劉本濤， 袁彩英， 陳 睿,2， 梁水月， 黃嘉詠， 嚴(yán)振碩， 梁 燕， 霍麗妮*

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530222；3.廣西醫(yī)科大學(xué)，廣西 南寧 530021)

冠心病即冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(Coronary atherosclerotic heart disease，CHD)，是由冠狀動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化導(dǎo)致血管腔狹窄或閉塞引起的心肌缺血缺氧或壞死性心臟病[1]。據(jù)《中國(guó)心血管病報(bào)告2018》[2]顯示，中國(guó)心血管病患病率處于持續(xù)增長(zhǎng)階段，推算現(xiàn)患病人數(shù)2.9億，其中CHD患病人數(shù)達(dá)1 100萬(wàn)，并且CHD死亡率呈不斷上升趨勢(shì)。目前CHD的治療主要以西藥為主，但都存在不同程度的毒副作用，較西藥而言中醫(yī)藥治療CHD具有一定優(yōu)勢(shì)，尤其是中藥復(fù)方與西藥的聯(lián)合應(yīng)用，臨床療效顯著[3-4]。

近年來(lái)，中藥絞股藍(lán)及其復(fù)方在輔助治療CHD方面取得了顯著成效[5-7]。絞股藍(lán)GynostemmaPentaphyllum(Thunb.)Makino又名七葉膽，為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤本攀緣植物?，F(xiàn)代研究表明，絞股藍(lán)中主要化學(xué)成分為皂苷、多糖、黃酮類(lèi)等，具有降血糖、降血脂、保肝、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心腦血管等作用[8-10]。絞股藍(lán)治療CHD雖然具有顯著療效，但其作用的分子機(jī)制尚不明確，還有待深入研究。因此，本研究利用基因表達(dá)綜合數(shù)據(jù)庫(kù)(Gene expression omnibus，GEO)對(duì)CHD相關(guān)差異表達(dá)基因進(jìn)行分析并將其作為疾病靶標(biāo)，同時(shí)借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探索絞股藍(lán)治療CHD的作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路，以闡明絞股藍(lán)治療CHD的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)和數(shù)據(jù)處理工具 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.Ncbi.nlm.nih.gov/geo/)、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)、PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)、Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.swisstargetprediction.ch/)、STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//string-db.org/)、DAVID6.8數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//David.Ncifcrf.gov/)、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.kegg.jp)、PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.rcsb.org/pdb/home/home.do)、Venny2.1.0在線(xiàn)平臺(tái)(https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)；Cytoscape3.7.1軟件、ChemDraw Professional 16.0軟件、SYBYL 2.0分子對(duì)接軟件。

1.2 基因芯片及差異表達(dá)基因篩選 在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中以“coronary atherosclerotic heart disease”為關(guān)鍵詞檢索與CHD相關(guān)的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)，并將“Organism”設(shè)置為“Homosapiens”來(lái)查找符合條件的基因芯片數(shù)據(jù)集；采用GEO數(shù)據(jù)庫(kù)提供的Analyze with GEO2R功能分析所選基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)，以P<0.05且|logFC|≥1.5為條件篩選差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes，DEGs)，獲取與CHD相關(guān)的靶基因。

1.3 絞股藍(lán)活性成分收集及潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取絞股藍(lán)已知化學(xué)成分，并篩選出口服生物利用度(Oral bioavailability，OB)≥30%、類(lèi)藥性(Drug-likeness，DL)≥0.18的化合物作為候選活性成分[11]；在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索各候選成分或利用ChemDraw Professional 16.0軟件繪制其結(jié)構(gòu)式，獲取各化合物的SMILE化學(xué)式并上傳至Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)，從而預(yù)測(cè)各成分潛在作用靶標(biāo)；利用在線(xiàn)平臺(tái)Venny2.1.0將上述獲得的疾病靶基因與絞股藍(lán)候選活性成分潛在作用靶標(biāo)進(jìn)行匹配，得到絞股藍(lán)治療CHD的作用靶點(diǎn)及對(duì)應(yīng)活性成分。

1.4 活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 將絞股藍(lán)治療CHD的活性成分及其作用靶點(diǎn)篩選結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape3.7.1軟件，構(gòu)建絞股藍(lán)治療CHD活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)(node)代表成分及作用靶點(diǎn)，邊(edge)代表成分與靶點(diǎn)相互作用關(guān)系。利用軟件Network Analyzer功能對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，根據(jù)度值(degree)設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小及顏色，以介數(shù)中心性(betweenness centrality)反映邊的粗細(xì)。

1.5 蛋白互作分析 采用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)絞股藍(lán)治療CHD的作用靶標(biāo)之間的相互作用進(jìn)行分析，獲取蛋白相互作用(Protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)。保存蛋白相互作用結(jié)果文件，從中獲取node1、node2 和combined score相關(guān)信息，利用Cytoscape3.7.1構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)靶點(diǎn)的degree值，利用degree值排名靠前的靶點(diǎn)建立核心靶蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，以degree值大小設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小及顏色，邊的粗細(xì)與combine score相關(guān)聯(lián)。

1.6 GO基因功能注釋和KEGG通路富集分析 將篩選所得絞股藍(lán)治療CHD潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行基因本體(Gene ontology，GO)功能注釋和京都基因與基因百科全書(shū)(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析，設(shè)定閾值P<0.05，靶基因名稱(chēng)列表為人，根據(jù)涉及靶點(diǎn)數(shù)目的多少篩選排名靠前的生物過(guò)程及通路。

1.7 靶點(diǎn)通路分析 將絞股藍(lán)治療CHD的靶標(biāo)蛋白導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)KEGG Mapper工具的Search Pathway功能獲取相關(guān)通路網(wǎng)絡(luò)，限定物種為人，篩選排名靠前的幾條通路進(jìn)行整合，繪制絞股藍(lán)治療CHD的最終通路圖。

1.8 分子對(duì)接驗(yàn)證活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn) 根據(jù)上述分析結(jié)果，選擇絞股藍(lán)主要活性成分及其核心靶點(diǎn)作為分子對(duì)接的配體和受體，經(jīng)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并下載受體蛋白及其共結(jié)晶，利用對(duì)接軟件SYBYL對(duì)受體蛋白和配體小分子進(jìn)行優(yōu)化，刪除水分子，添加極性氫原子，構(gòu)建活性口袋并進(jìn)行分子對(duì)接，預(yù)測(cè)兩者的結(jié)合性能，從而驗(yàn)證本研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

2.1 CHD差異表達(dá)基因 從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選獲取到基因芯片GSE19339，此數(shù)據(jù)集為GPL570芯片平臺(tái)采集CHD患者血栓源性白細(xì)胞的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)。包括4個(gè)正常樣本GSM480386～GSM480389和4個(gè)病患樣本GSM480382～GSM480385。該芯片共檢測(cè)54 675個(gè)基因，較完整覆蓋人類(lèi)基因組。利用GEO2R對(duì)全部樣本進(jìn)行分析，以P<0.05、|logFC|≥1.5為篩選條件，共得到1 577個(gè)DEGs，其中上調(diào)基因834個(gè)，下調(diào)基因743個(gè)，篩選所得DEGs即為CHD相關(guān)靶基因，見(jiàn)圖1、表1。

表1 排名前30的上調(diào)和下調(diào)表達(dá)基因

圖1 排名前30的上調(diào)和下調(diào)表達(dá)基因熱圖

2.2 絞股藍(lán)治療CHD活性成分及作用靶標(biāo) 從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中收集到24個(gè)OB≥30%、DL≥0.18的候選活性成分，經(jīng)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)，共獲取潛在作用靶點(diǎn)1 120個(gè)，刪除重復(fù)項(xiàng)后得到活性成分對(duì)應(yīng)的328個(gè)潛在靶，將其與1 577個(gè)疾病靶基因進(jìn)行比對(duì)取交集，得到43個(gè)共同靶標(biāo)(圖2)，并且24個(gè)候選活性成分均包含在內(nèi)，即為絞股藍(lán)治療CHD的作用靶點(diǎn)及對(duì)應(yīng)活性成分，見(jiàn)表2，可知主要包括黃酮、植物甾醇、皂苷，可能是絞股藍(lán)發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

表2 絞股藍(lán)治療CHD活性成分及對(duì)應(yīng)靶標(biāo)

圖2 CHD-絞股藍(lán)活性成分潛在靶標(biāo)韋恩圖

2.3 絞股藍(lán)治療CHD活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用Cytoscape3.7.1軟件構(gòu)建絞股藍(lán)治療CHD活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)(圖3)，包括67個(gè)節(jié)點(diǎn)(24個(gè)活性成分、43個(gè)作用靶點(diǎn))和168條邊，其中圓形節(jié)點(diǎn)代表活性成分，V字形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，邊代表成分與靶點(diǎn)相互作用關(guān)系。節(jié)點(diǎn)的degree值代表網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)與節(jié)點(diǎn)相連的數(shù)目，其值越高，節(jié)點(diǎn)越大，顏色越深。由此可知，MOL009969、MOL009986、MOL009973、MOL009888、MOL000098、MOL004355、MOL000351、MOL000338、MOL000359、MOL005440、MOL000953等活性成分的degree值較大，可能是絞股藍(lán)發(fā)揮藥效的主要成分；雌激素受體β(Estrogen receptor β，ESR2)、維生素D受體(Vitamin D receptor，VDR)、維甲酸相關(guān)孤核受體α(Nuclear receptor ROR-α，RORA)、前列腺素E合成酶(Prostaglandin E synthase，PTGES)、酪氨酸激酶受體(Vascular endothelial growth factor receptor 2，KDR)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ，PPARG)、細(xì)胞周期蛋白B(Dual specificity phosphatase Cdc25B，CDC25B)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(Vascular endothelial growth factor A，VEGFA)、受體型酪氨酸蛋白磷酸酶F(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F，PTPRF)、乙酰肝素酶(Heparanase，HPSE)、?；o酶A去飽和酶(Acyl-CoA desaturase，SCD)、脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty acid binding protein，F(xiàn)ABP)等靶點(diǎn)分別與多個(gè)活性成分關(guān)聯(lián)，可能是絞股藍(lán)活性成分治療CHD的核心靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)中同一活性成分可作用于不同靶點(diǎn)，同一靶點(diǎn)可與多個(gè)成分對(duì)應(yīng)，提示絞股藍(lán)治療CHD具有多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的特點(diǎn)。

圖3 絞股藍(lán)治療CHD活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn) 將43個(gè)潛在靶標(biāo)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，置信度設(shè)為>0.4，得到PPI網(wǎng)絡(luò)(圖4)。利用Cytoscape3.7.1軟件計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)靶點(diǎn)的degree值，篩選degree值排名前十的靶點(diǎn)構(gòu)建核心靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)(圖5)，圖中節(jié)點(diǎn)大小代表該靶點(diǎn)作用強(qiáng)度，degree值越高，節(jié)點(diǎn)越大，對(duì)應(yīng)顏色越深；邊的粗細(xì)代表靶點(diǎn)間的關(guān)聯(lián)程度，combine score值越大，靶點(diǎn)間關(guān)聯(lián)度越高，邊越粗。由此可知，核心靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)中包括VEGFA、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL6)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase 2，MMP2)、PPARG、骨髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(Tyrosine-protein kinase Src，SRC)、KDR、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(Hepatocyte growth factor receptor，MET)、FABP5、精氨酸酶-1(Arginase-1，ARG1)等重要的CHD相關(guān)靶標(biāo)蛋白，可能在絞股藍(lán)治療CHD中發(fā)揮主要作用,而且作用機(jī)制復(fù)雜多樣，非單一蛋白靶標(biāo)作用而成。

圖4 絞股藍(lán)治療CHD潛在靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)

圖5 絞股藍(lán)治療CHD核心靶點(diǎn)互作網(wǎng)絡(luò)

2.5 GO基因功能注釋和KEGG通路富集分析 將43個(gè)潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO基因功能注釋和KEGG通路富集分析，根據(jù)分析結(jié)果設(shè)定P<0.05，共映射到顯著富集的27條GO條目，包括生物過(guò)程(Biological process，BP)、細(xì)胞組分(Cellular component，CC)和分子功能(Molecular function，MF)3個(gè)模塊(圖6)。其中，BP主要涉及氨基酸磷酸化、趨化作用、細(xì)胞趨化正調(diào)控、細(xì)胞分裂、呼吸急促正調(diào)控等方面；CC主要涉及質(zhì)膜胞質(zhì)側(cè)外源成分；MF主要涉及ATP結(jié)合、蛋白激酶活性、視黃醇X受體結(jié)合、鋅離子結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)活性、肝素結(jié)合、碳酸鹽脫水酶活性等方面。

圖6 GO基因功能注釋

KEGG通路富集分析(圖7)顯示，絞股藍(lán)治療CHD的潛在藥效靶點(diǎn)主要涉及癌蛋白多糖信號(hào)通路(proteoglycans in cancer)、癌癥信號(hào)通路(pathways in cancer)、磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信號(hào)通路(PI3K-Akt signaling pathway)、PPAR信號(hào)通路(PPAR signaling pathway)、黏著斑(focal adhesion)、黏附連接(adherens junction)、Rap1信號(hào)通路(Rap1 signaling pathway)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路(VEGF signaling pathway)等多條信號(hào)通路，相關(guān)靶基因包括FGFR1、HPSE、VEGFA、MET、MMP2、SRC、KDR、SCD、PPARG、FABP3、FABP4，F(xiàn)ABP5、IL6、BCL2等。

圖7 KEGG通路富集分析

2.6 通路圖繪制 將絞股藍(lán)治療CHD的43個(gè)潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行通路分析，經(jīng)KEGG Mapper工具獲取相關(guān)通路注釋?zhuān)Y選排名靠前的幾條通路進(jìn)行整合繪制最終通路圖(圖8)，圖中通路涉及靶點(diǎn)標(biāo)記為淺藍(lán)色，絞股藍(lán)治療CHD的靶點(diǎn)標(biāo)記為淺綠色。由此可知，主要涉及pathways in cancer、focal adhesion、PI3K-Akt、Rap1、MAPK、VEGF、Ras、PPAR等信號(hào)通路，出現(xiàn)18個(gè)絞股藍(lán)治療CHD的靶點(diǎn)，RTK、MET、FAK、SRC、VEGF等可在多條通路中發(fā)揮作用，表明絞股藍(lán)治療CHD的作用機(jī)制主要與上述靶點(diǎn)和通路相關(guān)，各靶點(diǎn)、通路之間相互協(xié)調(diào)，共同參與藥理作用的發(fā)揮。

圖8 絞股藍(lán)治療CHD通路圖

2.7 分子對(duì)接結(jié)果 選擇主要活性成分及其對(duì)應(yīng)核心靶點(diǎn)作為配體和受體進(jìn)行分子對(duì)接，根據(jù)對(duì)接得分大小判斷活性成分與靶標(biāo)蛋白的結(jié)合性能，一般分值在6以上表明兩者結(jié)合活性較好，分值越高則結(jié)合越穩(wěn)定[12]。如表3所示，大多數(shù)活性成分與其核心靶點(diǎn)有著較好的結(jié)合活性，部分成分與靶點(diǎn)對(duì)接得分較低，可能是由于絞股藍(lán)皂苷類(lèi)成分分子量較大，與靶蛋白的原始小分子配體存在一定差異所致。圖9為絞股藍(lán)皂苷XXXV_qt與PPARG(6K0T)的分子對(duì)接示意圖，可知兩者主要通過(guò)疏水接觸產(chǎn)生相互作用。

表3 絞股藍(lán)治療CHD活性成分與其關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接得分值

圖9 絞股藍(lán)皂苷XXXV_qt與PPARG(6K0T)的分子對(duì)接

3 討論

冠心病(CHD)在中醫(yī)學(xué)中可歸入“心痛”“胸痹”等范疇，其病位在心，并涉及肝、脾、腎，兼有痰濁、血瘀、氣滯、寒凝等病變[13]。絞股藍(lán)性味甘寒、微苦，歸心、脾、肺、腎經(jīng)，具有養(yǎng)心安神、健脾利胃、清肺化痰、補(bǔ)氣養(yǎng)陰之功[10]。因此，絞股藍(lán)在CHD的臨床診療中日益受到關(guān)注。本文借助GEO數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)CHD的差異表達(dá)基因即疾病靶點(diǎn)進(jìn)行篩選，同時(shí)利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，根據(jù)多成分、多靶點(diǎn)共同作用的研究思路，對(duì)絞股藍(lán)治療CHD的活性成分及其作用的分子機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，黃酮、植物甾醇及皂苷類(lèi)成分是絞股藍(lán)治療CHD的活性成分，主要包括槲皮素、谷甾醇、波菜甾醇、絞股藍(lán)皂苷等。槲皮素具有抗心肌缺血及缺血再灌注損傷、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善冠狀動(dòng)脈血循環(huán)等多種藥理作用[14-16]；植物甾醇具有顯著的降血脂活性，改善血脂異常可延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程，降低CHD的風(fēng)險(xiǎn)[17]；絞股藍(lán)皂苷具有神經(jīng)保護(hù)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)糖脂代謝等作用[18-20]，表明本研究結(jié)果具有一定可靠性。

通過(guò)對(duì)絞股藍(lán)治療CHD活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)及PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，推斷ESR2、RORA、VDR、KDR、PTGES、PPARG、CDC25B、PTPRF、VEGFA、HPSE、FABP、SCD、IL6、MMP2、MPO、SRC、MET、ARG1等是絞股藍(lán)治療CHD的核心靶點(diǎn)。Mansur等[21]認(rèn)為ESR2是CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。RORA可通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、參與炎性反應(yīng)等機(jī)制使TNF-α、IL-6等炎癥因子釋放減少[22]。艾思迪等[23]認(rèn)為VDR表達(dá)降低可能是冠心病的潛在危險(xiǎn)因素。KDR是血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF上具有高親和力的酪氨酸受體,主要介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,引起血管通透性升高，活化的KDR能激活PI3K,發(fā)揮維持細(xì)胞存活效應(yīng)[24]。VEGFA是至今發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)、特異性最高的VEGF亞型中最重要的一個(gè)因子,具有增加微、小靜脈血管的通透性、促使血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖及誘導(dǎo)血管生成再生等作用[25]。Scheller等[26]發(fā)現(xiàn)，IL-6表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈嚴(yán)重病變的發(fā)生率呈正相關(guān)，上述結(jié)論進(jìn)一步證實(shí)了本研究所得絞股藍(lán)治療CHD核心靶點(diǎn)的準(zhǔn)確性。

經(jīng)GO基因功能注釋?zhuān)l(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)活性成分對(duì)氨基酸磷酸化、趨化作用、細(xì)胞趨化正調(diào)控、細(xì)胞分裂、呼吸急促正調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程有一定影響，并在絞股藍(lán)治療CHD所涉及的作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路中有所體現(xiàn)。通過(guò)KEGG富集分析，證實(shí)絞股藍(lán)對(duì)癌蛋白多糖信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、PPAR信號(hào)通路、黏著斑、Rap1信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路等多條CHD相關(guān)信號(hào)通路以及VEGFA、MET、MMP2、SRC、KDR、PPARG、FABP、IL6等相關(guān)靶點(diǎn)均具有調(diào)控作用。PI3K-Akt信號(hào)通路[27]、VEGF信號(hào)通路[28]、PPAR信號(hào)通路[29]、黏著斑激酶介導(dǎo)信號(hào)通路[30]等是CHD發(fā)生發(fā)展中的重要通路，本研究結(jié)果表明絞股藍(lán)可能通過(guò)上述通路發(fā)揮對(duì)CHD的治療作用，這對(duì)絞股藍(lán)治療CHD的作用機(jī)制研究具有一定意義。

綜上所述，本研究借助GEO數(shù)據(jù)庫(kù)探尋CHD相關(guān)靶基因，為CHD的深入研究和臨床治療提供了新思路；利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘絞股藍(lán)治療CHD活性成分，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及通路富集闡述了活性成分與作用靶點(diǎn)和通路之間的聯(lián)系，揭示了絞股藍(lán)治療CHD的潛在分子機(jī)制，為絞股藍(lán)的臨床應(yīng)用及深入研究提供了理論基礎(chǔ)；分子對(duì)接結(jié)果顯示絞股藍(lán)活性成分與核心靶點(diǎn)之間結(jié)合性能良好，驗(yàn)證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的準(zhǔn)確性。本文研究結(jié)果雖得到相關(guān)文獻(xiàn)佐證，但未進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，后續(xù)可結(jié)合本研究結(jié)果對(duì)絞股藍(lán)治療CHD的作用機(jī)制進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，使其藥理作用機(jī)制更加明確。