張澤鵬

（重慶市法醫(yī)學(xué)會(huì)司法鑒定所，重慶 400010）

甲基苯丙胺是新型毒品的一種，是我國(guó)濫用最廣泛的毒品之一。由于先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)在我國(guó)的應(yīng)用沒有得到普及，我國(guó)公安機(jī)關(guān)對(duì)吸食甲基苯丙胺人員的生物樣品檢測(cè)方法主要采用免疫層析膠體金標(biāo)技術(shù)，此技術(shù)的最低檢出濃度為1000ng/mL，而且由于此技術(shù)的原理，很容易受到藥物干擾而造成假陽(yáng)性或假陰性，不能滿足禁毒工作對(duì)靈敏度和準(zhǔn)確度的要求。

一般公安機(jī)關(guān)在處理吸毒案件中，血液和尿液是最為常見的兩種生物檢材，血液和尿液的檢測(cè)結(jié)果也可以作為判斷是否吸食毒品的直接證據(jù)，但是影響毒品在人體內(nèi)含量的因素有很多，例如毒品的攝入劑量、毒品的入體途徑和代謝過(guò)程中的個(gè)體差異等等。而且毒品在人體內(nèi)經(jīng)過(guò)代謝，含量會(huì)逐漸降低直至完全消失，這對(duì)公安機(jī)關(guān)打擊吸毒人員、收集吸毒證據(jù)十分不利。而毛發(fā)作為近期才被廣泛使用的生物檢材，可以反映吸毒人員某段較長(zhǎng)時(shí)間攝入毒品的情況，這點(diǎn)是血液和尿液不具備的。

2018年10月31日中華人民共和國(guó)公安部發(fā)布了公禁毒〔2018〕938號(hào)《關(guān)于印發(fā)〈涉毒人員毛發(fā)樣本檢測(cè)規(guī)范〉的通知》[1]，規(guī)定了毛發(fā)中甲基苯丙胺的檢測(cè)閾值為0．2ng/mg，當(dāng)涉毒人員發(fā)根端3厘米以內(nèi)的頭發(fā)中毒品檢出含量高于閾值時(shí)認(rèn)定為陽(yáng)性，且可以認(rèn)定被檢人在提取頭發(fā)之日前6個(gè)月內(nèi)攝入過(guò)毒品。頭發(fā)中的毒品檢驗(yàn)可以反映較長(zhǎng)時(shí)間濫用情況是因?yàn)槎酒吩隗w內(nèi)會(huì)進(jìn)行代謝，當(dāng)吸毒人員吸食了毒品以后，毒品成分會(huì)在體內(nèi)留存一段時(shí)間，這段時(shí)間生長(zhǎng)出來(lái)的頭發(fā)中就會(huì)含有毒品成分，在頭發(fā)生長(zhǎng)過(guò)程中毛干形成時(shí)，這些毒品就會(huì)固定在毛干中隨之生長(zhǎng)，固定在毛干中之后毒品就僅有微弱的擴(kuò)散作用，毒品成分會(huì)十分緩慢地向上下兩端的毛發(fā)擴(kuò)散。人的頭發(fā)一個(gè)月生長(zhǎng)0．8-1．2厘米，分段檢驗(yàn)毛發(fā)可以大致判斷出被檢人在什么時(shí)間攝入過(guò)毒品，這也是毛發(fā)中毒品檢驗(yàn)最大的優(yōu)勢(shì)所在。

目前行業(yè)內(nèi)毛發(fā)中甲基苯丙胺提取常用酸水解、堿水解、甲醇超聲提取三種方法[2]，本文主要分析此三種方法對(duì)毛發(fā)中甲基苯丙胺的檢測(cè)結(jié)果的影響，從而為今后的工作提供參考。

一、前處理方法

（一）酸水解

SF/Z JD0107004-2016《生物檢材中苯丙胺類興奮劑、哌替啶和氯胺酮的測(cè)定》中 10．1．3．3．11項(xiàng)中的“毛發(fā)的酸水解”方法。

（二）堿水解

F/Z JD0107004-2016《生物檢材中苯丙胺類興奮劑、哌替啶和氯胺酮的測(cè)定》中 10．1．3．3．11項(xiàng)中的“毛發(fā)的堿水解”方法。[3]

（三）甲醇超聲提取

SF/Z JD0107025——2018《毛發(fā)中15種毒品及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法》中6．1 項(xiàng)樣品前處理方法。[4]

二、原理

化學(xué)物質(zhì)有“相似相溶原理”，即結(jié)構(gòu)或者極性相似的兩種化學(xué)物質(zhì)可以互溶，甲基苯丙胺易溶于有機(jī)溶劑、難溶于水的特點(diǎn)，分別使用酸消化、堿消化和物理研磨三種方法將目標(biāo)物甲基苯丙胺從毛發(fā)內(nèi)部釋放出來(lái)，并在堿性條件下用有機(jī)溶劑乙醚或甲醇將甲基苯丙胺從毛發(fā)中提取出來(lái)，并將提取液濃縮后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的多反映檢測(cè)（MRM）模式檢測(cè)。通過(guò)對(duì)留樣的甲基苯丙胺呈陽(yáng)性的毛發(fā)進(jìn)行酸水解、堿水解和甲醇超聲三種不同提取方式的對(duì)照分析，綜合研究不同提取方式對(duì)毛發(fā)中甲基苯丙胺檢測(cè)的影響。

三、主要儀器

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（SHIMADZU LCMS-8050）；色譜柱（Waters C18柱，100mm×2．1mm，1．8μm）；組織研磨儀（力辰LC-TG-24）；超聲波清洗機(jī)（SYU-7-200T）。

（一）樣品前處理

取甲基苯丙胺為陽(yáng)性的留樣毛發(fā)適量，裝在15mL的離心管中，依次用水和丙酮震蕩清洗兩次，晾干后剪成1mm段，供檢。

1．酸水解：各稱取20mg的留樣毛發(fā)，分為三組，分別加入1mL0．1mol/L鹽酸溶液浸潤(rùn)，45℃水浴溶解12-15小時(shí)，取出后加入10%的氫氧化鈉溶液調(diào)至PH＞11。毛發(fā)水解液用3mL乙醚提取，渦旋混合、離心分層，轉(zhuǎn)移乙醚層至另一離心管中，約60℃水浴中揮干。殘留物用100μL的甲醇溶解，上機(jī)分析。

2．堿水解：各稱取20mg的留樣毛發(fā)，分為三組，分別加入1mL10%的氫氧化鈉溶液80℃水浴水解5-10min，取出。毛發(fā)水解液用3mL乙醚提取，渦旋混合、離心分層，轉(zhuǎn)移乙醚層至另一離心管中，約60℃水浴中揮干。殘留物用100μL的甲醇溶解，上機(jī)分析。

3．甲醇超聲提取：取適量的留樣毛發(fā)，置冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀。各稱取20mg留樣毛發(fā)粉末，分為三組，各加入1mL甲醇，冰浴超聲30min，離心取上清液于60℃水浴空氣流下吹干。殘留物用100μL甲醇復(fù)溶，上機(jī)分析。

（二）檢測(cè)方法

使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（SHIMADZU LCMS-8050），采用多反監(jiān)測(cè)模式（MRM）對(duì)毛發(fā)提取液進(jìn)行檢驗(yàn)；色譜柱使用Waters C18柱（100mm×2．1mm，1．8μm）；柱溫：室溫；碰撞氣：氬氣（Ar），純度＞99．999%，流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：20mmol/mL乙酸銨和0．1%甲酸緩沖液；流速：400μL/min，進(jìn)樣量2μL；離子源：電噴霧電離-正電子模式（ESI+）；碰撞氣、氣簾氣、霧化氣、輔助加熱氣均為高純氮?dú)?；去簇電壓、碰撞能量等電壓值均?yōu)化到最優(yōu)靈敏度。

甲基苯丙胺的母離子/子離子對(duì)為150．1和119．1、150．1和91．1，通過(guò)多反監(jiān)測(cè)模式（MRM）檢驗(yàn)甲基苯丙胺的這兩個(gè)母離子/子離子對(duì)，來(lái)獲取檢驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果。

（三）提取效率的比較

本文提取效率比較的基本原理采用外標(biāo)法的原理進(jìn)行比較，使用三個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)中150．1/91．1母離子/子離子峰面積的平均值作為對(duì)比參數(shù)，來(lái)比較三種提取方式對(duì)毛發(fā)中甲基苯丙胺檢測(cè)的提取效率，其中甲醇超聲提取法150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：97642557；堿水解的150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：43075336；酸水解的150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：10283065。從以上數(shù)據(jù)中可以看出，甲醇超聲提取法檢測(cè)的甲基苯丙胺的特征離子對(duì)色譜峰的峰面積大約是堿水解提取法的2．3倍、大約是酸水解提取法的9．5倍。

四、結(jié)論

甲基苯丙胺是堿性化合物，在堿性條件下可以溶于有機(jī)溶劑，而在酸性條件下，甲基苯丙胺會(huì)形成鹽，而溶于水中，毛發(fā)酸水解后將水解液再調(diào)堿性用乙醚提取，多了一個(gè)提取環(huán)節(jié)，降低了甲基苯丙胺的回收率，所以使用堿水解的方式用乙醚提取效率要高于酸水解。而甲醇超聲提取方法是最直接的提取法，將毛發(fā)研磨成粉末后將毛干中的甲基苯丙胺釋放出來(lái)直接使用甲醇超聲提取，所以提取效率最高。由以上可以得出結(jié)論，甲醇超聲提取在這三種提取方式中提取效率最高，堿水解提取法效率僅次于甲醇超聲提取法，而酸水解的提取效率最低。