(xué)差異,并且隨著年齡增加而逐漸減低(P＜0.01)。其中以0～1歲組嬰幼兒患者病毒檢出率最高,其次為1～2歲組。并且我們在數(shù)據(jù)分析中發(fā)現(xiàn),在0～3歲的兒童中,RSV的檢出率28.9%最高,占陽性標(biāo)本數(shù)的46.9%,其次是鼻病毒14.0%,占陽性標(biāo)本數(shù)的22.7%,且這兩種病毒也是住院兒童感染率最高的病原體。雖然流感病毒在0～2歲兒童中檢出率不高,但在3～14歲患兒中檢出率一直處于較高水平,是引起門急診兒童呼吸道病毒感染的主要病毒。

此外,我們對兒童患者在各個季節(jié)中呼吸道病毒感染的情況作了詳細分析,發(fā)現(xiàn)8種呼吸道病毒在四個季節(jié)中的檢出率存在明顯差異(P＜0.01),并以春季最高,夏季和冬季次之,秋季最低,這可能跟南方春季溫暖、潮濕等因素有關(guān)。并且我們也發(fā)現(xiàn)混合感染患者更集中于春季和夏季這兩個季節(jié)。

近年來,隨著呼吸道病原檢測技術(shù)的發(fā)展,越來越多的多重感染病例被發(fā)現(xiàn)。Semple等[26]研究表明,多重病毒感染能明顯增加患者高燒、住院時間,也增加了入住ICU的風(fēng)險。但Martin等[27]的研究發(fā)現(xiàn),混合感染與疾病嚴重程度并不一定相關(guān),疾病的嚴重程度可能跟混合感染的病毒種類相關(guān)。因此,混合感染與疾病的嚴重程度相關(guān)性目前尚未有共識,真正相關(guān)可能取決于混合感染的病毒類型。在本研究中,混合感染標(biāo)本260份,占陽性標(biāo)本的16.6%,占檢測標(biāo)本的9.8%,與國內(nèi)外大部分研究報道結(jié)果一致[1,28-30],略低于He等[31]報道的混合感染標(biāo)本占標(biāo)本總數(shù)的14.9%。與其他病毒相比,呼吸道合胞病毒和鼻病毒占混合感染標(biāo)本比例最高,但各種病毒發(fā)生混合感染幾率最高的主要是HBOV 50.0%(47/94)、HRV 41.5%(144/347)和HCOV 38.6%(39/101)。此外,我們發(fā)現(xiàn)0～3歲兒童患者混合感染率最高,占混合感染標(biāo)本數(shù)的88.1%,結(jié)果與Martínez-Roig等[32]報道的兒童混合感染結(jié)果基本一致。推測跟這個時期的嬰幼兒從母體獲得的抗體剛消失,而機體的免疫屏障尚未建立,導(dǎo)致對各種病原體都比較敏感有關(guān)。但隨著年齡增長,與外界環(huán)境接觸增多,自身免疫系統(tǒng)不斷完善,對各種病原體的免疫力也逐漸增加,故出現(xiàn)混合感染的幾率也隨著減少?；旌细腥景l(fā)生率高于秋冬季節(jié)(P＜0.0001)。

本研究也發(fā)現(xiàn),男童和女童的呼吸道病毒感染率存在明顯差異,男童患者呼吸道病毒感染率高于女童患者(P＜0.05)。住院患兒呼吸道病毒檢出率高于門診患兒(P＜0.01)。此外,在對呼吸道病毒檢測陽性患者的臨床癥狀分析中發(fā)現(xiàn),除流涕、胸痛和呼吸困難外,其他臨床癥狀如咳嗽、咽喉痛、頭痛、乏力、寒戰(zhàn)、畏寒、肌肉酸痛、氣促、腹瀉、抽搐等在不同病毒感染患者中也存在差異(P＜0.01)。

總之,本文通過對廣州珠江醫(yī)院的2 665例急性呼吸道感染患兒的常見8種呼吸道病毒的病原學(xué)特征及臨床特征的分析,增加了我們對急性上呼吸道感染患兒的病原學(xué)特征的了解,為指導(dǎo)臨床治療及防控提供一定的數(shù)據(jù)支持。

利益沖突:無

引用本文格式:丁細霞,王壓娣,陳滿君,等.2 665例急性上呼吸道感染患兒的病原學(xué)及臨床特征[J].中國人獸共患病學(xué)報,2021,37(12):1135-1140,

1151.DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.150