胡鵬剛，張昌明(空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院西京醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，西安 710032)

鼻咽癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，目前的治療方法尚未明顯改善鼻咽癌患者的生存率[1-2]。據(jù)報(bào)道組蛋白甲基化酶Suv39H1 作為癌基因與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-4]。有研究發(fā)現(xiàn)中藥皂苷通過下調(diào)促癌基因表達(dá)促進(jìn)鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞的自噬和凋亡[5]。此外，研究發(fā)現(xiàn)在從用植物黃酮處理的癌細(xì)胞分離的組蛋白中注意到降低的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2表達(dá)和H3K27 的三甲基化[6]。黃芩苷通過下調(diào)Suv39H1 的表達(dá)和H3K9 甲基化水平起到抗腫瘤的作用[7]。枸杞皂苷，又名短葶山麥冬皂苷C，其富含皂苷和黃酮等有效成分，通過抑制血管生成，腫瘤增殖、黏附和侵襲，表現(xiàn)出抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用[8]。因此，推測枸杞皂苷可能通過調(diào)節(jié)Suv39H1 的表達(dá)抑制鼻咽癌發(fā)展。本研究通過枸杞皂苷干預(yù)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞觀察細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲以及Suv39H1 蛋白表達(dá)的變化，旨在為鼻咽癌治療提供新依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 研究時(shí)間為2019年8月～2020年9月，人鼻咽癌細(xì)胞系（HONE1，C666-1，CNE-1和CNE-2）和人鼻咽上皮細(xì)胞（NP69）購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，在溫度為37℃，5 %（v/v）CO2，濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。從得到組織病理學(xué)證實(shí)的15 例患者（男性，年齡32.46 ±9.77 歲）收集鼻咽癌組織和鄰近組織樣品。所有患者均未接受放療或化療，沒有其他疾病和腫瘤。所有鼻咽癌患者均簽署了知情同意書。本研究經(jīng)西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部倫理委員會批準(zhǔn)。動物實(shí)驗(yàn)程序嚴(yán)格按照機(jī)構(gòu)動物護(hù)理和使用委員會批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。

1.2 儀器與試劑 枸杞皂苷（西安康諾化工有限公司）；RPMI-1640 培養(yǎng)液、胎牛血清購自美國Hyclone 公司；青霉素-鏈霉素、0.25g/dl 胰蛋白酶/EDTA 消化液（美國Sigma 公司）；轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?3000 購自美國Sigma 公司；JAK2，p-JAK2，STAT3，p-STAT3 及Suv39H1 等一抗及相應(yīng)二抗（美國Santa Cruz 公司）；RT-qPCR 試劑盒RNA 提取試劑盒，RT 反轉(zhuǎn)錄試劑盒，蛋白提取試劑盒，引物合成由上海生工合成；Lipofectamine?3000轉(zhuǎn)染試劑購自美國Thermo 公司；CCK-8 試劑盒，Annexin V-FITC 檢測試劑盒，Transwell 小室（美國Millipore 公司）；高通量實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（Roche 公司，瑞士），Western blot系統(tǒng)（北京六一儀器廠DYY-7C），臺式低溫高速離心機(jī)（日本KUBOTA 公司），細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海力申科學(xué)儀器公司），流式細(xì)胞儀（美國Beckman 公司），凝膠成像分析儀（廣州瑞豐實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組：將鼻咽癌細(xì)胞CNE-2 復(fù)蘇后，置于含10ml/dl 胎牛血清和1g/dl 青鏈霉素（100 U/ml 青霉素、100 U/ml 鏈霉素）的RPMI-1640 培養(yǎng)液于37℃，5%（v/v） CO2恒溫箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞匯合至70%時(shí)，用不同濃度枸杞皂苷（0，2.5，5，10，50，100 和200μmol/L）分別處理細(xì)胞24 h 檢測細(xì)胞活力，篩選合適濃度；使用5，10 和50μmol/L 的枸杞皂苷分別干預(yù)細(xì)胞，在0，24，48 和72 h 時(shí)檢測細(xì)胞增殖，48 h 后檢測細(xì)胞凋亡率和侵襲率；將pcDNA-Suv39H1 和Suv39H1 siRNA 分別轉(zhuǎn)染于細(xì)胞內(nèi)，檢測細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲；轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 載體于細(xì)胞中，24 h后使用50 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)細(xì)胞，48 h 后檢測細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲。

1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染：Suv39H1 過表達(dá)載體（pcDNASuv39H1）和針對Suv39H1 的siRNA（Suv39H1 siRNA）均獲自上海生工公司（中國上海）。轉(zhuǎn)染前，使用1g/dl 胰蛋白酶處理消化細(xì)胞。在血液計(jì)數(shù)室中計(jì)數(shù)后，將細(xì)胞接種到六孔培養(yǎng)板上24 h，然后以40%～60%匯合率轉(zhuǎn)染。所有轉(zhuǎn)染均使用Lipofectamine?3000 根據(jù)制造商的說明進(jìn)行。轉(zhuǎn)染后48 h，收獲細(xì)胞并進(jìn)行下一步分析。

1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量-PCR：檢測組蛋白甲基轉(zhuǎn)移 酶Suv39H1 的mRNA水平，按照TRIZOL 試劑盒說明書提取各組細(xì)胞總RNA，并用紫外分光光度計(jì)檢測RNA 的純度和濃度。隨后，使用Takara 反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄各組檢測基因，并使用SYBR Green PCR Master Mix 擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物，以β-actin 作為內(nèi)參基因。Suv39H1 上游引物：5’-GGTGGTGGGGAAGAAGCTGG-3’；下游引物：5’-TCCCACCTCTCCACGAAGTT-3’。β-actin 上游引物：5’-TACAACCTCCTTGCAGCTCC-3’；下游引物：5’-GGATCTTCATGAGGTAGTCAGTC-3’。采 用Applied Biosystems 7900HT qPCR 系統(tǒng)按照以下參數(shù)進(jìn)行qPCR：95℃預(yù)變性2 min，94℃變性15 s，55℃退火25 s，在72℃延伸15 s，進(jìn)行35 個(gè)循環(huán)。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1g/dl 瓊脂糖凝膠電泳檢測，依據(jù)2-ΔΔCt法計(jì)算各樣本mRNA 的相對表達(dá)量。

1.3.4 Western blot 檢測法：檢測Suv39H1 和JAK2/ STAT3 通路蛋白JAK2，p-JAK2，STAT3 和p-STAT3的表達(dá)。將各組細(xì)胞按照每孔1×105的密度接種于6 孔板，24 h 后采用蛋白質(zhì)定量（bicinchoninic acid，BCA）法進(jìn)行蛋白定量，各取30μl 樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚炳烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE），再將蛋白轉(zhuǎn)移至膜上，5g/dl 脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入I 抗，4℃孵育過夜。加入II 抗（1∶ 1 000，ab150077）37℃ 孵育45 min，用ECL 液顯影，使用化學(xué)發(fā)光試劑盒在化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)檢測，隨后結(jié)果采用Image-Pro Plus 6 軟件（Media Cybernetics）分析，以待測蛋白與內(nèi)參照GAPDH 的灰度值比值作為蛋白的相對表達(dá)量。

1.3.5 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活力：將各組細(xì)胞按照每孔1×105的密度接種于96 孔板中，用含10ml/dl胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)液制成單細(xì)胞懸液，置于37℃、5%（v/v）CO2的條件下培養(yǎng)。每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，加入20 μl CCK-8 溶液。培養(yǎng)24 h，于酶標(biāo)儀450 nm 處檢測吸光度（A）值。取5 孔A值的平均數(shù)，按照下列公式計(jì)算細(xì)胞相對活力：細(xì)胞相對活力（%）=處理組A/對照組A×100%。

1.3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡：根據(jù)制造商說明使用雙染凋亡試劑盒Annexin-V FITC/PI處理細(xì)胞，于1 h 內(nèi)，在流式細(xì)胞儀上使用Beckman CXP 軟件檢測細(xì)胞凋亡情況。

1.3.7 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力：在Transwell 上室加入300 μl 預(yù)溫的無血清RPMI-1640 培養(yǎng)液，使用無血清培養(yǎng)液將待測細(xì)胞制成濃度為1×106/ml 的單細(xì)胞懸液，取細(xì)胞懸液100～200 μl加入Transwell 上室中，并于下室中加入500 μl 含10ml/dl 胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)液，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞12～24 h，使用0.5g/dl 的結(jié)晶紫對上室底部細(xì)胞進(jìn)行染色，用棉簽除去上室內(nèi)側(cè)細(xì)胞，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用ANOVA 方差分析、Dunnett-t法比較總體和總體中兩樣本均數(shù)之間的差異。以P＜0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察枸杞皂苷對鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響 與0 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)組比較，不同濃度枸杞皂苷干預(yù)劑量依賴性降低CNE-2 細(xì)胞活力（P＜0.01），見表1。與對照組比較，5，10 和50 μmol/L枸杞皂苷干預(yù)組CNE-2 細(xì)胞增殖力呈劑量依賴性顯著降低，ANOVA 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表2。與對照組相比，5，10 和50 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)組CNE-2細(xì)胞凋亡率呈劑量依賴性增加至（15.70±1.18）%（F=5.232，P=0.026 1），細(xì)胞侵襲數(shù)劑量依賴性減少至（32.66±2.51）%（F=4.807，P=0.031 5），ANOVA 比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖1。

圖1 枸杞皂苷對鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞凋亡和侵襲的影響

表1 不同濃度枸杞皂苷干預(yù)后CNE-2 細(xì)胞活力（n=3，±s）

表1 不同濃度枸杞皂苷干預(yù)后CNE-2 細(xì)胞活力（n=3，±s）

指標(biāo)不同濃度枸杞皂苷（μmol/L）F P 0 5 10 50 100 200細(xì)胞活力% 100.00 83.03±6.34 75.92±5.88 68.20±6.03 46.22±4.19 27.08±2.21 91.7 0.00

表2 不同濃度枸杞皂苷干預(yù)CNE-2 細(xì)胞后的細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

表2 不同濃度枸杞皂苷干預(yù)CNE-2 細(xì)胞后的細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

時(shí)間（h） 對照組不同濃度枸杞皂苷（μmol/L）干預(yù)組F P 5 10 50 0 0.26±0.03 0.25±0.03 0.25±0.02 0.26±0.04 0.035 0.990 5 24 0.51±0.03 0.46±0.05 0.40±0.04 0.33±0.03 4.090 0.049 3 48 0.79±0.06 0.68±0.04 0.62±0.03 0.51±0.04 7.100 0.012 1 72 1.22±0.08 1.01±0.06 0.82±0.07 0.63±0.08 12.030 0.002 5

2.2 不同劑量枸杞皂苷對鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞中Suv39H1 表達(dá)的影響 見圖2。與對照組相比，枸杞皂苷干預(yù)組CNE-2 細(xì)胞中Suv39H1 的mRNA（F=25.75，P= 0.000 2）和蛋白（F=14.64，P= 0.001 3）表達(dá)均隨著枸杞皂苷濃度增加而減少，ANOVA 比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 Western blot 檢測CNE-2 細(xì)胞中Suv39H1 蛋白表達(dá)

2.3 組蛋白甲基化酶Suv39H1 在鼻咽癌中高表達(dá) 本實(shí)驗(yàn)通過Western blot 測定15 對鼻咽癌患者腫瘤組織和相鄰非腫瘤組織中Suv39H1 的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與正常組織（normal）相比，Suv39H1 在鼻咽癌組織中高表達(dá)，unpaired-t檢驗(yàn)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見圖3A。與正常鼻咽上皮細(xì)胞（NP69）相比，Suv39H1 在鼻咽癌細(xì)胞系（HONE1，C666-1，CNE-1 和CNE-2）中高表達(dá)，Dunnett-t檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見圖3B。

圖3 組蛋白甲基化酶Suv39H1 在鼻咽癌細(xì)胞和 組織中的表達(dá)

2.4 組蛋白甲基化酶Suv39H1 對CNE-2 細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響 見表3。本實(shí)驗(yàn)測得轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 過表達(dá)效率為pcDNA-3.1 組的3.16±0.22 倍，轉(zhuǎn)染Suv39H1 siRNA干擾效率為NC siRNA 組 的0.33±0.06 倍（Dunnett-t檢驗(yàn)，P＜0.01）。與pcDNA-3.1 組比較，pcDNASuv39H1 組CNE-2 細(xì)胞增殖力以及細(xì)胞侵襲數(shù)（圖4B）明顯增加，細(xì)胞凋亡率顯著降低（圖4A），Dunnett-t檢驗(yàn)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對照組及NC siRNA 組比較，Suv39H1 siRNA 組CNE-2細(xì)胞在450 nm 處吸光度值以及細(xì)胞侵襲數(shù)（圖4B）顯著降低，細(xì)胞凋亡率明顯增加（圖4A），Dunnett-t檢驗(yàn)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖4 轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 和Suv39H1 siRNA對CNE-2 細(xì)胞侵襲和凋亡的影響

表3 轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 和Suv39H1 siRNA 后CNE-2 細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

表3 轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 和Suv39H1 siRNA 后CNE-2 細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

時(shí)間（h） 對照組 pcDNA-3.1 pcDNA-Suv39H1 NC siRNA Suv39H1siRNA F P 0 0.25±0.03 0.26±0.02 0.24±0.03 0.23±0.04 0.25±0.03 0.175 0.911 24 0.53±0.05 0.57±0.03 0.69±0.04 0.55±0.03 0.36±0.04 9.333 0.002 48 0.76±0.05 0.74±0.06 1.14±0.03 0.71±0.04 0.53±0.04 24.38 0.000 72 1.23±0.09 1.27±0.07 2.09±0.11 1.19±0.06 0.66±0.07 39.10 0.000

2.5 枸杞皂苷干預(yù)通過Suv39H1 對CNE-2 細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響 見表4。與50 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-3.1 組相比，50 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-Suv39H1 組CNE-2 細(xì)胞吸光度顯著降低（Dunnett-t檢驗(yàn)，P＜0.01）。與50 μmol/L枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-3.1 組比較，50 μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-Suv39H1 組CNE-2 細(xì)胞凋亡率明顯降低，細(xì)胞侵襲數(shù)顯著增加，Dunnett-t檢驗(yàn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見圖5。

圖5 枸杞皂苷通過下調(diào)Suv39H1 抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲并促進(jìn)細(xì)胞凋亡

表4 枸杞皂苷干預(yù)轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 的CNE-2 細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

表4 枸杞皂苷干預(yù)轉(zhuǎn)染pcDNA-Suv39H1 的CNE-2 細(xì)胞增殖力比較（n=3，±s）

時(shí)間（h） 對照組 50μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)組50μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-3.1 50μmol/L 枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-Suv39H1 F P 0 0.25±0.03 0.23±0.03 0.25±0.05 0.25±0.04 0.073 0.973 24 0.53±0.05 0.31±0.03 0.34±0.04 0.52±0.04 19.7 0.000 48 0.71±0.06 0.54±0.05 0.57±0.06 0.71±0.05 18.72 0.000 72 1.28±0.11 0.61±0.07 0.66±0.09 1.18±0.10 53.63 0.000

2.6 枸杞皂苷干預(yù)對JAK2/STAT3 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 見圖6。與對照組相比，枸杞皂苷干預(yù)組JAK2/STAT3 通路蛋白p-JAK2 和p-STAT3 的表達(dá)均被顯著抑制，Dunnett-t檢驗(yàn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-3.1 組相比，枸杞皂苷干預(yù)+pcDNA-Suv39H1 組p-JAK2和p-STAT3 的蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，Dunnett-t檢驗(yàn)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 01）。

圖6 枸杞皂苷干預(yù)細(xì)胞后JAK2/STAT3 通路相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討論

鼻咽癌是遺傳因素、病毒感染和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，放療是主要治療手段，但30%以上的晚期鼻咽癌患者仍治療失敗[9]。所以致力于開發(fā)治療鼻咽癌更有效更安全的藥物是十分必要的。本研究探討了枸杞皂苷對鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響，并探究通過下調(diào)Suv39H1 表達(dá)發(fā)揮對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用，進(jìn)而改善鼻咽癌治療進(jìn)展。

傳統(tǒng)中藥的開發(fā)已成為新藥研發(fā)的途徑之一，許多中藥及其活性成分可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。WANG 等[10]研究表明人參皂苷Rg3 可能通過調(diào)節(jié)MMP-2，MMP-9 和EMT 相關(guān)基因的表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞的遷移和侵襲。枸杞皂苷作為癌癥治療的熱點(diǎn)藥物具有抑制腫瘤增殖抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。HE等[11]報(bào)道枸杞皂苷通過調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞與乳腺癌細(xì)胞之間的相互作用抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移。此外，1，5，10，30 和50 μmol/L 枸杞皂苷以非肌肉肌球蛋白IIA（NMIIA）作為靶標(biāo)，通過劑量依賴性下調(diào)其表達(dá)預(yù)防肺癌轉(zhuǎn)移[12]。本研究表明枸杞皂苷干預(yù)對鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用，呈劑量依賴性（5，10，50，100 和200μmol/L）抑制CNE-2 細(xì)胞增殖和侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

越來越多的研究表明，基因突變及表觀遺傳學(xué)改變是腫瘤發(fā)病的重要機(jī)制。其中，組蛋白修飾的異?？墒贡碛^遺傳學(xué)調(diào)控失衡，導(dǎo)致疾病的發(fā)生發(fā)展[13]。表觀遺傳的改變是可逆的，這就為疾病的治療提供了靶點(diǎn)。組蛋白H3K9 特異性甲基化酶Suv39H1 可催化組蛋白H3K9 三甲基化，參與異染色質(zhì)形成，是表觀遺傳學(xué)及染色體研究領(lǐng)域的重要發(fā)現(xiàn)[14]。目前認(rèn)為Suv39H1 不僅與染色體的分離和穩(wěn)定性有關(guān)，也能影響腫瘤抑制蛋白Rb，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[15]。RODRIGUES 等[16]研究表明Suv39H1 和H3K9me3 水平升高的患者，宮頸癌復(fù)發(fā)率明顯增高。Suv39H1 在前列腺癌中表達(dá)升高，并促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的遷移[17]。本研究表明枸杞皂苷能夠通過下調(diào)Suv39H1 表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲。提示Suv39H1 在鼻咽癌的發(fā)生過程中可能起到了促進(jìn)的作用。

JAKs 家族JAK 是一類重要的酪氨酸激酶，下游信號是STAT，是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子，也是一類具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能和轉(zhuǎn)錄活化功能的細(xì)胞脂蛋白[18]。研究顯示，多種人類腫瘤中有該家族成員的異常激活，尤其是STAT1，STAT3 和STAT5[19]。其中STAT3 可通過自身活化的增強(qiáng)以及下游基因表達(dá)的變化來抑制凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[20]。據(jù)報(bào)道當(dāng)JAK2/STAT3 途徑持續(xù)激活，可導(dǎo)致鼻咽癌細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化，可能與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制相關(guān)聯(lián)[21]。此外，有研究報(bào)道在骨髓增殖性腫瘤中上調(diào)Suv39H1 的表達(dá)，JAK2的表達(dá)顯著增加[4]。黃芪甲苷通過JAK2/STAT3 途徑被證明是氣道慢性炎癥性肺病和血管生成的重要調(diào)節(jié)劑[22]。本研究表明，當(dāng)枸杞皂苷干預(yù)鼻咽癌CNE-2 細(xì)胞后，JAK2/STAT3 通路蛋白的表達(dá)水平顯著降低，而Suv39H1 過表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)該結(jié)果。

綜上所述，本研究表明枸杞皂苷能夠抑制Suv39H1 表達(dá)和JAK2/STAT3 信號通路以緩解體外鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲，有望成為治療鼻咽癌新的靶向藥物。本研究還未對組蛋白甲基化酶Suv39H1 催化組蛋白H3K9 三甲基化的下游靶基因做深入研究，接下來將以表觀遺傳學(xué)組蛋白修飾作為后續(xù)研究重點(diǎn)。