国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx

HPLC法測(cè)定太子參藥材中多糖水解產(chǎn)物單糖的含量

2021-10-08 07:55:22王慧娟彭禮軍
中國(guó)民族民間醫(yī)藥 2021年15期
關(guān)鍵詞:鼠李糖太子參單糖

王慧娟 喬 楊 張 敏 彭禮軍

1.西南藥食兩用資源開發(fā)利用技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,貴州 貴陽(yáng) 550025;2.黔西南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院,貴州 興義 562400

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm. 的干燥塊根,中醫(yī)臨床常用補(bǔ)益藥[1]。近年來(lái),人們對(duì)太子參化學(xué)成分進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究[2]。研究[3-6]表明,多糖是太子參的重要活性成份,具有抗應(yīng)激、抗氧化和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的作用,對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞損傷和大鼠急性心肌梗死誘發(fā)的心肺損傷有一定的保護(hù)作用。

太子參多糖主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖等組成[7]。本研究在此基礎(chǔ)上,建立柱前衍生化-HPLC法測(cè)定太子參多糖中鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的含量,為太子參藥材質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的完善提供基礎(chǔ)。

1 材料

Agilent 1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司),F(xiàn)A2004型分析天平(上海良平儀器儀表有限公司),GZX-9146MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),恒溫水浴鍋(金壇市大地自動(dòng)化儀器廠)。

太子參藥材(貴州百靈制藥有限公司);1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司);葡萄糖(成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司,含量≥98.0%);半乳糖(solarbio公司,含量≥99.0%);鼠李糖(上海源葉生物科技有限公司,含量≥98.0%)、木糖(上海源葉生物科技有限公司,含量≥99.0%);醋酸銨、氯仿、氫氧化鈉、甲醇、濃鹽酸、三氟乙酸均為分析純,乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件優(yōu)化

2.1.1 混合單糖對(duì)照品衍生化供試液制備 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖各100mg,加水溶解,定容至100 mL。

取對(duì)照品溶液1 mL,依次加入PMP甲醇溶液(0.5 moL·L-1)和NaOH溶液(0.2 moL·L-1)各0.5 mL,混勻,70 ℃水浴100 min,冷卻,加入鹽酸溶液(0.2 mol·L-1)中和,混勻,三氯甲烷洗滌3次,每次2 mL,取水層,離心后上清液用微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

2.1.2 色譜柱選擇 分別采用waters C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)和Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)三種色譜柱,考察色譜柱對(duì)混合對(duì)照品衍生化供試液色譜峰的影響。結(jié)果表明,Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱能對(duì)各衍生化組分進(jìn)行很好地分離。具體如圖1所示。

1.waters C18 2.Agilent ZORBAX SB-C18 3.Agilent Eclipse XDB-C18

2.1.3 柱溫篩選 采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱,設(shè)定柱溫為25 ℃,30 ℃和35 ℃。結(jié)果發(fā)現(xiàn),柱溫越高,保留時(shí)間越短,出峰越快。為節(jié)約時(shí)間,選取柱溫為35 ℃。

2.1.4 流動(dòng)相考察 采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱,設(shè)定流動(dòng)相為乙腈-水、乙腈-乙酸銨溶液(0.01 moL·L-1)、乙腈-乙酸銨溶液(0.02 moL·L-1)和乙腈-乙酸銨溶液(0.05 moL·L-1)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),乙酸銨對(duì)峰形及分離度有改善作用,濃度越高,峰形對(duì)稱性越好,但對(duì)設(shè)備損傷較大。綜合考慮,流動(dòng)相選取乙腈-乙酸銨溶液(0.02 moL·L-1)。

2.2 太子參多糖水解方法篩選

2.2.1 水解用酸的考察 取6份太子參多糖(自制)各10 mg,加水1.0 mL溶解,分別加入3、5、7 moL·L-1鹽酸和1、3、5 moL·L-1三氟乙酸溶液各1.0 mL,混勻,110 ℃水解1 h,放冷,NaOH溶液中和,得太子參多糖水解液。

取上述6份多糖水解液各1.0 mL,照“2.1.1”項(xiàng)下處理后測(cè)定,其結(jié)果見表1。

表1 多糖酸水解后各單糖衍生物的峰面積

實(shí)驗(yàn)表明,不同水解條件下4種單糖峰面積變化趨勢(shì)并不相同。綜合考慮,水解用酸選擇3 moL·L-1鹽酸溶液。

2.2.3 水解溫度考察 取3份太子參多糖各10 mg,加水1.0 mL溶解,分別加入鹽酸(3 mol·L-1)1.0 mL,混勻,分別在100 ℃、110 ℃、120 ℃水解1 h,放冷, NaOH溶液中和,得太子參多糖水解液。

取上述多糖水解液各1.0 mL,照“2.1.1”項(xiàng)下處理后測(cè)定,根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果,水解溫度確定為110 ℃,其結(jié)果見表2。

表2 不同溫度水解多糖后各單糖衍生物的峰面積

2.2.4 水解時(shí)間考察 取3份太子參多糖各10 mg,加水1.0 mL溶解,加入鹽酸(3 moL·L-1)1.0 mL,混勻,于110 ℃分別水解30,60 和90 min,放冷, NaOH溶液中和,得太子參多糖水解液。

取上述多糖水解液各1.0 mL,照“2.1.1”項(xiàng)下處理后測(cè)定,根據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果,水解時(shí)間確定為30 min,具體見表3。

表3 不同水解時(shí)間對(duì)單糖衍生物峰面積的影響

2.3 衍生化方法的篩選

2.3.1 衍生化溫度的篩選 取太子參多糖水解液3份,每份1.0 mL,置10 mL具塞試管中,依次加入PMP甲醇溶液(0.5 moL·L-1)和NaOH溶液(0.2 moL·L-1)各0.5 mL,混勻,分別于40 ℃,70 ℃,95 ℃水浴100 min,處理后進(jìn)樣測(cè)定。綜合考慮各單糖峰面積,將衍生化溫度確定為70 ℃,具體見表4。

表4 衍生化反應(yīng)溫度對(duì)單糖峰面積的影響

2.3.2 衍生化時(shí)間的篩選 取太子參多糖水解液3份,每份各1.0 mL,依次加入PMP甲醇溶液(0.5 moL·L-1)和NaOH溶液(0.2 moL·L-1)各0.5 mL,混勻,于70 ℃水浴分別加熱30,60和100 min,處理后進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)各單糖峰面積的大小確定衍生化時(shí)間為100 min,具體見表5。

表5 衍生化時(shí)間對(duì)單糖峰面積的影響

2.4 太子參藥材中多糖水解產(chǎn)物單糖的含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.02 moL·L-1的乙酸銨溶液(19∶81);檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:35℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.4.2 供試品溶液的制備及測(cè)定 供試品溶液的制備 精密稱取太子參粉末0.2 g,置索氏提取器中,用80 mL乙醇回流提取1 h。過濾,濾渣揮干乙醇后,加水40 mL回流提取4 h,趁熱抽濾,再加水30 mL回流提取2 h,抽濾,合并濾液,定容至100 mL。精密吸取1 mL定容至10 mL,作為供試品溶液。

測(cè)定法:取太子參供試品溶液1 mL,加鹽酸溶液(3.0 moL·L-1)1 mL,混勻,110 ℃水解30 min,放冷,NaOH溶液調(diào)pH值至中性。取1 mL,依次加入PMP甲醇溶液(0.5 mol·L-1)和NaOH溶液(0.2 moL·L-1)各0.5 mL,混勻,70 ℃水浴加熱100 min,冷卻,鹽酸溶液(0.2 moL·L-1)中和后定容至5 mL,混勻,三氯甲烷洗滌3次,每次2 mL,取水層,離心后將上清液過濾,取續(xù)濾液,測(cè)定,即得。

2.4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別吸取混合對(duì)照品液、供試品溶液進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖(見圖2)。從圖中可見,供試品溶液和對(duì)照品溶液中鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖的保留時(shí)間一致,且供試品溶液中各待測(cè)峰的分離度符合要求。

A.混合單糖對(duì)照品溶液;B.供試品溶液

2.4.4 線性關(guān)系考察 取四種單糖濃度均為1 mg·mL-1的混合單糖對(duì)照品溶液,衍生化處理后測(cè)定,記錄色譜圖。以進(jìn)樣量x(μg)為橫坐標(biāo),峰面積A為縱坐標(biāo),計(jì)算回歸得到四種單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線,見表6。

表6 四種單糖衍生物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取太子參藥材(1號(hào))0.2 g,按“2.4.2”項(xiàng)下制備供試液,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定各單糖的峰面積,結(jié)果見表7。RSD均小于2%,表明儀器精密度良好。

表7 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取太子參藥材(1號(hào))0.2 g,按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份,分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,結(jié)果見表8。

表8 重復(fù)性試驗(yàn)

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取太子參藥材(1號(hào))0.2 g,按“2.4.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,分別于衍生化后0、2、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果列入表9。RSD均小于2%,說(shuō)明供試液衍生化后在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已測(cè)定含量的樣品(樣品編號(hào)1號(hào))各0.1g,置索氏提取器中,加乙醇回流提取1 h,濾渣揮干乙醇,再精密加入適量的鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖對(duì)照品,按照 “2.4.2”項(xiàng)下處理后測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表10~13。

表10 加樣回收率試驗(yàn)(鼠李糖)

2.4.9 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的太子參藥材樣品,分別制備供試品溶液后測(cè)定,結(jié)果見表14。

表11 加樣回收率試驗(yàn)(葡萄糖)

表12 加樣回收率試驗(yàn)(半乳糖)

表13 加樣回收率試驗(yàn)(木糖)

表14 太子參藥材中各單糖含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明:各批次太子參的單糖含量懸殊不是很大,且皆呈現(xiàn)出同樣趨勢(shì):其含量木糖﹥半乳糖﹥鼠李糖﹥葡萄糖。各批次藥材中木糖和半乳糖含量均在10%以上,葡萄糖含量較低,大多在5%以下。

3 討論

本文采用柱前衍生化-HPLC法對(duì)太子參藥材中的鼠李糖、葡萄糖、半乳糖以及木糖進(jìn)行測(cè)定,分別對(duì)液相色譜條件、多糖水解和衍生化條件進(jìn)行了優(yōu)化,比較了不同條件下單糖衍生物的峰形、分離度、峰面積大小變化等,最終確定了太子參藥材中多糖水解產(chǎn)物單糖的含量測(cè)定方法。

對(duì)所建方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,結(jié)果發(fā)現(xiàn)4種單糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性均較好(回歸系數(shù)0.9999),精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD均小于3%。在加樣回收率試驗(yàn)中,鼠李糖、半乳糖和木糖的平均回收率在95%~105%之間,且RSD﹤3%,符合要求。但葡萄糖的回收率偏低,平均值為86.04%,這可能與太子參藥材中葡萄糖含量較低且樣品前處理過程比較復(fù)雜有關(guān)。因此,在后續(xù)的太子參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作中,可優(yōu)先考慮將含量較高的鼠李糖、半乳糖和木糖納入質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

本文的研究工作,可為今后太子參藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充完善提供研究基礎(chǔ)及數(shù)據(jù)支撐,對(duì)太子參的質(zhì)量控制具有一定的價(jià)值和意義。

猜你喜歡
鼠李糖太子參單糖
太子參品種栽培特性及其高產(chǎn)配套技術(shù)研究
花卉(2021年14期)2021-07-26 02:22:38
鼠李糖脂發(fā)酵液驅(qū)油性能研究
生物表面活性劑鼠李糖脂研究概況
海藻多糖的單糖組成對(duì)體外抗氧化活性的影響
蹄葉槖吾葉多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成研究
銅綠假單胞菌半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)鼠李糖脂
HPLC-ELSD法測(cè)定煙草中單糖含量
以甘油為底物鼠李糖脂高產(chǎn)菌株的誘變選育
正交設(shè)計(jì)優(yōu)化太子參ISSR—PCR反應(yīng)體系
獼猴桃根多糖抗疲勞、抗氧化與單糖組分鑒定
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
404 Not Found

404 Not Found


nginx
灵丘县| 东光县| 济源市| 周至县| 会理县| 沾化县| 哈巴河县| 温宿县| 正阳县| 托里县| 沁源县| 明光市| 琼结县| 长治市| 多伦县| 三门县| 上饶县| 得荣县| 珠海市| 大渡口区| 多伦县| 密云县| 定襄县| 弥渡县| 思茅市| 乃东县| 桂林市| 新密市| 海伦市| 精河县| 青州市| 邢台市| 平塘县| 肥东县| 兴宁市| 莒南县| 曲水县| 观塘区| 施秉县| 丁青县| 龙川县|