王亞丹，汪祺，何風艷，吳先富，戴忠，馬雙成

中國食品藥品檢定研究院，北京 100050

雷公藤多苷片是20世紀80年代研制開發(fā)的一種單方制劑，在臨床上被廣泛用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、腎病綜合征等自身免疫性疾病[1]，療效確切，屬于一線用藥，生產(chǎn)企業(yè)眾多。2019 年，國家藥品抽驗項目通過標準檢驗和探索性研究對雷公藤多苷片進行了全面質(zhì)量評價，基本明確了目前該品種的整體質(zhì)量狀況和存在的問題，通過分析問題產(chǎn)生的原因，給出合理建議。

1 雷公藤多苷片的基本信息

雷公藤多苷片是由衛(wèi)矛科植物雷公藤Tripterigium wilfordiiHook.f.的根部提取精制成的一種混合物粉末制成的片劑。該制劑具有抗炎和免疫抑制作用[1-3]，屬于國家基本藥物?，F(xiàn)代研究表明，雷公藤多苷的化學成分復雜，主要包括二萜、三萜和倍半萜生物堿類[4-7]，代表性化合物有雷公藤甲素、雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯甲、雷公藤晉堿和雷公藤春堿等，幾乎無苷類成分。當時在基礎研究尚不深入的情況下命名為“雷公藤多甙”，后根據(jù)國家藥典委員會《關(guān)于國家藥品標準中“甙”改“苷”事宜的通知》（國藥典中發(fā)〔2006〕286 號），改為“雷公藤多苷”。目前，該制劑品種共有12 個批準文號，生產(chǎn)企業(yè)12家。

雷公藤多苷片的生產(chǎn)工藝較為復雜，大致過程：雷公藤根去皮后粉碎，經(jīng)乙醇提取和三氯甲烷萃取后得到雷公藤多苷粗品，然后進行硅膠柱色譜分離，收集組分，再按照一定標準對組分進行調(diào)配，得到雷公藤多苷原料，最后加入輔料制成片劑。

雷公藤多苷片的毒性較大[8-10]，長期服用后容易引起消化、泌尿、血液及生殖等多系統(tǒng)損害。根據(jù)《藥品不良反應信息通報》第46期，2004年至2011年9 月，國家藥品不良反應監(jiān)測中心病例數(shù)據(jù)庫中涉及雷公藤多苷片的病例報告633例，其中嚴重者53例（占8.4%），主要表現(xiàn)為藥物性肝炎、腎功能不全、粒細胞減少、血小板減少、閉經(jīng)、精子數(shù)量減少、心律失常等。

2 雷公藤多苷片的質(zhì)量現(xiàn)狀

雷公藤多苷片目前執(zhí)行的質(zhì)量標準為國家藥品監(jiān)督管理局局頒標準（WS3-B-3350-98-2011），檢驗項目主要包括【性狀】、【鑒別】、【檢查】和【含量測定】。其中【檢查】項規(guī)定每片含雷公藤甲素不得超10 μg，【含量測定】項規(guī)定每片含雷公藤內(nèi)酯甲不得少于10 μg。2019 年，通過國家藥品抽驗項目，對市場上流通的10家企業(yè)（編號1～10）生產(chǎn)的共計172 批雷公藤多苷片進行質(zhì)量評價，發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量情況不容樂觀，雖然所有樣品均符合標準，但仍存在許多問題。

2.1 不同企業(yè)制劑成分差異大

首先，在標準檢驗中發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)生產(chǎn)的雷公藤多苷片中雷公藤甲素含量和雷公藤內(nèi)酯甲的含量波動較大，前者在各企業(yè)樣品中的含量為0～9 μg/片，后者含量為11～66 μg/片，見圖1。

圖1 10家企業(yè)雷公藤多苷片中雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲含量測定結(jié)果

隨后，采用Waters Cortecs T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以乙腈-水為流動相，梯度洗脫，采用220 nm 檢測波長建立了雷公藤多苷片的超高效液相色譜法（UPLC）指紋圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)制劑整體成分上存在差異，根據(jù)差異基本可以將10家企業(yè)的制劑分為3組，第一組包括1、2、6、8、9、10，第二組僅包括4，第三組包括3、5、7。各組的典型色譜圖見圖2?？梢钥闯?，各組樣品在色譜峰的數(shù)量、極性分布及響應強度等方面有很大區(qū)別。

圖2 3組雷公藤多苷片的典型UPLC圖

此外，采用快速液相色譜-三重四極桿-串聯(lián)質(zhì)譜法（RRLC-QQQ-MS/MS）對雷公藤多苷片中的多種成分進行含量測定，根據(jù)成分特點，二萜和三萜的檢測采用選擇離子監(jiān)測模式（SIM），生物堿的檢測采用多反應監(jiān)測（MRM）模式。多指標含量測定結(jié)果顯示，生物堿類成分含量高于二萜和三萜類成分，在不同企業(yè)樣品中差異很大，其在第一組企業(yè)雷公藤多苷片中含量均大于500 μg/片，在第二、三組企業(yè)雷公藤多苷片中含量均小于300 μg/片，結(jié)果見圖3。除生物堿外，雷公藤對醌B、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素等成分在不同企業(yè)樣品中的含量也存在明顯差異。

圖3 二萜、三萜和生物堿類成分在10家企業(yè)雷公藤多苷片中的含量

2.2 不同企業(yè)雷公藤多苷片活性和毒性差異大

采用脂多糖（LPS）誘導的巨噬細胞RAW264.7、人源肝細胞HepaRG 等體外模型，通過檢測細胞因子和分化抗原簇86（CD86）的表達及細胞存活率，來評價雷公藤多苷片的抗炎、免疫抑制活性和肝毒性。結(jié)果顯示，不同企業(yè)雷公藤多苷片的活性和毒性存在明顯差異，第一、二組制劑活性和毒性相當，第三組雷公藤多苷片活性和毒性相對較弱，代表性樣品結(jié)果見圖4。通過分析發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷片的活性和毒性基本呈正相關(guān)，即活性強的樣品毒性也強，反之，毒性小的樣品活性也較弱。同時，所有樣品的有效劑量和毒性劑量接近，治療窗口窄，這也是雷公藤多苷片在臨床上不良反應頻發(fā)的根本原因。

圖4 3組雷公藤多苷片代表性樣品的抗炎、免疫抑制活性和細胞毒性結(jié)果（,n=6）

2.3 相同企業(yè)制劑批次間穩(wěn)定性較差

對各企業(yè)多批次樣品進行指紋圖譜相似度評價后發(fā)現(xiàn)，多數(shù)企業(yè)批次間相似度在0.8 以上，但個別企業(yè)樣品質(zhì)量穩(wěn)定性較差，相似度最低值僅有0.5 左右，反映出相關(guān)企業(yè)使用的原藥材質(zhì)量或生產(chǎn)工藝波動較大。

2.4 殘留溶劑超標

通過氣相色譜檢測，發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)雷公藤多苷片存在殘留溶劑乙醇和三氯甲烷超標，分別超過限度值的1.0～1.5倍和6倍。由于三氯甲烷對人體危害較大，應引起關(guān)注。

3 質(zhì)量問題產(chǎn)生的原因

3.1 藥材質(zhì)量混亂

雷公藤作為生產(chǎn)雷公藤多苷片的唯一中藥，其質(zhì)量對制劑的質(zhì)量具有重要影響。雷公藤在我國南部多個地區(qū)均有分布，受海拔、氣候等環(huán)境影響，不同產(chǎn)地的藥材成分存在差異[11-13]。此外，雷公藤屬的另一種植物昆明山海棠T.hypoglaucum(Levl.)Hutch 與雷公藤非常相近，兩者根部性狀幾乎無差別，化學成分類似[14]，混用情況嚴重。目前，雷公藤藥材無國家標準，僅被地方藥材標準收載，標準水平較低，項目設置簡單，大多缺乏含量測定項，各企業(yè)依據(jù)其進行藥材的入廠檢驗無法有效地評價藥材質(zhì)量，也難以區(qū)分昆明山海棠，容易造成原藥材質(zhì)量參差不齊，從而影響制劑的質(zhì)量。

3.2 雷公藤多苷提取物的生產(chǎn)工藝差異大

雷公藤多苷提取物目前沒有批準文號，在雷公藤多苷片的現(xiàn)行標準中也未附提取物的工藝和制法，各企業(yè)參照最初申報的地方標準進行生產(chǎn)，而這些標準中規(guī)定的工藝比較簡單、缺乏詳細過程，導致各企業(yè)雖然總體步驟相似，但在原料是否去皮、提取乙醇的體積分數(shù)、提取方式、柱色譜使用的硅膠用量、裝柱及上樣方式、洗脫溶劑比例、組分收集及組分調(diào)配方法等具體參數(shù)上有較大區(qū)別，如部分企業(yè)按照毒理實驗結(jié)果對組分進行調(diào)配，部分企業(yè)按照成分含量進行調(diào)配，也有部分企業(yè)不進行調(diào)配。不同企業(yè)生產(chǎn)工藝的區(qū)別是導致雷公藤多苷片成分差異的根本原因，進而造成療效與不良反應的差異。

3.3 質(zhì)量標準存在缺陷

抽取的172 批雷公藤多苷片標準檢驗全部合格，但仍存在多種質(zhì)量問題，說明現(xiàn)行的質(zhì)量標準不能很好地控制制劑質(zhì)量，有待提高。首先，現(xiàn)行標準在檢測指標的選擇和限量方面不合理，現(xiàn)行標準的主要指標成分是雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲，前者作為毒性成分列入檢查項下，規(guī)定含量上限，而后者作為主要的有效成分列入含量測定項下，規(guī)定含量下限。通過藥理研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素雖然毒性比較大，但抗炎和免疫抑制活性極強，僅將其作為毒性成分控制含量上限是不合理的，而雷公藤內(nèi)酯甲的活性和毒性均很弱，且有文獻報道該成分的口服生物利用度極低，很難吸收入血[15]，因此，標準中控制其含量意義不大。除這2 種成分外，雷公藤紅素、雷公藤對醌B 等成分的活性和/或毒性也非常顯著，對制劑活性和/或毒性貢獻較大，具有一定質(zhì)量控制意義；其次，現(xiàn)行標準缺乏指紋圖譜或有效成分特征圖譜等整體質(zhì)量評價項目，無法評價批次間質(zhì)量穩(wěn)定性；另外，現(xiàn)行質(zhì)量標準中缺乏殘留溶劑檢測項目。

4 總結(jié)與建議

雷公藤多苷片在治療多種自身免疫性疾病方面療效顯著，具有很大的臨床價值，但同時毒性較大。由于藥材質(zhì)量、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標準等方面的原因，導致不同企業(yè)雷公藤多苷片的成分、療效和不良反應差異大，同企業(yè)制劑批次間穩(wěn)定性較差及殘留溶劑超標等問題，總體質(zhì)量較差。為提高藥品質(zhì)量，降低臨床用藥風險，給出以下幾點建議：1）建立雷公藤多苷原料的質(zhì)量標準，統(tǒng)一生產(chǎn)工藝，規(guī)定關(guān)鍵的工藝參數(shù)；2）對雷公藤藥材及雷公藤多苷片的質(zhì)量標準進行提高研究，完善檢測項目，尤其對指標成分的選擇和限量作出合理規(guī)定；3）由于該制劑活性和毒性并存，治療窗口窄，建議對已上市的雷公藤多苷片從化學成分、口服生物利用度、療效和毒性等方面進行一致性評價。通過以上舉措最終達到各企業(yè)雷公藤多苷片成分相似、療效相當、不良反應可控的目的。