高平瑤，李文學(xué)

延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林延吉 133000

華支睪吸蟲病是一種常見的人畜共患病，主要由吸蟲寄生于哺乳動(dòng)物或人類的肝臟、膽管以及膽囊內(nèi)而引起的。華支睪吸蟲最終宿主一般是哺乳動(dòng)物，淡水螺是華支睪吸蟲的第一中間宿主，多種淡水魚和淡水蝦是華支睪吸蟲的第二中間宿主。該病容易引起肝臟等器官病變，造成一定程度上的危害，在東亞地區(qū)廣泛流行，該病現(xiàn)已成為中國、韓國等國家重點(diǎn)防治的寄生蟲病之一。

目前，傳統(tǒng)的病原學(xué)檢查方法是臨床上較為常用的診斷華支睪吸蟲病的檢測(cè)方法。傳統(tǒng)的鏡檢法由于華支睪吸蟲排卵具有周期性且蟲卵較小，容易漏診，且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，需要有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員，不適合在大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查中應(yīng)用，吸蟲在蟲卵形態(tài)上也受到不同程度的的影響。而協(xié)同凝集試驗(yàn)，由于其操作步驟復(fù)雜繁多，也不是很適合于臨床診斷的檢測(cè)。綜合分析上述所列舉的幾種情況，實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為這些方法已經(jīng)不能適應(yīng)當(dāng)前該病的診斷及防治需求。

所以想要完成這個(gè)試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為只有具有高敏感性和高特異性血清學(xué)診斷方法，才能避免那些傳統(tǒng)病原學(xué)檢查方法的不足之處。而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(簡稱ELISA)正具有這個(gè)特點(diǎn)，操作簡單、快速、不需要特殊的儀器設(shè)備，適用于大量檢查，血液樣本用量很小，判斷結(jié)果是很容易的，現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用方便，可用于對(duì)犬華支睪吸蟲病陽性血清的檢測(cè)，與犬其他相似相近血清均不發(fā)生反應(yīng)，已應(yīng)用于華支睪吸蟲病的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查，主要是檢測(cè)病患血清中的特異性抗體。

人或動(dòng)物在感染華支睪吸蟲病之后，體內(nèi)的肝臟器官以及膽道內(nèi)，首先會(huì)產(chǎn)生一系列對(duì)身體及組織起到負(fù)面作用的病理變化，具體可能表現(xiàn)為膽結(jié)石、膽囊炎、膽管上皮增生或是膽管炎等，嚴(yán)重者也極有可能會(huì)演變成肝硬化、膽管上皮癌和肝細(xì)胞癌等病癥，病狀十分嚴(yán)重。因此準(zhǔn)確快速的對(duì)華支睪吸蟲病進(jìn)行診斷和治療不僅對(duì)疾病的防控起到積極作用，同時(shí)對(duì)社會(huì)具有長遠(yuǎn)意義。有效控制該病需要系統(tǒng)、完整的流行病學(xué)調(diào)查資料，但至今尚未見該地區(qū)犬華支睪吸蟲病的流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告，為此開展了本調(diào)查研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品收集

本次試驗(yàn)在汪清縣福興鎮(zhèn)按常規(guī)方法采集83份犬血液（其中公狗37只，母狗46只），分離血清，保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要儀器和試劑

96孔板半自動(dòng)酶標(biāo)儀，購自陜西西安賽默飛世爾制版廠。

犬華支睪吸蟲血清抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購自廣州創(chuàng)侖生物制造公司。

1.2 方法

1.2.1 將裝有試驗(yàn)用板條的鋁箔袋在室溫下恒溫20 min后，從中取出所需數(shù)量板條，剩余板條用自封袋密封好后放回4 ℃環(huán)境下保存。

1.2.2 在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置一對(duì)陰性對(duì)照孔和陽性對(duì)照孔，再設(shè)置一對(duì)陰性樣本孔和陽性樣本孔，隨后向陰性對(duì)照孔和陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照50 μL和陽性對(duì)照各 50 μL。

1.2.3 將10 μL待測(cè)樣本加入待測(cè)樣本孔，再加入40 μL 樣本稀釋液。

1.2.4 隨后在陰性對(duì)照孔和陽性對(duì)照孔每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 μL，再向陰性樣本孔和陽性樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 μL，將反應(yīng)孔使用封板膜封住，令其在37 ℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。

1.2.5 舍棄液體，使用吸水紙將其拍干，再用洗滌液加滿各孔，靜置1 min后，甩去其中洗滌液，再使用吸水紙將其拍干，反復(fù)重復(fù)上述操作5次至洗板潔凈。

1.2.6 取底物50 μL加入A孔中，再另取底物50 μL加入B孔中，避免陽光直射，將樣本孔在37 ℃下孵育15 min。

1.2.7 向A孔加入終止液50 μL，再向B孔加入終止液各50 μL，等待15 min后，在450 nm波長處測(cè)定A、B兩孔的0D值，并記錄其數(shù)據(jù)結(jié)果。

2 結(jié)果

按照說明書步驟對(duì)汪清縣福興鎮(zhèn)83份犬血清待檢樣本進(jìn)行了華支睪吸蟲血清抗體的檢測(cè)。

2.1 性別結(jié)果

在83份待檢血清中，公犬血清37份，其中被感染動(dòng)物血清13份，感染率為35.1%；母犬血清46份，其中被感染動(dòng)物血清15份，感染率為32.6%，實(shí)驗(yàn)得出犬感染華支睪吸蟲病與性別概率無關(guān)，結(jié)果見表1。

表1 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情況及性別分布

2.2 年齡結(jié)果

在83份待檢血清中，幼犬（年齡不滿一歲）血清24份，其中被感染動(dòng)物血清15份，感染率為62.5%；成犬（年齡大于等于一歲）血清59份，其中被感染動(dòng)物血清13份，感染率為22.0%，實(shí)驗(yàn)得出幼犬感染華支睪吸蟲概率遠(yuǎn)大于成犬，該情況可能與幼犬年齡小，免疫力弱有關(guān)，結(jié)果見表2。

表2 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情況及年齡分布

2.3 總體結(jié)果

在83份待檢血清中，被感染動(dòng)物血清28份，感染率為33.7%，陽性檢出率為33.7%，實(shí)驗(yàn)表明該地區(qū)1/3犬類患有華支睪吸蟲病，該情況可能與家養(yǎng)犬類喂食魚蝦等有關(guān)，結(jié)果見表3。

表3 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情總調(diào)查

3 分析與討論

華支睪吸蟲病的診斷，主要依靠分辨檢查蟲卵，但在感染度較輕的情況下，常因糞便內(nèi)蟲卵少，加以蟲卵體積很小，糞樣鏡檢易漏診。近年來，隨著酶聯(lián)免疫吸附診斷、同位素標(biāo)記診斷、膠體金診斷等技術(shù)和方法的應(yīng)用，華支睪吸蟲病的流行病學(xué)診斷取得較大進(jìn)展。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以得出結(jié)論，犬類感染華支睪吸蟲病的概率與性別無關(guān)，而相對(duì)于成年犬來說，幼犬更容易患病，該情況可能與幼犬年齡小，自身免疫力弱有關(guān)。本次試驗(yàn)中同樣也分析了其他人的調(diào)查結(jié)果。唐劍棟（2006）調(diào)查中表明，犬平均每只感染23條華支睪吸蟲，而貓平均每只感染64條，貓的感染率要比犬的高得多，原因可能是貓更愛吃生魚，除了捕食水池的小魚外，還經(jīng)常吞食人丟棄的魚頭、鰓、鰭等器官，故在疫區(qū)中感染普遍；全炳昭（2010）對(duì)46只可疑病犬尸體進(jìn)行剖檢，其中19只病犬尸體膽囊和肝臟內(nèi)含有華支睪吸蟲（7～30條/只），感染率約為41.3%。存在這種差異的原因不僅是因?yàn)樵囼?yàn)中所采用的檢測(cè)方法不同，同時(shí)也與動(dòng)物是否圈養(yǎng)、是否喂養(yǎng)魚類等有關(guān)。

華支睪吸蟲病作為一種常見的人獸共患寄生蟲病，其流行范圍十分廣泛，該病宿主種類數(shù)量不少，并且因?yàn)樽陨碛衅渥匀灰咴吹貐^(qū)，所以如果想要有效地預(yù)防華支睪吸蟲病的產(chǎn)生，需要對(duì)其流行的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行防控。首先從源頭遏制，控制其傳染源頭的產(chǎn)生，避免各類動(dòng)物受到病情的感染，堅(jiān)決不喂食動(dòng)物生魚蝦等。其次如果出現(xiàn)緊急感染問題，相關(guān)地方部門要及時(shí)進(jìn)行治療，病情嚴(yán)重時(shí)可以采取撲滅、捕殺等措施。同時(shí)要加強(qiáng)監(jiān)控排泄物的處理途徑，防止蟲卵入水，排泄物的無害化處理是切斷病情傳播途徑的重要一環(huán)，只有這樣才能有效地預(yù)防華支睪吸蟲病的流行。當(dāng)然也應(yīng)當(dāng)適當(dāng)控制第一中間宿主，可以采用藥物滅螺等方法，以切斷華支睪吸蟲病的最終流行環(huán)節(jié)。