廉士珍 胡博 張海玲 白雪

（中國農(nóng)業(yè)科學院特產(chǎn)研究所 130112）

基于目前我國動物疫病防控工作經(jīng)驗顯示，免疫是做好動物疫病防控工作的關鍵。近幾年，毛皮動物引起的疫病主要有犬瘟熱及病毒性腸炎等。但在我國部分地區(qū)觀察發(fā)現(xiàn)，毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)中，免疫失敗會導致疫病防控力度下降，使養(yǎng)殖者尋求上門幫助。因此，分析毛皮動物尤其是水貂、狐、貉的新疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀，對主要流行疾病預防有積極作用。新疫苗的研究對毛皮動物養(yǎng)殖不可或缺。

1 水貂新疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀

水貂又稱美洲水鼬（Neovison vison)是一種中型的半水生鼬，喜夜間活動。山東省是中國最大的毛皮產(chǎn)業(yè)，每年在中國生產(chǎn)超過50%的毛皮動物[1]。2011年，山東省飼養(yǎng)水貂數(shù)超過3000萬只，年增長率為20%～40%[2]。

1.1 水貂新病毒PRV及疫苗的研發(fā)

偽狂犬病也稱為Aujeszky病，是由偽狂犬病病毒（PRV)引起的，偽狂犬病病毒是皰疹病毒科中的水痘病毒屬皰疹病毒。PRV在家養(yǎng)和野生動物中引起疾病。除高階靈長類外，PRV可以感染廣泛的家畜和野生動物。非豬動物中PRV感染的標志是感染區(qū)域瘙癢，通常致命的PRV感染的水貂，表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，并在幾天內(nèi)死亡且無瘙癢。

1.2 輪狀病毒疫苗及疫苗的研發(fā)

輪狀病毒疫苗生物研究已取得了突破性的進展。4價恒河猴-人類重組配輪狀病毒疫苗提供了與人類輪狀病毒相對應的4種共同的血清型，在一定程度上能預防48%～68%的輪狀病毒腹瀉，與此同時，還可以預防61%～100%嚴重并發(fā)癥的發(fā)生。在相對比較發(fā)達的國家，此類疫苗已被有效用于減少腹瀉性疾病，另外在發(fā)展中國家，兒童輪狀病毒腹瀉的死亡率極高，由此，采用4價恒河猴-人類重組配輪狀病毒疫苗意義較大，但依舊存在以下幾個問題，首先在發(fā)展中國家，受到感染的患兒年齡偏小，病毒量比較大，若營養(yǎng)不良，一定程度上會影響輪狀病毒疫苗的效果，另外4價疫苗臨床試驗中，對4～6周齡兒童主要采用3組劑量，因為中和抗體反應和疾病預防效果之間的關系不明，一般較難判斷少量的疫苗是否可能達到同樣的效果，對于低劑量的疫苗需要進一步系統(tǒng)化。

1.3 細菌疫苗及研發(fā)

細菌感染性疾病屬于一類嚴重危害人類健康的疾病，臨床用于治療細菌感染性疾病的藥物主要為抗菌藥物，但由于抗菌藥物的濫用，引起細菌耐藥性，尤其是多重耐藥菌迅速增加，使其不能有效控制感染。細菌疫苗能提高易感人群對病原菌的抵抗力。20世紀后期，分子生物學、免疫學及微生物學等相關科學發(fā)展迅猛。近幾年，細菌疫苗有了較大的進展，出現(xiàn)多種現(xiàn)代新型細菌疫苗。如肺炎鏈球菌，肺炎鏈球菌能夠引起支氣管炎、肺炎及中耳炎等。在7價多糖蛋白結合疫苗的基礎上，惠氏公司研發(fā)的13價結合疫苗可以抵御1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F13種血清型的肺炎鏈球菌感染，但其費用較高。如結核分枝桿菌，結核分枝桿菌屬于一種頑固的病原體，耐藥菌株的出現(xiàn)在一定程度上增加了結核病的控制難度?？ń槊鐚儆谀壳拔ㄒ坏慕Y核病疫苗，但此類疫苗僅預防原發(fā)性結核病，研發(fā)新型的疫苗勢在必行。目前，細菌疫苗的廣泛使用有利于人類的身體健康。目前，多種新型細菌疫苗即將上市，在一定程度上為控制多種病原菌引起的感染性疾病提供保障。

1.4 疫苗重要性分析

盡管PRV感染了幾種動物，但據(jù)報道，水貂自然感染PRV的情況很少。2014年9月，中國山東省的一個農(nóng)場在一周內(nèi)有3522只貉皮死亡，其中100%（3522/3522)病死率和87.2%（3522/4028)死亡率。水貂的臨床癥狀是肺炎突然發(fā)作，如綜合征、腹瀉和嗜睡。近年來，水貂PRV感染已成為中國養(yǎng)水貂的難題。Bartha-K61疫苗已在世界范圍內(nèi)用于根除PRV，Bartha-K61疫苗接種提供了針對經(jīng)典PRVSC株感染的完全保護。但自2011年下半年以來，在中國各地已分離出包括HeN1，JS-2012和TJ株在內(nèi)的幾種高毒力PRV株，這些PRV株引起的疾病以神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和豬的高死亡率為特征。在保護性檢測中，Bartha-K61疫苗僅對HeN1，JS-2012和TJ菌株的感染提供了部分保護，這表明Bartha-K61疫苗在中國并未針對新的PRV菌株感染提供有效的保護。從水貂中分離出的PRV株與Bartha-K61疫苗耐藥PRV株在系統(tǒng)發(fā)育上密切相關，這表明疫苗耐藥PRV已在中國廣泛傳播，并可能引起多種動物感染。

據(jù)報道，狂犬病病毒疫苗比FeLV疫苗或聯(lián)合FRCPV疫苗引起更強的淋巴細胞反應。在以往研究中，到第7天，淋巴細胞在大多數(shù)佐劑狂犬病疫苗位點都很突出。到第14天，Rabdomun?和Imrab3?疫苗位點的淋巴細胞數(shù)量適中，與貓中的Purevax疫苗位點相似（水貂或3只水貂中沒有淋巴結樣結構的疫苗)，反之則低在FeLV疫苗接種量。接種疫苗后14d，在Imrab3?，F(xiàn)el-O-VaxLv-K?及合并的病毒性鼻氣管炎-杯狀病毒，全白細胞減少癥疫苗接種的位點，吸入的嗜酸性粒細胞和中性粒細胞的相對數(shù)量沒有差異。但從Fel-O-Vax?和Imrab3?疫苗接種位點吸取的淋巴細胞比從聯(lián)合疫苗位點吸取的淋巴細胞要多?？袢∫呙缃臃N點的吸出物中巨噬細胞的相對數(shù)量也更大，有人提出。淋巴細胞的表型（T輔助細胞1和T輔助細胞2)可能在某些貓的腫瘤形成易感性中起作用。淋巴細胞可能已被佐劑激活的巨噬細胞刺激?？袢】乖部赡茉诩せ盍馨图毎邪l(fā)揮作用。狂犬病疫苗產(chǎn)生的淋巴細胞比白血病疫苗產(chǎn)生的淋巴細胞更多。但這一發(fā)現(xiàn)與以下建議不符，即狂犬病疫苗的致癌作用比白血病疫苗的致癌可能性低。

2 狐新疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀

狐貍是民間對這一類動物的通稱，種類繁多，分北極狐、赤狐、銀黑狐、沙狐等，狐貍是哺乳綱食肉目犬科狐屬下的動物。

我國狐貍養(yǎng)殖技術已經(jīng)比較成熟，目前狐數(shù)目到達500萬只，成為一個新興產(chǎn)業(yè)[3]。由于我國狐貍養(yǎng)殖技術起步較晚，發(fā)展速度快，在發(fā)展道路上會遇到一些始料未及的問題。其中頻繁引種導致流行病的擴大問題是主要需要著手解決的問題之一。這其中就關于狐新疫苗的研發(fā)。犬瘟熱、細小病毒性腸炎、腦炎是最主要的流行疾病，疫苗的研發(fā)也在為杜絕這3大疾病而努力。

3 貉新疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀

10多年來，貓的疫苗相關肉瘤（VAS)被認為是疫苗接種的潛在結果。估計≥0.01%的貓接種疫苗在一種被殺死的佐劑疫苗部位發(fā)展出了腫瘤。一些研究集中在成熟腫瘤的組織學和行為上，這種腫瘤在接種疫苗后3個月到3年就發(fā)展了。VAS通常被診斷為纖維肉瘤，惡性纖維組織細胞瘤或其他間充質(zhì)腫瘤[4]。迄今為止，只有一項研究對組織部位的早期病變進行了組織學檢查。疫苗后病變的早期檢查對了解其早期病情可能很有價值。

目前尚不知道貉的疫苗接種后即刻反應的強度如何與易感動物的腫瘤發(fā)生相關。局部組織反應增強可能表明繼發(fā)于細胞因子和生長因子過度加工的惡性轉化即將發(fā)生。在一只貉中，在帶有神經(jīng)氨酸酶的金絲雀狂犬病附近和非鋁佐劑的白血病病毒疫苗位點附近觀察到具有纖維組織囊和脈管系統(tǒng)的淋巴生發(fā)中心。

過敏性異物肉芽腫具有許多上皮樣細胞，有或沒有巨細胞或干酪樣壞死。輕度吞噬作用或無吞噬作用明顯。到第14天，接受檢查的含有鋁基佐劑的疫苗，這3個物種具有大量的上皮樣巨噬細胞和其他帶有大量吞噬性無定形物質(zhì)的佐劑[5]。罕見的巨細胞在幾個區(qū)域內(nèi)可見，但不一致。鋁顯然在這些小食肉動物中引起混合反應，具有過敏性和非過敏性異物反應。在這3個物種中觀察到對鋁佐劑的局部反應類似于Lever和Schaumberg-Lever對鋁肉瘤的描述：“淋巴濾泡，胞質(zhì)充足的巨噬細胞，一些巨細胞及大面積的嗜酸性壞死。”嗜酸性壞死在這項研究中不一致；僅在少數(shù)情況下可以觀察到。在較早研究中，在狂犬病疫苗接種后2周至2個月檢查的貓科動物病變中始終可見嗜酸性粒細胞壞死。嗜酸性粒細胞壞死的發(fā)展可能需要超過21d的時間。更強的反應可能意味著可降解疫苗成分的快速清除和疫苗誘導的局部刺激，該研究表明，新疫苗對該病毒有良好的抑制作用。

目前我國主要采用貂細小病毒性腸炎滅活疫苗，雖然此疫苗存在一定免疫交叉保護作用，但也存在一些缺點，如交叉保護抗體不高，免疫原性比較差等[6]。有研究篩選出貂細小病毒LN10-1，并對其免疫原性進行研究，結果觀察發(fā)現(xiàn)，LN10-1可能屬于一種新病毒，可以作為針對貂細小病毒性腸炎滅活疫苗的候選株，對于有效控制貂細小病毒性腸炎的發(fā)生具有極其重要的意義。

4 總結

毛皮動物主要是水貂、狐、貉3種動物，在養(yǎng)殖過程中可能有多種疾病，如水貂和貉能受狂犬病毒和肉瘤病毒等病毒的威脅，狐容易感染犬瘟熱、細小病毒性腸炎、腦炎3大流行疾病。預防這些疾病的辦法是新疫苗的研究。水貂對狂犬病毒的預防已有新的相關疫苗，貉對肉瘤病毒的感染來源是貓，在貓感染的基礎上已通過組織切片技術研究出新的疫苗，狐的3大流行疾病的預防也已經(jīng)有相應的措施。

隨著環(huán)境改變，新發(fā)病不斷出現(xiàn)，同時老病不斷變異，嚴重影響毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)，另外，每年多種疑難病癥所引起的死亡率最高可達20%，這是目前毛皮動物養(yǎng)殖的一大障礙。為了積極預防相關新病的出現(xiàn)，積極研發(fā)新型疫苗迫在眉睫。雖然研究的疫苗很多，但要上市銷售還需要很長的時間，應加快疫苗申報步伐。