孟慶輝，梁倩蓉，姚高華，黃元飛，陳小明，吳洪喜

（浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，浙江 杭州 310023）

美洲鰣（Alosa sapidissima），又稱美國鰣魚，隸屬于鯡形總目（Clupeomorpha），鯡形目（Clupeiformes），鯡科（Clupeidae），西鯡屬（Alosa），主要分布于北美洲大西洋沿岸的河流和海洋[1]。美國鰣魚與我國的長江鰣魚同屬一個亞科，外形相似，且同屬廣溫溯河性洄游魚類，由于其肉質(zhì)細嫩鮮美、營養(yǎng)價值高、養(yǎng)殖效益好，自2003 年引入中國后，養(yǎng)殖區(qū)域逐步拓展，深受養(yǎng)殖戶和消費者的喜愛。

溫室水泥池循環(huán)水養(yǎng)殖美國鰣魚具有自動化程度高、養(yǎng)殖產(chǎn)量高、風(fēng)險環(huán)境更加可控、生長快、環(huán)境友好等優(yōu)勢，特別適合鰣魚等名貴魚類的高密度生態(tài)養(yǎng)殖。但同時也存在投資大、管理技術(shù)要求高等缺陷。隨著養(yǎng)殖區(qū)域的不斷擴大及養(yǎng)殖密度的不斷提高，美國鰣魚病害也逐漸增多?，F(xiàn)結(jié)合連續(xù)3 年的美國鰣魚養(yǎng)殖研究與經(jīng)驗，通過對一例室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖的美國鰣魚細菌病進行病原菌鑒定和藥敏試驗，并結(jié)合實踐防控經(jīng)驗實施科學(xué)精準用藥，以期為養(yǎng)殖戶規(guī)避養(yǎng)殖風(fēng)險，提高成活率與養(yǎng)殖效益，促進美國鰣魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供依據(jù)。

1 研究方法

1.1 養(yǎng)殖環(huán)境

美國鰣魚采用水泥池溫室大棚循環(huán)水養(yǎng)殖，水溫常年控制為 18～27 ℃，養(yǎng)殖密度13 kg/m3，采用2.2 kW 羅茨鼓風(fēng)機加液氧補充增氧，采用3 臺5.5 kW空氣能溫控系統(tǒng)，養(yǎng)殖尾水經(jīng)微濾機過濾、沉淀曝氣、紫外線消毒、微生物凈化后循環(huán)使用。

1.2 試驗材料

1.2.1 主要試劑與耗材 法國梅里埃VITEK 2 compact 全自動細菌鑒定儀（含鑒定試劑卡），腦心浸液培養(yǎng)基（BHI）、瓊脂粉購于北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，DNA 提取試劑盒、PCR 試劑、引物購于上海生工生物技術(shù)有限公司，藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2.2 試驗動物 美國鰣魚采集于浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站蕭山基地。采集病魚8 尾，氧氣包包裝后運送實驗室進行分離培養(yǎng)實驗。病魚規(guī)格：800～1 100 g。

1.3 試驗方法

1.3.1 細菌分離與鑒定 常規(guī)無菌操作，取肝臟、脾、腎臟以及其他相關(guān)病灶組織，在牛腦心浸出液固體平板上劃線接種，28 ℃培養(yǎng)過夜。挑取優(yōu)勢菌分離純化后，采用VITEK 2 Compact 全自動細菌檢定儀進行鑒定，并保存在含20%甘油-牛腦心浸出液中，置于-80 ℃冰箱。

1.3.2 藥敏試驗 將純化后的菌落用無菌生理鹽水調(diào)菌濃度至 1×107～1×108CFU/mL，按藥敏板說明稀釋后加入96 孔藥敏板，在28 ℃的環(huán)境下培養(yǎng)24～28 h[2]。根據(jù)培養(yǎng)后96 孔藥敏板的濁度讀板，確定恩諾沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素、氟甲喹、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶等8 種藥物對菌株的最低抑菌濃度（MIC 值）。

2 結(jié)果

2.1 外觀癥狀及剖檢變化

生病鰣魚的癥狀及病理變化見圖 1（a）（b）（c）。生病的鰣魚攝食減少，冬季發(fā)病時頭部發(fā)紅充血，鰭條充血，鰓蓋和鰭條處同時感染水霉，肝臟糜爛，腸道出血嚴重且易斷，腸道內(nèi)黏膜壞死，腸壁薄，腸胃無實物；夏季發(fā)病時頭部出血，眼眶充血嚴重，肝臟腫大，腸道出血，發(fā)病初期病灶呈打印狀，尾柄和背鰭處潰爛嚴重，鱗片下肌肉嚴重充血或壞死。

圖1 生病鰣魚癥狀及病理變化

2.2 細菌分離及菌落形態(tài)觀察

從病魚肝臟、脾臟、腸道、體表病灶等部位分離得到一種外觀特征比較一致的優(yōu)勢菌落，呈圓形、邊緣光滑，中央突起，顏色以肉色、灰白色為主。菌株革蘭氏染色為陰性，鏡檢形態(tài)為短桿菌，極端單鞭毛，沒有芽孢和莢膜。

2.3 生化鑒定

基于VITEK 2 的64 個生化反應(yīng)的分析提示，分離株呈L-阿拉伯醇、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖、蔗糖、D-甘露醇陰性，葡萄糖發(fā)酵、H2S、D-麥芽糖、D-葡萄糖、賴氨酸脫羧酶陽性，鑒定結(jié)果為嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila），主要為溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌，其具體生理、生化特性見表1。

表1 分離菌株的生理性狀①

續(xù)表

2.4 藥敏試驗

取分離株開展藥敏試驗，對恩諾沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、鹽酸多四環(huán)素、氟甲喹、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶等進行藥敏試驗，結(jié)果顯示分離菌主要為氣單胞菌屬（溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌）。藥敏試驗表明，主要對恩諾沙星、鹽酸多四環(huán)素、甲砜霉素、氟苯尼考等4 種抗生素較為敏感，對硫酸新霉素、氟甲喹敏感性一般，對磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶不敏感，結(jié)果見表2。

表2 MIC 藥敏試驗結(jié)果① 103 μg/L

3 討論

美國鰣魚屬于溯河洄游性魚類，終生處于集群快速游動狀態(tài)[3]。美國鰣魚是具有強烈集群攝食行為的物種，在飼料投喂時會相互沖撞，導(dǎo)致鱗片脫落[4]，且美國鰣魚是“惜鱗魚”，鱗片脫落會引起表皮潰爛，極易誘發(fā)氣單胞菌感染等疾病。

氣單胞菌廣泛分布于自然界，在水源、土壤和人類糞便中均能分離出來，是引起魚類運動性氣單胞菌敗血癥的主要病原體[5]。水體中魚類感染氣單胞菌會引起出血、內(nèi)臟腫脹、腹水等癥狀，嚴重時可引起魚類大量死亡，是淡水養(yǎng)殖業(yè)的主要病原菌之一[6]。

通過對本基地工廠化養(yǎng)殖美國鰣魚病魚的鑒定分析，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致鰣魚病害發(fā)生的主要原因是嗜水氣單胞菌，包括溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌等。嗜水氣單胞菌病害是美國鰣魚病害發(fā)生頻率非常高的疾病種類之一。宮子慧等[7]、王淑嫻等[8]、閻華等[6]、楊移斌等[9]都分離鑒定出鰣魚體內(nèi)不同氣單胞菌，而關(guān)于其他養(yǎng)殖疾病的報道比較少見。氣單胞菌對美國鰣魚養(yǎng)殖的危害較大，發(fā)病頻率也比較高。

藥敏試驗對水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中細菌性疾病的防治和抗生素的規(guī)范科學(xué)使用至關(guān)重要。本研究檢測了8 種常見漁用抗生素對鰣魚分離菌株的最低抑菌濃度，分析了病原菌對不同抗生素的敏感性。結(jié)果表明，菌株高度敏感的藥物有恩諾沙星、鹽酸多四環(huán)素、甲砜霉素、氟苯尼考等4 種，這四種藥物可作為此例鰣魚細菌病的用藥首選，同時根據(jù)MIC 值可計算推導(dǎo)安全有效的抗生素使用量。本研究可為工廠化養(yǎng)殖美國鰣魚過程中嗜水氣單胞菌疾病防治提供參考。

4 防控建議

4.1 養(yǎng)殖環(huán)境控制

4.1.1 氧氣 由于美國鰣魚終生都處于集群快速遷移、躲避敵害追逐的狀態(tài)，正常情況下也呈現(xiàn)出日夜不停游動的狀態(tài)，缺氧就成了美國鰣魚的第一“殺手”[4]。工廠化養(yǎng)殖過程中，除正常配備羅茨鼓風(fēng)機增氧設(shè)施外，還需要額外配備液氧，以防止缺氧。

4.1.2 溫度 鰣魚對于溫度要求高，水溫過高或過低都會造成鰣魚停止攝食、水霉病高發(fā)等。工廠化養(yǎng)殖需配備空氣能溫控系統(tǒng)，既能促進鰣魚適溫快速生長，減少養(yǎng)殖時間過長帶來的風(fēng)險，又能減少疾病的發(fā)生。

4.1.3 飼養(yǎng) 投喂方法不當(dāng)容易造成鰣魚體表受傷，對于攝食期間鰣魚快速游動沖撞引發(fā)的鱗片脫落與表皮潰爛等問題，飼料拋灑面積要足夠大，減少魚體沖突。

4.1.4 水質(zhì) 保持優(yōu)良水質(zhì)是美國鰣魚養(yǎng)殖成功的關(guān)鍵。工廠化養(yǎng)殖過程中，雖增加了微濾機過濾、沉淀曝氣、紫外線消毒、微生物凈化等步驟，仍然需要根據(jù)水質(zhì)情況每1～2 d 吸污一次，保持水質(zhì)清新。

4.2 預(yù)防

堅持“早預(yù)防、重治更重防”。鰣魚苗種入池前，先用漂白粉對工廠化水泥池進行徹底消毒；魚苗入池時，使用2%的食鹽水對魚體浸洗5～10 min。在對一定規(guī)格鰣魚進行分池飼養(yǎng)、拉網(wǎng)訓(xùn)練的過程中，也需要進行食鹽水浸洗消毒。

日常養(yǎng)殖管理過程中，要做到早晚巡池，及時了解鰣魚游動狀態(tài)和體表損傷情況。定時監(jiān)測溶解氧、氨氮、亞硝酸鹽、溫度等指標(biāo)，當(dāng)溶解氧低于5 mg/L 時，及時啟動液氧增氧設(shè)施；溫度超過30 ℃，及時啟動空氣能控溫系統(tǒng)降溫并增氧；根據(jù)水色和氨氮指標(biāo)等，及時清污，保持水質(zhì)清新。遇到溶解氧降低到4 mg/L 以下、氨氮含量升高到3 mg/L以上等情況，除開啟液氧增氧設(shè)施外，還需及時換水，通過一邊放、一邊加，盡早發(fā)現(xiàn)、大量換水等方式，及時采取措施保持水質(zhì)良好。

如遇到鰣魚腮部受損、行為急躁等情況，須立即鏡檢，若鏡檢發(fā)現(xiàn)有寄生蟲，可通過換水、定期使用阿維菌素等殺蟲藥治防，同時減少投喂量，在用藥后采用聚維酮碘殺菌消毒等方式降低感染率。

成魚養(yǎng)殖過程中，每半個月使用二氧化氯或復(fù)合碘制劑等進行全池潑灑。高溫季節(jié)可使用三黃粉等拌飼，定期潑灑維生素C，提高機體抵抗力。

4.3 治療措施

針對嗜水氣單胞菌引起的感染，可使用恩諾沙星或氟苯尼考進行治療，每100 kg 飼料拌飼5 g內(nèi)服，一般7 d 一個療程，配合使用碘制劑和維生素C 進行全池潑灑。及時使用10 mg/L 漂白粉對養(yǎng)殖工具進行消毒，并暴曬殺菌。