曲亞南，嚴群，柯軍（通信作者）

1 國家藥品監(jiān)督管理局體外循環(huán)器械重點實驗室·廣州市生物醫(yī)用血液凈化材料研究與開發(fā)重點實驗室 （廣東廣州 510663）；2 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所包裝材料容器檢驗中心（廣東廣州 510663）；3 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所 （廣東廣州 510663）

藥用膠塞是藥品包裝中重要的密封組件，一個完整的橡膠配合體系包括生膠體系、硫化體系、補強填充體系、軟化體系、防老體系、著色體系，其中，補強填充體系中的填充油和炭黑中含有多環(huán)芳烴[1]。由于多環(huán)芳烴是一類可致癌、致畸和致突變性的物質(zhì)，并且廣泛分布于環(huán)境中，《化學藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》明確指出，對多環(huán)芳烴需特別加以關(guān)注。目前，在國內(nèi)藥物相容性領(lǐng)域中有關(guān)多環(huán)芳烴的文獻報道較少，僅見甲苯提取試驗[2]、丙酮/正己烷提取試驗[3]和吸入氣霧劑的遷移試驗[4]。本研究參考《醫(yī)療器械已知可瀝濾物測定方法驗證及確認注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則》，同時根據(jù)《化學藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》確定8種多環(huán)芳烴為檢測對象，主要研究藥用膠塞中多環(huán)芳烴向復(fù)方電解質(zhì)注射液（注射液用鹵化丁基橡膠塞包裝、長期12個月樣品）的遷移情況，通過固相萃取濃縮采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中多環(huán)芳烴的含量，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑耗材

儀器：島津GCMS-QP2010 Ulra氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；島津電子天平AUW220D。

試劑耗材：WondaSepRC18 固相萃取柱（規(guī)格：500 mg/6 ml，生產(chǎn)批號：7C010303）；萘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：D1705066）；菲對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：L1812027）；蒽對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：A1606033）；芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：H1820022）；苯并（a）蒽對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：B1728028）；苯并[e]芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：J1811282）；3，4-苯并芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：A1704012）；苯并[g，h，i]芘對照品（aladdin，生產(chǎn)批號：B1911045）；乙腈、二氯甲烷均為HPLC 級。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為InertCap 5MS/Sil 0.25 mm×30 m×0.25 μm；進樣方式為直接進樣；進樣量為1.0 μl；不分流；進樣口溫度為250 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度為280 ℃；柱溫度程序為初始溫度80 ℃，以20 ℃/min 升溫至220 ℃，再以10 ℃/min 升溫至320 ℃，保持2 min；載氣為氦氣，流速為1.0 ml/min。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式為EI；離子源溫度為230 ℃；測定方式為選擇離子（selected ion monitor，SIM）模式（圖1），選擇離子參數(shù)見表1。

圖1 對照品總離子流圖

表1 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用選擇離子參數(shù)

1.2.3 對照品儲備液制備

分別精密稱取萘、菲、蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并[e]芘、3，4-苯并芘、苯并[g，h，i]芘對照品0.03081、0.03097、0.03602、0.03463、0.03158、0.02801、0.03250、0.03199 g，并于小燒杯中用適量二氯甲烷溶解，充分溶解（可采取超聲溶解）后轉(zhuǎn)移至10 ml 容量瓶中，搖勻、定容后即得各對照品儲備液（注：各對照品分別單獨配制）。

1.2.4 對照品工作液制備

分別精密量取萘、菲、蒽、芘、苯并[e]芘、苯并[g，h，i]芘對照品儲備液各300 μl，苯并（a）蒽、3，4-苯并芘對照品儲備液各600 μl，全部加于1個10 ml 容量瓶中，再用乙腈定容至刻度搖勻，即得對照品工作液A；準確移取1.0 ml 對照品工作液A加于10 ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度搖勻，即得對照品工作液B。

1.2.5 標曲工作液及檢出限檢測用溶液的制備

標曲工作液：標曲工作液共5個濃度點，從濃度點1至濃度點5濃度依次降低；精密移取0.2 ml 對照品工作液A 至10 ml 容量瓶中，分別精密移取1.0、0.5、0.2 ml 對照品工作液B 至10 ml 容量瓶中（3個），用乙腈定容至刻度，搖勻即得濃度點1、2、3、4的標曲工作液；精密移取1.0 ml 配制好的濃度點2的標曲工作液至10 ml 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻即得濃度點5的標曲工作液。

檢出限檢測用溶液：精密移取0.5 ml 配制好的濃度點2的標曲工作液至10 ml 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻即得檢出限檢測用溶液。

1.2.6 供試品制備

供試品的制備方法為固相萃取法，具體步驟：固相萃取柱使用前分別用3 ml 甲醇和3 ml 水活化，活化完成后，分別精密移取復(fù)方電解質(zhì)注射液樣品50 ml，以1.5～2.0 ml/min 的流速通過固相萃取柱，負壓抽濾至完全干燥，分別用2 ml 乙腈及6 ml 二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用二氯甲烷定容至10 ml，供試液經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾后注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行檢測。

1.2.7 加標供試品制備

分別取對照品工作液B 各0.1、0.2、0.4 ml 至50 ml 容量瓶中（3個），取復(fù)方電解質(zhì)注射液（Ⅱ）定容至刻度，將所得溶液經(jīng)固相萃取法（方法同供試品制備）處理后收集洗脫液，再用乙腈和二氯甲烷的混合溶液定容至10 ml，得加標供試品1、加標供試品2、加標供試品3。加標供試品1、加標供試品2、加標供試品3分別平行制備6、3、3份樣品。

2 結(jié)果

2.1 線性范圍

取標曲工作液進行測定，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果表明，各多環(huán)芳烴在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)（R2）≥0.991，見表2。

表2 8種多環(huán)芳烴線性關(guān)系（n=2）

2.2 方法檢出限、方法定量限、平均加標回收率及精密度

根據(jù)加標供試品1色譜圖的信噪比，換算出信噪比為3和10的濃度，分別作為方法檢出限和方法定量限；取所有制備的加標供試品進行檢測，計算得到平均回收率為75.4%～95.8%；取6份加標供試品1進行檢測，得各多環(huán)芳烴含量的RSD為2.73%～11.46%，見表3。

表3 8種多環(huán)芳烴的方法檢出限、方法定量限、平均回收率和精密度

2.3 樣品測定結(jié)果

測定某復(fù)方電解質(zhì)注射液（長期12個月）樣品3批，此3批復(fù)方電解質(zhì)注射液均未檢出多環(huán)芳烴萘、菲、蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并[e]芘、3，4-苯并芘、苯并[g，h，i]芘（圖2）。

圖2 復(fù)方電解質(zhì)注射液樣品中多環(huán)芳烴總離子流圖

3 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中8種多環(huán)芳烴浸出物的方法。相較之前的文獻報道，本研究首次關(guān)注藥物相容性領(lǐng)域多環(huán)芳烴在藥液中的遷移情況。固相萃取濃縮的前處理方法綠色環(huán)保高效，方法驗證結(jié)果表明，該方法選擇性強，可準確檢測復(fù)方電解質(zhì)注射液中8種多環(huán)芳烴浸出物。檢測3批復(fù)方電解質(zhì)注射液結(jié)果顯示，8種多環(huán)芳烴均未檢出。實踐證明，該方法可為藥物相容性領(lǐng)域多環(huán)芳烴遷移試驗的檢測提供參考。