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基于供試液多維使用的炎可寧丸鑒別優(yōu)化研究

2021-10-25 06:29羅暉明聶平丁野程雪清余彬彬
藥品評(píng)價(jià) 2021年16期
關(guān)鍵詞:薄層黃柏黃連

羅暉明,聶平,丁野,程雪清,余彬彬

1.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院(湖南藥用輔料檢驗(yàn)檢測(cè)中心),湖南 長(zhǎng)沙 410001;2.湖南省藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心,湖南 長(zhǎng)沙 410001;3.天地恒一制藥股份有限公司,湖南 長(zhǎng)沙 410331

炎可寧丸處方由黃柏、黃連、黃芩、大黃、板藍(lán)根五味組成,可清熱瀉火,消炎止痢,常用于急性扁桃體炎、急性尿道感染等[1]。炎可寧丸上市后因療效顯著,被廣大醫(yī)務(wù)工作者和病人認(rèn)可,產(chǎn)品銷售規(guī)模逐年提高?,F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)YBZ1229592005-2009Z[1]包括大黃的顯微特征鑒別,黃連、黃柏的化學(xué)反應(yīng)鑒別,大黃的薄層色譜鑒別,以及黃芩苷的含量測(cè)定。對(duì)于薄層色譜鑒別,國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)(第四版)明確要求,盡可能采取一個(gè)供試液多項(xiàng)多維鑒別使用[2],以達(dá)到保護(hù)環(huán)境、節(jié)約資源、簡(jiǎn)便實(shí)用的目的。本研究重點(diǎn)針對(duì)這一要求,盡量共用供試液制備方法,對(duì)炎可寧丸處方各味藥進(jìn)行TLC法鑒別研究,助力該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

分析天平(瑞士METTLER,AE240型);烘箱(德國(guó)BINDER,F(xiàn)ED 240型);超聲儀(寧波新芝,SB-12DTD型,600 W,40 KHz);硅膠G板(德國(guó)Merck,10 cm×20 cm);試劑均為分析純(南京化學(xué)試劑股份有限公司);純化水。

1.2 材料

炎可寧丸(某企業(yè),批號(hào)170501,180703,190102,規(guī)格:每袋裝3 g);陰性樣品分別按炎可寧丸處方自行制備;對(duì)照品:鹽酸黃柏堿(批號(hào)111895-201805,純度94.9%)、鹽酸小檗堿(批號(hào)110713-202015,純度85.9%)、鹽酸巴馬?。ㄅ?hào)110732-201913,純度85.7%)、大黃酸(批號(hào)110757-201607,純度99.3%)、黃芩苷(批號(hào)110715-201821,純度94.2%)、靛玉紅(批號(hào)110717-201805,純度99.6%);對(duì)照藥材:黃連(批號(hào)121752-201801)、大黃(批號(hào)120902-201912)、黃芩(批號(hào)120955-201810),以上對(duì)照物質(zhì)全部購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃柏的TLC鑒別[3-6]

取4.5 g炎可寧丸,研細(xì),加甲醇20 mL,超聲30 min,濾過(guò),取濾液10 mL濃縮至1 mL(留下其余濾液備用),作為供試品溶液。按處方稱取除黃柏外的其他味藥,按制備工藝處理后,同供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。另取鹽酸黃柏堿對(duì)照品,用甲醇為溶劑制成1 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn),取5 μL供試品溶液、2 μL對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上,將薄層板放在用氨飽和的展開缸里,用三氯甲烷-甲醇-水(30∶15∶4)的下層液上行展開后,噴以稀碘化鉍鉀試液。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,供試品色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺黃柏的陰性對(duì)照沒(méi)有產(chǎn)生干擾,見圖1。

圖1 黃柏薄層色譜圖

2.2 黃連的TLC鑒別[3,7]

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液1 mL,加在干法裝柱的中性氧化鋁柱(100~200目,5 g,內(nèi)徑1.5 cm)上,用50 mL無(wú)水乙醇洗脫,洗脫液蒸干后的殘?jiān)? mL無(wú)水乙醇溶解,作為供試品溶液。按處方稱取除黃連、黃柏外的其他味藥,按制備工藝處理后,同供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。取0.1 g黃連對(duì)照藥材,加20 mL甲醇浸泡5 min后,超聲30 min,過(guò)濾,將濾液作為對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對(duì)照品,分別用甲醇為溶劑,制成0.2 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn),以上四種溶液各取5 μL,分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上,將薄層板放在用濃氨試液預(yù)飽和20 min的展開缸里,用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(6∶3∶2∶2∶1)上行展開后,365 nm下檢視。在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,供試品顯四個(gè)以上相同顏色的熒光斑點(diǎn);在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。缺黃連、黃柏的陰性對(duì)照沒(méi)有產(chǎn)生干擾,詳見圖2。

圖2 黃連薄層色譜圖

2.3 大黃的薄層色譜鑒別[3,8]

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除大黃外的其他味藥,按制備工藝處理后,同供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。取0.1 g大黃對(duì)照藥材,加20 mL甲醇浸泡5 min后,同法處理成對(duì)照藥材溶液。再取大黃酸對(duì)照品,用三氯甲烷為溶劑制成l mg/mL的溶液,作為對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn),吸取5~10 μL供試品溶液、5 μL對(duì)照藥材溶液、5 μL對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上,將薄層板放在展開缸里,用石油醚(30~60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液上行展開后,365 nm下檢視。在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,供試品顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn);在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn);氨熏,日光下顯相同的紅色斑點(diǎn)。缺大黃的陰性對(duì)照沒(méi)有產(chǎn)生干擾。詳見圖3。

圖3 大黃薄層色譜圖:A.365 nm;B.日光

2.4 黃芩的薄層色譜鑒別[3]

取“2.1”項(xiàng)下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除黃芩外的其他味藥,按制備工藝處理后,同供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。另取1 g黃芩對(duì)照藥材,加20 mL甲醇浸泡5 min后,同法處理成對(duì)照藥材溶液。再取黃芩苷對(duì)照品,用甲醇為溶劑,制成0.5 mg/mL的溶液,作為對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn),以上三種溶液各取5 μL,分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上,將薄層板放在展開缸里,用乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)上行展開后,噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,供試品顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺黃芩的陰性對(duì)照沒(méi)有產(chǎn)生干擾。詳見圖4。

圖4 黃芩薄層色譜圖

2.5 板藍(lán)根的薄層色譜鑒別[3,9-11]

取10 g炎可寧丸,研細(xì),加水40 mL,水浴加熱回流10 min,立即冷卻,離心5 min(轉(zhuǎn)速5 000 r/min),取上清液加熱近沸,加入吲哚醌0.05 g,加熱回流20 min后,加入18%鹽酸溶液5 mL,再加熱回流40 min,立即冷卻,離心5 min(轉(zhuǎn)速5 000 r/min),棄去上清液,殘?jiān)尤燃淄?0 mL,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液加1%氫氧化鈉溶液洗滌2次,20 mL/min,棄去氫氧化鈉液,三氯甲烷濃縮液至1 mL,作為供試品溶液。按處方稱取除板藍(lán)根外的其他味藥,按制備工藝處理后,同供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。另取靛玉紅對(duì)照品,用三氯甲烷為溶劑,制成50 μg/mL的溶液,作為對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn),吸取20 μL供試品溶液、5 μL對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)在同一塊硅膠G板上,將薄層板放在展開缸里,用甲苯-乙酸乙酯-丙酮(5∶4∶1)上行展開。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,供試品顯相同顏色的斑點(diǎn)。缺板藍(lán)根的陰性對(duì)照沒(méi)有產(chǎn)生干擾。詳見圖5。

3 討論

藥品的療效源自藥品的質(zhì)量,藥品的質(zhì)量又源自生產(chǎn)工藝和原材料。炎可寧丸的制備工藝比較復(fù)雜,處方中雖然只有五味藥材,但卻包含了大黃、黃連生粉入藥、板藍(lán)根、黃芩水提取后入藥、黃柏水提醇沉后入藥三條路線。目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅僅只收載了黃柏、黃連的化學(xué)鑒別、大黃的薄層色譜鑒別,難以全面控制炎可寧丸的產(chǎn)品質(zhì)量。

中藥的質(zhì)量控制研究具有階段性和漸進(jìn)性[11]。隨著中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,中藥的生產(chǎn)和質(zhì)量以及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)存在的問(wèn)題越來(lái)越引起人們的關(guān)注。炎可寧丸處方中各味藥材的研究日趨深入,為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了充分條件。本研究基于供試液多維使用的考慮,僅僅只取樣一次,共用部分供試液即可以實(shí)現(xiàn)黃柏、黃連、黃芩、大黃的鑒別,大大簡(jiǎn)化了操作,提升了效率,減少了樣品的消耗。

板藍(lán)根中含有制劑中其他四味藥材沒(méi)有的靛玉紅成分,但由于其中含量太少,而且炎可寧丸中該味藥經(jīng)水煎煮提取工藝致使靛玉紅的提取率較低,直接利用其作為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制難度較大。但板藍(lán)根藥材中含有大量的靛苷成分,其適合水提工藝,靛苷水解后會(huì)生成氧化吲哚,而在特定條件下氧化吲哚能與吲哚醌生成靛玉紅[12],利用此線路生成的靛玉紅與板藍(lán)根自身含有的靛玉紅可以在鑒別中作為指標(biāo)成分對(duì)板藍(lán)根進(jìn)行控制。

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