常愷莉，張琳，周紅英，張晨雪，葉鴻翔，梅顯貴

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 泰安 271018）

隨著微生物研究的不斷發(fā)展，人們?cè)诮】抵参锝M織內(nèi)部也發(fā)現(xiàn)微生物的存在，這類微生物后來(lái)被稱為“植物內(nèi)生菌”。目前從藻類、苔蘚、蕨類、裸子植物和被子植物中均已分離到內(nèi)生菌，并且具有豐富的生物多樣性［1－4］。19世紀(jì)中葉，De Bary首先提出了內(nèi)生菌（endophyte）的概念，將生活在植物組織內(nèi)部的微生物與生長(zhǎng)在植物表面的表生菌（epiphyte）相區(qū)別［5］。1991年P(guān)ertrini［1］定義內(nèi)生菌為“一類在其生活史中的某一段時(shí)期存在于健康植物組織內(nèi)部，而不使宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的微生物”。

諸多研究表明，內(nèi)生菌與宿主植物在長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中逐漸形成了一種互利互惠的關(guān)系，并塑造了內(nèi)生菌特有的基因特征和代謝產(chǎn)物，既能夠直接促進(jìn)植物生長(zhǎng)如調(diào)節(jié)或合成植物生長(zhǎng)激素、調(diào)節(jié)根部生理、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收［6，7］等，通過(guò)與宿主進(jìn)行遺傳信息交換，調(diào)控宿主基因表達(dá)［8，9］；又能產(chǎn)生抗生素或分泌毒素拮抗作物病原菌、蟲害等間接促進(jìn)植物生長(zhǎng)［10，11］；還可利用內(nèi)生菌資源進(jìn)行微生物菌肥或生物農(nóng)藥的研發(fā)以替代化學(xué)農(nóng)藥或化學(xué)肥料進(jìn)行生物防控、土壤修復(fù)改良等，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)，農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展［12－15］。由此可見，植物內(nèi)生菌對(duì)宿主植物的生長(zhǎng)、代謝、抗逆等生理活動(dòng)有著重要的影響，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。

我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥文化歷史悠久，藥用植物資源種類豐富，分布地域廣闊，涵蓋383科，2 309屬，11 146種，僅臨床常用植物藥材就有700余種。藥用植物因其生長(zhǎng)環(huán)境的地域差異性和自身特殊的內(nèi)環(huán)境和生理生化特點(diǎn)，加之物種和地域交叉等因素的影響，蘊(yùn)藏著豐富而獨(dú)特的內(nèi)生菌資源［4，16］。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2010年之前的十多年間有關(guān)藥用植物內(nèi)生真菌的研究涉及我國(guó)藥用植物21科44屬62種2變種，僅占我國(guó)植物資源種類的5.7‰和臨床常用植物藥材的9.1%，對(duì)其研究和開發(fā)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠［17］。藥用植物內(nèi)生菌由于其特殊的內(nèi)環(huán)境、微環(huán)境，從中篩選有價(jià)值的菌種資源的幾率大大增加，其開發(fā)和利用是一項(xiàng)快速有效、可持續(xù)發(fā)展的新技術(shù)。隨著環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)、綠色生態(tài)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，將藥用植物內(nèi)生菌資源運(yùn)用于農(nóng)業(yè)研究與生產(chǎn)具有天然優(yōu)勢(shì)。本文對(duì)近些年藥用植物內(nèi)生菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用進(jìn)行綜述，并對(duì)存在問題和發(fā)展前景進(jìn)行探討，以期為藥用植物內(nèi)生菌資源運(yùn)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)提供借鑒。

1 藥用植物內(nèi)生菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用

1.1 藥用植物內(nèi)生菌能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育

藥用植物內(nèi)生菌與宿主形成了許多共生互促機(jī)制，可通過(guò)多種途徑促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。如某些內(nèi)生菌可以自身產(chǎn)生生長(zhǎng)激素促進(jìn)宿主生長(zhǎng)［18］，或促進(jìn)種子的萌發(fā)［19］，或促進(jìn)根部營(yíng)養(yǎng)的吸收［20］，或促進(jìn)植物代謝物的積累［21］等。因此，利用內(nèi)生菌的這些功能特點(diǎn)可以輔助解決植物栽培耕作和生長(zhǎng)發(fā)育等過(guò)程中的難題。

郭順星等［19］發(fā)現(xiàn)分離自蘭科植物原球莖中的內(nèi)生菌可以有效促進(jìn)細(xì)葉石斛種子的萌發(fā)；無(wú)菌條件下播種無(wú)種子萌發(fā)，伴菌播種發(fā)芽率達(dá)20%以上；在內(nèi)生真菌培養(yǎng)物的醇、水提取液培養(yǎng)條件下，種子發(fā)芽率高達(dá)40%～70%，但相比而言，內(nèi)生菌絲伴播更有利于種子萌發(fā)形成的原球莖繼續(xù)發(fā)育。張集慧等［21］發(fā)現(xiàn)分離自蘭科藥用植物的5株內(nèi)生真菌可促進(jìn)蘭科藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育，并從其發(fā)酵液和菌絲體中分別提取出5種植物激素，包括赤霉素、吲哚乙酸、脫落酸、玉米素和玉米核苷，對(duì)蘭花的生長(zhǎng)發(fā)育有著較好的促進(jìn)作用；內(nèi)生菌伴播可有效促進(jìn)天麻、石斛等種子的萌發(fā)，研究為闡明內(nèi)生真菌促進(jìn)蘭科藥用植物生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制提供了依據(jù)。福建金線蓮［Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl.］是一種常見的名貴藥材，廣泛用于高血壓、糖尿病和肝炎等的治療，由于長(zhǎng)期采挖，野生資源瀕臨滅絕；通過(guò)組織培養(yǎng)可大量繁殖，但面臨移栽成活率低、生長(zhǎng)緩慢、難以養(yǎng)護(hù)成為有價(jià)值的商品等一系列問題。唐明娟等［22，23］從野生福建金線蓮根中分離獲得多種菌根真菌并對(duì)其生物活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)部分菌根真菌不但可與金線蓮幼苗形成典型的菌根結(jié)構(gòu)，而且對(duì)其生長(zhǎng)具有顯著促進(jìn)作用，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)在福建金線蓮的家栽過(guò)程中可利用內(nèi)生真菌提高其成活率、酶活性和產(chǎn)量。

1.2 藥用植物內(nèi)生菌可用于生物防治

植物病害是引起農(nóng)作物品質(zhì)下降、產(chǎn)量損失的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)大約80%的植物病害是由植物病原真菌引起的［24］。長(zhǎng)期以來(lái)，植物真菌病害的防治主要以化學(xué)方法為主，而化學(xué)農(nóng)藥存在諸多弊端，如農(nóng)藥殘留帶來(lái)環(huán)境污染、危害人畜健康以及長(zhǎng)期使用造成病原菌的耐藥等問題。因此，尋找綠色、有效、可替代的產(chǎn)品用于植物病害防治成為農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵問題［25］。

藥用植物內(nèi)生菌作為一類可持續(xù)利用的微生物資源，一方面可以提高植物的抗生物脅迫性［26，27］，另一方面能夠代謝產(chǎn)生結(jié)構(gòu)豐富、新穎的具有抗植物病原菌活性的代謝成分［28］，為防治植物病蟲害提供了極大的可行性。藥用植物內(nèi)生菌用于防治植物病害已有諸多成功案例。許多研究表明，植物內(nèi)生真菌的發(fā)酵液大多具有抗植物病原真菌活性［29，30］，并從中分離出許多活性物質(zhì)［24］。Lu等［31］從黃花蒿內(nèi)生真菌Colletotrichumsp.中分離鑒定的新活性代謝物ergosterol對(duì)小麥全蝕病、紋枯病、根腐病和疫霉病致病真菌具有有效的抑制作用。Li等［32］從雷公藤莖皮中分離得到的內(nèi)生真菌Cryptosporiopsiscf.quercina可以代謝產(chǎn)生獨(dú)特的tetramic acid衍生物cryptocin，具有抗稻瘟病病原菌等多種植物病原真菌活性，但對(duì)人類病原真菌無(wú)活性。Xu等［28］從三七內(nèi)生真菌Preussia isomeraXL－1326中分離得到一對(duì)新穎的降倍半萜（＋）和（－）preuisolactone A，具有顯著的抗菌活性。Yang等［33］從蛇足石杉內(nèi)生真菌Bionectriasp.Y1085中分離得到一系列具有顯著抗菌活性的新穎代謝物。Wu等［34］從桑黃內(nèi)生真菌Alternaria alternataShm－1分離得到一個(gè)新的2H－benzindazole混合物，具有中等抗C.michiganense活性。本課題組近些年針對(duì)山東省野生藥用植物資源和多年道地產(chǎn)區(qū)家種藥用植物資源內(nèi)生菌開展了一系列研究，從泰山、徂徠山、沂蒙山等地采集野生藥用植物資源50余種，生長(zhǎng)環(huán)境遍及不同地形、海拔、氣候等；同時(shí)從臨沂、濟(jì)南、泰安、淄博等山東省傳統(tǒng)道地藥材產(chǎn)區(qū)采集種植藥材丹參、黃芩、金銀花等藥用植物10余種，從中分離內(nèi)生真菌200余株，以小麥赤霉病病原菌禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）作為指示菌，采用平板對(duì)峙法和紙片擴(kuò)散法分別對(duì)內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了抗菌活性篩選，從中得到10株具有抗小麥赤霉病菌活性內(nèi)生菌，相關(guān)研究仍在開展中。由此可見，將藥用植物內(nèi)生菌用于生物防治可為開發(fā)綠色農(nóng)藥提供新的資源并且潛力巨大。

1.3 運(yùn)用植物內(nèi)生菌開發(fā)微生物肥料，進(jìn)行土壤修復(fù)及改良

在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動(dòng)中，由于土地長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)耕作，往往面臨營(yíng)養(yǎng)貧瘠或連作障礙等問題，進(jìn)而影響作物長(zhǎng)勢(shì)、產(chǎn)量和質(zhì)量。另外，隨著工業(yè)化的發(fā)展，生活垃圾廢水的排放，以及農(nóng)藥化肥的使用，各種各樣的污染物如有機(jī)污染物、重金屬等排放到土壤中，給土壤帶來(lái)嚴(yán)重壓力。一方面造成土壤肥力退化、病害加重等，另一方面土壤污染日益嚴(yán)重，危及植物生長(zhǎng)及人類發(fā)展，因此改善土壤質(zhì)量、修復(fù)土壤污染成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生活不得不面臨的嚴(yán)峻問題。微生物菌肥作為一種可持續(xù)利用資源，越來(lái)越受到人們的青睞，在改善土壤成分、提高肥力、促進(jìn)植物生長(zhǎng)方面潛力巨大。

王夏等［35］研究?jī)?nèi)生菌肥料對(duì)設(shè)施西瓜生長(zhǎng)的影響，以西瓜品種‘小蘭’為試材，采用苗期澆灌內(nèi)生真菌菌劑和設(shè)施大棚內(nèi)減少化肥用量配施微生物肥的方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，內(nèi)生菌劑處理（5 g／L）對(duì)西瓜幼苗有一定的促生作用，可增加根長(zhǎng)、株高、葉面積等，同時(shí)可有效降低枯萎病的發(fā)生，提高幼苗的生物量、西瓜產(chǎn)量和品質(zhì)。郎宸用［36］以龍高L2玉米品種和野生植物根系內(nèi)生菌鏈格孢菌（Alternaria alternata）為材料，通過(guò)連續(xù)3年大田試驗(yàn)，研究了內(nèi)生菌提取物對(duì)玉米生長(zhǎng)的影響，綜合比較發(fā)現(xiàn)，植物內(nèi)生菌提取物可以顯著影響玉米的生長(zhǎng)發(fā)育，提高了成熟期玉米的百粒重、穗粒數(shù)和穗粒重，進(jìn)而提高玉米產(chǎn)量。

土壤污染可簡(jiǎn)單劃分為重金屬污染、有機(jī)物污染，或兩者復(fù)合污染等［37］。近些年，研究者發(fā)現(xiàn)植物內(nèi)生菌具有改變植物攝取污染物或酶促降解污染物的能力，當(dāng)微生物與植物聯(lián)合時(shí)，植物可為微生物提供棲息地，而微生物也能通過(guò)增強(qiáng)植物的耐受性及降解污染物改善其生長(zhǎng)環(huán)境，這種方法被認(rèn)為是一種新型、有前景的生物修復(fù)方法［37］。

目前研究人員從多種植物中分離到具有修復(fù)土壤重金屬污染的內(nèi)生菌，如芥菜、蜈蚣草、商路、大豆、油菜等［37］。蘆葦通常被用于處理廢水或滲濾液，Sim等［38］從蘆葦中首次分離得到一系列內(nèi)生真菌，并對(duì)其對(duì)各種重金屬的耐受性和生物吸附潛力進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明，21株內(nèi)生菌均表現(xiàn)出重金屬耐受性（包括Cd2＋、Cu2＋、Cr2＋、Pb2＋、Zn2＋等），其中以Trichoderma asperellumIso11，Phomopsissp.Iso9 andSaccharicola bicolourIso22三株菌耐受力最強(qiáng)；進(jìn)一步研究表明，與Phomopsissp.Iso9和S.bicolourIso22相比，T.asperellumIso11對(duì)各種重金屬均表現(xiàn)出較好的耐受性和適應(yīng)性，對(duì)金屬的適應(yīng)濃度高達(dá)2 000 mg／L；三種內(nèi)生菌在單金屬溶液中均具有去除效果，在多金屬溶液中，T.asperellumIso11和S.bicolourIso22對(duì)Cu2＋的吸附親和力較高，其次是Cr3＋和Pb2＋，而Phomopsissp.Iso9對(duì)重金屬的親和性順序?yàn)镃u2＋＞Pb2＋＞Cr3＋。多環(huán)芳烴是一類具有毒性的環(huán)境污染物，由于人類活動(dòng)在環(huán)境中大量累積。Dai等［39］為了探索更多具有多環(huán)芳烴生物修復(fù)功能的內(nèi)生菌資源，以菲作為模型化合物，從4種大戟科植物中分離到9株內(nèi)生真菌，并對(duì)其菲降解進(jìn)行了篩選，其中分離自重陽(yáng)木（Bischofia polycarpam）的內(nèi)生真菌Ceratobasidum stevensiistrain B6具有較高的降解效率，在該內(nèi)生真菌培養(yǎng)過(guò)程中加入100 mg／L菲，培養(yǎng)10天后大約89.51%的菲被消除。

以上研究充分表明，植物內(nèi)生菌以微生物菌肥的方式作為一種綠色環(huán)保、可持續(xù)利用的資源，在改善土壤質(zhì)量、修復(fù)土壤污染方面具有廣闊前景。

1.4 內(nèi)生菌能夠提高植物抗逆性

植物的抗逆性是指植物具有的抵抗外界不利環(huán)境的某些性狀，如抗旱、抗寒、抗鹽、抗病蟲害等，這些不利環(huán)境因素又可分為非生物脅迫（高溫、干早、高鹽堿等）和生物脅迫（病原菌、昆蟲、食草動(dòng)物等）。一系列研究表明，內(nèi)生菌與宿主長(zhǎng)期生長(zhǎng)進(jìn)化過(guò)程中，能有效促進(jìn)植物對(duì)生物脅迫和非生物脅迫的耐受，形成一定抗逆性，增強(qiáng)其適應(yīng)性，這種適應(yīng)性的增強(qiáng)包括對(duì)食草性哺乳動(dòng)物和昆蟲、病原菌和線蟲等的抵抗力，以及宿主的耐旱性和競(jìng)爭(zhēng)力等［26，27］。借此可將其運(yùn)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)以提高作物對(duì)干旱或鹽堿地等惡劣環(huán)境的適應(yīng)。

自然生態(tài)系統(tǒng)中的所有植物都被認(rèn)為與菌根真菌和／或內(nèi)生真菌共生。經(jīng)過(guò)4億多年的進(jìn)化，一些植物仍然不能依靠自身而需要通過(guò)其內(nèi)生真菌提高耐脅迫性，通過(guò)對(duì)高脅迫生境中植物內(nèi)生菌的分析，發(fā)現(xiàn)至少有一些內(nèi)生真菌賦予其寄主植物對(duì)特殊生境的耐受性，離開了這些內(nèi)生菌，宿主植物無(wú)法在原生棲息地生存［40］。如受內(nèi)生菌感染的冷季禾本科植物可逐漸適應(yīng)外界環(huán)境（干旱和礦物質(zhì)缺乏）的脅迫［41］。

Redman等［42］研究表明，生長(zhǎng)于美國(guó)黃石公園的植物Dichanthelium lanugunasum只有在與其優(yōu)勢(shì)彎孢屬內(nèi)生真菌Curvularia protuberata共生的情況下才能適應(yīng)38℃的地?zé)岣邷丨h(huán)境，而單獨(dú)培養(yǎng)條件下宿主植物Dichanthelium lanugunasum則無(wú)法存活。王貴生等［43］研究發(fā)現(xiàn)分離自亳菊的1株柄孢殼菌屬（Zopfiellasp.）內(nèi)生菌BJF10對(duì)玉米彎孢菌、黃瓜枯萎菌、小麥赤霉菌、茶葉輪斑菌均具有拮抗作用和降解纖維素、抗氧化等生物活性。Rodriguez等［44］證明來(lái)自沿海和地?zé)嵘车脑参锓謩e需要借助共生真菌來(lái)耐受鹽和熱環(huán)境，而在沒有鹽或熱脅迫的生境中，從植物分離得到的同一種內(nèi)生真菌卻不具有這些脅迫耐受能力；源自農(nóng)作物的內(nèi)生真菌具有抗病性，卻不具有耐鹽性或耐熱性；研究者分別將農(nóng)作物、沿海植物和地?zé)嶂参镏械膬?nèi)生菌在番茄上定植，最終分別獲取了抗病性、耐鹽性和耐熱性能；此外，沿海植物內(nèi)生菌在水稻上定植則賦予了水稻耐鹽性；不管被定植植物原始棲息地在何處，耐旱脅迫環(huán)境下植物內(nèi)生菌也會(huì)賦予其耐旱能力，這種內(nèi)生真菌賦予植物抗逆性的能力或許為減輕全球氣候變化對(duì)農(nóng)業(yè)和原生植物群落的影響提供一種新的策略。

自然界中某種植物出現(xiàn)的優(yōu)良抗逆性狀，因?yàn)椴煌锓N間存在的生殖隔離，在自然條件下很難轉(zhuǎn)移到其他種類的植物上，而通過(guò)植物內(nèi)生菌的這種“促抗作用”作為媒介或許能為解決這一難題提供方案。植物內(nèi)生菌進(jìn)入宿主植物后，能脅迫宿主植物開啟植物抗逆有關(guān)的基因，增強(qiáng)這些基因的表達(dá)，提高與抗逆有關(guān)的酶活性，從而增強(qiáng)宿主植物的抗逆性［20］。另一方面，植物內(nèi)生菌也可通過(guò)產(chǎn)生抗生素、水解酶、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等成分，增強(qiáng)宿主的抵抗力以及誘導(dǎo)其產(chǎn)生系統(tǒng)抗性［45，46］。藥用植物生長(zhǎng)環(huán)境多樣，野生棲息地一般營(yíng)養(yǎng)貧瘠或氣候惡劣，這種特殊環(huán)境往往也塑造了其內(nèi)生菌的特殊性以及對(duì)脅迫環(huán)境的適應(yīng)性，因此運(yùn)用藥用植物內(nèi)生菌資源研究植物的抗逆性具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。

1.5 運(yùn)用內(nèi)生菌資源對(duì)植物遺傳育種進(jìn)行改良

傳統(tǒng)植物育種的方法是以自然突變和有性雜交為基礎(chǔ)，而由于物種間存在生殖隔離，具有一定局限性，隨著基因工程研究的發(fā)展，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)植物基因進(jìn)行編輯等為植物遺傳育種開辟了更廣闊的空間［47］。藥用植物內(nèi)生菌與宿主植物長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化過(guò)程中，逐漸形成了特有的基因特征、生態(tài)特性，發(fā)掘這些功能基因并加以應(yīng)用將為植物遺傳育種開辟新途徑。此外，由于微生物基因組相對(duì)較小，遺傳操作相對(duì)容易，可為通過(guò)分子生物學(xué)手段進(jìn)行遺傳改良提供先天條件；引入內(nèi)生菌資源與植物聯(lián)合培育在改良植物品種、植物表型方面也發(fā)揮著重要作用。

小麥赤霉病是世界范圍內(nèi)極具毀滅性且防治困難的真菌病害，培育與利用抗病品種是首要選擇。Wang等［48］首次從小麥近緣植物長(zhǎng)穗偃麥草中克隆出抗赤霉病基因Fhb7，研究表明Fhb7是通過(guò)水平基因轉(zhuǎn)移從內(nèi)生真菌轉(zhuǎn)入植物，該研究為解決小麥赤霉病世界性難題找到了“金鑰匙”。郜庭等［49，50］運(yùn)用分子生物學(xué)和植物細(xì)胞工程等技術(shù)，從優(yōu)良濕地植物中挖掘內(nèi)生菌資源，并解析其中功能內(nèi)生菌的金屬耐受性及促生機(jī)制，隨后進(jìn)一步將功能內(nèi)生菌的利用拓展至濕地植物育種方向，為濕地植物品種改良提供了新思路。

1.6 運(yùn)用內(nèi)生菌開發(fā)微生物源綠色防腐保鮮劑或食品添加劑

農(nóng)產(chǎn)品及食品在長(zhǎng)時(shí)間貯藏過(guò)程中容易因發(fā)生氧化或細(xì)菌、真菌等的污染而導(dǎo)致腐敗變質(zhì)，前者可以通過(guò)添加具有抗氧化活性物質(zhì)來(lái)延長(zhǎng)其保質(zhì)期，后者則可以通過(guò)添加具有抗菌活性物質(zhì)作為食品添加劑改善和延長(zhǎng)保質(zhì)期。研究發(fā)現(xiàn)一些藥用植物內(nèi)生菌可以代謝產(chǎn)生許多具有抗氧化活性和抗菌活性的物質(zhì)，將其進(jìn)一步開發(fā)運(yùn)用于微生物源綠色防腐保鮮劑或食品添加劑具有巨大潛力，尤其一些具有類似于益生菌作用的藥用植物內(nèi)生菌，在食品加工與保藏方面更是前景廣闊。

p－酪醇是一種天然抗氧化劑，是所有紅景天屬植物的主要生物活性成分。紅景天是一種稀有瀕危高山植物，被廣泛用作食品和藥物添加劑，其主要有效成分就包括p－酪醇，具有抗高原反應(yīng)、抗衰老、保護(hù)細(xì)胞免受氧化傷害等藥理活性。Cui等［51］研究分離自紅景天植物的內(nèi)生真菌Phialocephala fortiniiRac56，其發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)UPLC／QTOF-MS和1H-NMR分析發(fā)現(xiàn)，該內(nèi)生菌也能夠代謝產(chǎn)生p－酪醇，經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化產(chǎn)量可達(dá)2.002 mg／mL。這一研究結(jié)果為通過(guò)內(nèi)生菌發(fā)酵獲取該天然抗氧化劑提供了新途徑。劉雅莉等［52］從蒺藜內(nèi)生真菌中篩選得到一株抗氧化活性較好的菌株JL13，其發(fā)酵產(chǎn)物具有較強(qiáng)的清除DPPH·自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基的能力，EC50依次為149.67、439.91、514.77μg／mL，結(jié)果表明蒺藜內(nèi)生真菌具有較好的抗氧化潛力和一定的開發(fā)利用價(jià)值。張新國(guó)等［53］從藥用植物烏頭、唐松草、獨(dú)活、車前草、薄荷、澤瀉中分離得到43株內(nèi)生真菌和18株放線菌；抗氧化活性篩選顯示6株內(nèi)生真菌具有較好的抗氧化活性，對(duì)·OH自由基清除率≥70%，其中1株鏈格孢菌屬Alternariasp.DHL－10發(fā)酵液乙酸乙酯提取物對(duì)過(guò)氧化氫的IC50為0.26 mg／mL，顯示了較強(qiáng)的抗氧化活性，總酚和總黃酮含量分別達(dá)到（0.81±0.05）mg／g和（0.84±0.05）mg／g。這一研究結(jié)果為從藥用植物內(nèi)生菌中發(fā)現(xiàn)抗氧化活性物質(zhì)提供了資源。本課題組采用DPPH·自由基清除試驗(yàn)評(píng)價(jià)200余株藥用植物資源內(nèi)生菌抗氧化活性，其中代謝產(chǎn)物具有抗氧化活性菌株近40株，比例達(dá)20%。由此可見，從藥用植物內(nèi)生菌中篩選并開發(fā)微生物源綠色防腐保鮮劑或食品添加劑具有巨大潛力。

除此之外，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生活中，藥用植物內(nèi)生菌資源還可用來(lái)開發(fā)動(dòng)物飼料或添加劑，或是開發(fā)獸藥，用于防治動(dòng)物致病菌和動(dòng)物防疫抗生素的研發(fā)，以及運(yùn)用內(nèi)生菌進(jìn)行黃曲霉素防控、農(nóng)用地膜降解等。由此可見，藥用植物內(nèi)生菌資源在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生活中的研究與應(yīng)用非常廣泛并且具有廣闊前景。

2 總結(jié)與展望

我國(guó)地域廣闊，藥用植物資源極其豐富，植物種類和地域差異等因素使得其中孕育了更為多樣的內(nèi)生菌資源，是一個(gè)亟待開發(fā)的巨大寶庫(kù)。隨著微生物組學(xué)、基因組學(xué)和合成生物學(xué)等新興技術(shù)的興起，內(nèi)生菌研究也得到越來(lái)越多的關(guān)注，并積累了大量的菌種資源。

關(guān)于藥用植物內(nèi)生菌方面的研究仍存在一些問題：理論研究較多，產(chǎn)業(yè)化水平較低，仍需下大力氣，結(jié)合農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生活需求，促進(jìn)內(nèi)生菌理論成果的應(yīng)用轉(zhuǎn)化；藥用植物內(nèi)生菌的研究主要以活性次生代謝產(chǎn)物篩選鑒定居多，其他方面研究仍相對(duì)欠缺，如可用于作物育種的功能基因發(fā)掘和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)功能酶的開發(fā)等；內(nèi)生菌與植物之間存在著密切關(guān)系，兩者間的互作關(guān)系方面研究仍相對(duì)薄弱，內(nèi)生菌在植物生長(zhǎng)過(guò)程中扮演著重要角色，而這一角色如何發(fā)揮作用即藥用植物內(nèi)生菌的微生態(tài)效應(yīng)值得開拓；隨著組學(xué)時(shí)代的到來(lái)，傳統(tǒng)內(nèi)生菌研究主要圍繞單一菌株展開，下一步可結(jié)合組學(xué)技術(shù)開展藥用植物內(nèi)生微生物組方面研究以進(jìn)一步揭示內(nèi)生菌與植物之間的密切聯(lián)系等。

隨著生產(chǎn)和生活水平的提高，人們對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)全鏈條、生活食品全過(guò)程的品質(zhì)追求越來(lái)越高。藥用植物內(nèi)生菌種類豐富、活性廣泛，同時(shí)具有生長(zhǎng)迅速、循環(huán)持續(xù)、綠色生態(tài)等一系列優(yōu)勢(shì)，合理有效開發(fā)并利用藥用植物內(nèi)生菌資源不僅在農(nóng)業(yè)科學(xué)研究方面具有重要的理論意義，而且在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生活中具有廣闊的應(yīng)用價(jià)值。