奧東塔娜　岱青　烏漢其木格

摘要 目的：研究不同炮制手段對丹參所含丹酚酸B醫(yī)治胃炎患者的影響。方法：首先以不同的炮制手段完成丹參的制備，獲取炒丹參、丹參炭、米炒丹參、酒丹參、醋丹參，之后通過高效液相色譜法對上述各種丹參炮制品內(nèi)的丹酚酸B與多糖含量進行測定。結果：酒丹參的丹酚酸B含量位居首位，依次為醋丹參屈、生丹參、米炒丹參、炒丹參、丹參炭。不同炮制手段的丹參中多糖含量按照從多到少分別是酒丹參、醋丹參、米炒丹參、生丹參、炒丹參、丹參炭。結論：酒丹參與醋丹參中的丹酚酸B含量較高，其醫(yī)治胃炎的重要機制可能和活血化瘀、抗炎鎮(zhèn)痛以及促進胃酸的分泌有關。此外，酒丹參和醋丹參中的丹參多糖含量相對較高，值得臨床重點關注。

關鍵詞 丹參;丹酚酸B;炮制手段;胃炎;治療機制

Abstract Objective：To study the effect of different processing methods on salvianolic acid B contained in salvia miltiorrhiza and Its mechanism in gastritis patients.Methods：Salvia miltiorrhiza was prepared with different processing methods.Salvia miltiorrhiza toasted，salvia miltiorrhiza toasted to black，salvia miltiorrhiza toasted with rice，salvia miltiorrhiza liquor and salvia miltiorrhiza vinegar were obtained.Then the salvianolic acid B and polysaccharide content in salvia miltiorrhiza products were determined using HPLC.Results：The salvianolic acid B content of salvia miltiorrhiza liquor ranked first，and the rest in turn are salvia miltiorrhiza vinegar，raw salvia miltiorrhiza，salvia miltiorrhiza toasted with rice，salvia miltiorrhiza toasted and salvia miltiorrhiza toasted to black.The contents of polysaccharides in salvia miltiorrhiza were as follows：wine salvia miltiorrhiza，vinegar salvia miltiorrhiza，rice fried salvia miltiorrhiza，raw salvia miltiorrhiza，fried salvia miltiorrhiza and salvia miltiorrhiza charcoal.Conclusion：The salvianolic acid B content of salvia miltiorrhiza liquor and vinegar is relatively high.Its mechanism of treating gastritis may associated with promoting blood circulation，removing blood stasis，anti-inflammatory and analgesic functions，and promoting the secretion of stomach acid.In addition，they also have high content of polysaccharides，which may attract further clinical research.

Keywords Salvia miltiorrhiza; Salvianolic acid B; Means of processing; Gastritis; Treatment mechanism

中圖分類號：R284;R573文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.18.005

中醫(yī)學認為丹參這一中藥材具有通經(jīng)止痛和活血祛瘀等重要功效[1-2]。藥理學證實，丹參能優(yōu)化心臟狀態(tài)，并可改善血液流變學，同時對于脂質代謝，以及血管內(nèi)平滑肌細胞的有關增殖、遷移及調(diào)控等過程中均發(fā)揮著不同程度的作用，對心血管類疾病的治療意義重大[3-5]。丹參的藥用炮制方式比較多，如酒丹參及醋丹參等，不同的炮制方式所獲得的丹參炮制品藥效存在顯著差異[6-8]。因此，尋找一類科學有效的炮制方式十分必要，亦為提升丹參藥物價值的重要途徑。丹參酮Ⅱ值、丹酚酸以及丹參素等是丹參重要組成成分之一，其中丹酚酸B的含量將直接影響丹參的治療效用[9-11]。鑒于此，本研究通過探討不同炮制手段對丹參所含丹酚酸B的作用及醫(yī)治胃炎的機制并進行分析，旨在為臨床丹參的炮制提供一種相對較好的方式?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1）電子天平（Sartorius公司，德國，型號：BSA822;2）高效液相色譜儀（島津公司，日本，型號：Prominence LC-20A）;3）薄層色譜儀（GAMAG公司，瑞士，型號：REPROSTAR3）;4）十萬分之一電子天平（Sartorius公司，德國，型號：R200D）;系統(tǒng)連接器（GAMAG公司，瑞士，型號：GMB-20A）;定量點樣器（GAMAG公司，瑞士，型號：NANOMAT4）;TV雙光束紫外可見分光光度計（北京譜析通用儀器有限公司，型號：tu1901）;進樣閥（美國羅丹妮公司，型號：7725i），二極管陣列檢測器（日本島津公司，型號：SPD-M20A），柱溫箱（日本島津公司，型號：GTO-10AS），微量進樣器（日本島津公司，型號：GCMS），LC solution工作軟件（日本島津公司，型號：LC solution）。

1.2 試劑 丹酚酸B對照品購自中國藥品生物制品鑒定所，批號：11562-200907。甲醇為色譜純甲醇（國藥集團上?；瘜W試劑公司，貨號：021103），水為超純水（上海礫鼎公司，貨號：21134），乙腈（北京邁瑞達公司，貨號：M157-1L）均為分析純。

1.3 分析樣品 丹參原材料均購自蘇州市天靈中藥飲片廠，批號：02159，所有丹參均與2010年的《中華人民共和國藥典》中所制定的相關質檢合格標準相符。

2 方法與結果

2.1 丹參制備 1）炒丹參：使用文火將其炒至紫褐色，且呈現(xiàn)焦斑后，放涼即可獲得。2）丹參炭：以武火炒至焦黑色，噴灑少量涼水，取出放涼即得。3）米炒丹參：以水濕潤鍋，將米撒貼于鍋中，將其加熱冒煙，添加丹參，而后持續(xù)翻動，待丹參由紅色轉為深紫色，即可出鍋篩除米粒，常規(guī)冷卻即可。此過程丹參片與米的質量比為5∶1。4）酒丹參：將200 g生丹參，與20 g白酒拌勻，而后待其悶透，置于鍋中以文火炒干，放涼即得。5）醋丹參：將200 g生丹參，與25 g醋拌勻，悶透，放置在鍋內(nèi)以文火炒干，取出放涼即得。

2.2 HPLC檢測丹酚酸B含量

2.2.1 色譜條件 流動性：乙腈與0.1%磷酸混合液，前者與后者比值為21∶79;流速：1.0 mL/mL。色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。柱溫：室溫。波長：286 nm。

2.2.2 對照品的溶液配制 將12.65 mg丹酚酸B對照品，置50 mL量瓶中，添入甲醇到刻度，并充分搖勻，獲得濃度是253 mg/L的丹酚酸B對照品藥物溶液。

2.2.3 供試品溶液的配制 取供試品0.500 g，加濃度為75%的甲醇溶液總計25 mL，通過封口膜實施密封，再給予0.5 h的超聲干預及冷卻。而后以0.45 μm型微孔濾膜實施濾過，最后獲得供試品溶液。憑借上述色譜條件能夠得到丹酚酸B的色譜圖和丹參樣品的色譜圖。見圖1～2。

2.2.4 線性關系考察 將丹酚酸B的對照品以1、2、4、8、16、32 μL分別進樣，計算峰面積相關積分值。并以進樣量設置為橫坐標，色譜峰面積設置為縱坐標，進行回歸分析，得到回歸方程y=234 476.4x+26 514.3（r=1.000），所得結果顯示丹酚酸B為0.252～9.098 μg，線性關系良好。

2.2.5 精密度測定 將10 μL丹酚酸B對照品，遵照上述色譜條件常規(guī)進樣，得到丹酚酸B的峰面積，計算相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）為0.65%。

2.2.6 重復性試驗 依據(jù)上述的供試品制作步驟，實施丹參70%的乙醇回流提取物的有關供試品溶液制作，總計5份，溶液中所含丹酚酸B的平均值是6.254 8%，RSD是2.12%，表明此法重復性較好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取10 μL的丹酚酸B對照品以及供試品溶液，在0、2、4、8、16 h分別進樣，實施峰面積測定，其中RSD分別是0.73%及0.88%。表明丹酚酸B對照品同供試品溶液于16 h內(nèi)的穩(wěn)定性相對較佳。

2.2.8 加樣回收率 采集上述5份丹參70%乙醇回流提取物藥粉，每份為0.050 0 g，置25 mL量瓶中，分別加入5、5、7.5、7.5、10 mL的濃度是10.75 mg/L的丹酚酸B對照品，添加甲醇到刻度，通過上述步驟實施供試品溶液配制，獲得5份樣品平均加樣的回收率。

2.2.9 樣品測定 提取20 μL的對照品溶液以及相關供試品溶液，分別進樣并測定，統(tǒng)計樣品中丹酚酸B的含量。

2.3 丹參多糖含量測定

2.3.1 丹參多糖提取 丹參樣品各10 g，粉碎并添加100 mL純化水，再靜置1 h，待物料徹底潤濕后，超聲提取3次，30 min/次，過濾。按照相同的條件重復提取2次，混合提取液35 mL，通過減壓濃縮處理后獲得70 mL溶液，隨后加入630 mL的無水乙醇沉淀后干燥，即得丹參粗多糖。

2.3.2 標準曲線繪制 將50 mg的葡萄糖置于500 mL的量瓶內(nèi)，獲得濃度0.1 mg/mL的標準溶液。再依次吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL溶液放入試管內(nèi)，添入純化水至2 mL，加4%的苯酚1 mL后搖勻。加入5 mL濃硫酸，搖勻，置于40 ℃水浴加熱0.5 h，室溫放涼，于490 nm下算出吸光度。將標準品濃度作為橫坐標，將吸光度記為縱坐標，繪制“吸光度-濃度”的有關標準曲線。獲得回歸方程r=0.999 8，說明多糖于40～120 μg/mL內(nèi)線性關系良好。

2.3.3 多糖含量測定 將上述獲取的干燥多糖精密稱取100 mg至100 mL量瓶內(nèi)，加入純化水定容到刻度。加入10 mL上述溶液于100 mL量瓶中，加純化水定容至刻度，獲取0.1 mg/mL的樣品液。量取2 mL樣品液放置試管內(nèi)，添加6 mL的0.4%蒽酮硫酸液?；靹虿⒂?0硫水浴下加熱0.5 h，室溫放涼，于490 nm下算出吸光度。丹參多糖含量=干燥粗多糖質量×純度/丹參藥材的質量×100%。

2.4 丹參藥材所含丹酚酸B的加樣回收率的檢測結果 丹參藥材平均加樣回收率分別是98.87%，RSD是1.33%。見表1。

2.5 差異性炮制手段所得丹參內(nèi)丹酚酸B的含量酒丹參所含的丹酚酸B的含量最多，依次為醋丹參、生丹參、米炒丹參、炒丹參、丹參炭。見表2。

2.6 不同炮制手段的丹參中多糖含量測定結果 不同炮制手段的丹參中多糖含量按照從多到少的順序分別為酒丹參、醋丹參、米炒丹參、生丹參、炒丹參、丹參炭。見表3。

3 討論

丹酚酸B主要是有1個分子的咖啡酸與3個分子的丹參素縮合而成，具有2個羧基，且以差異性鹽的形式存在，其屬于丹參水溶性成分的重要組成部分之一，是目前臨床上被廣泛用于反映丹參有效成分含量的一個敏感指標[12-14]。隨著近年來相關研究的日益深入，越來越多的學者發(fā)現(xiàn)丹酚酸B作為丹參的藥物物質基礎，存在明顯的抗氧化和抗血栓形成，以及細胞保護和抗凝血等重要功效，對機體內(nèi)的心血管系統(tǒng)和腎、肝臟等器官具有一定的保護作用，同時可發(fā)揮抗腫瘤作用[15-16]。丹酚酸B因有酯鍵，從而使得其于水溶液中具有一定的不穩(wěn)定性，且在煎煮、濃縮過程中會促使少部分的丹酚酸水解生成自草酸以及丹參素，更有部分丹參素會在酸性的條件下轉變成迷迭香酸[17-18]。相關研究報道表明，丹酚酸B對于溫度具有較高的敏感性，伴隨著加熱方式的差異，丹參提取液內(nèi)的丹酚酸B含量會出現(xiàn)一定的差別，且含量隨溫度變化的規(guī)律和動力學方程相符[19-20]。由此可見，選擇一種有效的炮制方式對提高丹參提取液中的丹酚酸B含量具有極其重要的意義[21-23]。

本研究結果表明，酒丹參的丹酚酸B含量最多，其次是醋丹、生丹參、米炒丹參、炒丹參、丹參炭。這和其他研究結果相似[24-26]，提示酒丹參和醋丹參所含的丹酚酸B含量水平最高，存在丹參炮制品相關制備的首選潛力。分析原因，丹酚酸B對溫度的敏感性較高，而加熱方式對丹酚酸B的影響程度存在明顯差異。與此同時，丹酚酸B的含量可受pH值和提取溶液劑，以及有關緩沖鹽的濃度等因素影響，當其在1

綜上所述，酒制丹參及醋制丹參中的丹酚酸B、多糖含量較高，從而可有效提高臨床醫(yī)治腎炎的效果，值得臨床重點關注。

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（2020-01-07收稿 責任編輯：楊覺雄）