周麗君，王珊，付薪靜，萬建華，穆耶賽爾，張洪斌

（烏魯木齊市血液中心，新疆 烏魯木齊）

0 引言

血篩核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）是在分子生物學(xué)水平的基礎(chǔ)上直接對病原體核酸進(jìn)行檢測，作為對酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）血液檢測的補充，大大縮短檢測“窗口期”，降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險[1-2]。新疆位于西北部，地大物博，各地區(qū)檢測水平參差不齊，核酸檢測對人員、環(huán)境、設(shè)備等方面要求較高，新疆地區(qū)對沒有開展核酸檢測的實驗室實行核酸集中化檢測，目前血站實驗室在業(yè)務(wù)運行、檢測前樣本質(zhì)量、性能驗證、檢測中實驗室內(nèi)質(zhì)控、檢測后是否拆分、拆分陽性率、室間質(zhì)評等的綜合評價領(lǐng)域，亟需建立一套系統(tǒng)、科學(xué)、有效、綜合的評價方法，制定業(yè)務(wù)發(fā)展和實驗室質(zhì)量管理相適應(yīng)的質(zhì)量指標(biāo)，建立同行實驗室之間標(biāo)桿比對的體系[3]。本研究對本中心核酸檢測實驗室2017年1月至2020年12月核酸檢測質(zhì)量監(jiān)控中常用的指標(biāo)進(jìn)行分析，探究本實驗室核酸檢測自身業(yè)務(wù)運行和質(zhì)量管理效果的真實狀態(tài)，有助于實驗室利用系統(tǒng)、科學(xué)的綜合評價結(jié)果，確保血液檢測結(jié)果準(zhǔn)確、及時、有效。

1 材料與方法

1.1 核酸檢測設(shè)備和試劑

本研究使用兩套核酸檢測系統(tǒng)，A系統(tǒng)和B系統(tǒng)兩套系統(tǒng)互為備用，混樣分項目檢測，每批檢測均依據(jù)試劑說明書設(shè)置陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控，每個pool均含內(nèi)標(biāo)。室內(nèi)質(zhì)控濃度為最低檢測限2～5倍并且與已知陰性樣本混樣檢測，第三方室內(nèi)質(zhì)控品監(jiān)控，A系統(tǒng)室內(nèi)質(zhì)控濃度分別為：50 IU/mL、200 IU/mL、1000 IU/mL；B系統(tǒng)200 IU/mL、2000 IU/mL、2000 IU/mL。按照混樣規(guī)則進(jìn)行混樣檢測，混樣檢測為反應(yīng)性的pool挑選出樣本，進(jìn)一步做拆分實驗，拆分實驗為反應(yīng)性的標(biāo)本判定為核酸檢測結(jié)果陽性，無反應(yīng)性則判定為核酸檢測結(jié)果陰性。

1.2 資料來源于本中心核酸檢測實驗室

對2017年1月至2020年12月核酸檢測的基本情況進(jìn)行回顧性分析。

1.3 監(jiān)測指標(biāo)

樣本數(shù)、檢測批次、匯集陽性pool數(shù)、陽性標(biāo)本數(shù)、核酸檢出率、拆分檢出率、樣本采集錯誤數(shù)量、樣本采集錯誤率、室間質(zhì)評滿分次數(shù)、室間質(zhì)評滿意度、室內(nèi)質(zhì)控失控次數(shù)、室內(nèi)質(zhì)控失控率、實驗失敗次數(shù)、實驗失敗率、設(shè)備故障天數(shù)、設(shè)備故障率。

1.4 常用質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)計算方式

1.4.1 核酸陽性情況相關(guān)指標(biāo)

核酸檢出率=（核酸陽性標(biāo)本數(shù)/檢測標(biāo)本總數(shù)）×100%。

拆分檢出率=（拆分陽性標(biāo)本數(shù)/混樣陽性pool數(shù)）×100%。

1.4.2 樣本采集錯誤率

樣本采集錯誤率=（樣本錯誤/樣本總數(shù)）×100%。

1.4.3 室間質(zhì)評滿意度

室間質(zhì)評滿意度=（室間質(zhì)評100分次數(shù)/參加總次數(shù)）×100%。

1.4.4 室內(nèi)質(zhì)控失控率

室內(nèi)質(zhì)控失控率=（第三方室內(nèi)質(zhì)控失控批次/總實驗批次）×100%。

1.4.5 實驗失敗率

實驗失敗率=（實驗失敗批次/總實驗批次）×100%。

1.4.6 設(shè)備故障率

設(shè)備故障率=（設(shè)備故障天數(shù)/可使用天數(shù)）×100%。

2 結(jié)果

A系統(tǒng)與B系統(tǒng)比較，見表1。

表1 A系統(tǒng)與B系統(tǒng)質(zhì)量監(jiān)測指標(biāo)比較（n,%）

3 討論

血站實驗室可借鑒國際通用的醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量指標(biāo)體系框架。如2010年美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）頒布了《建立使用質(zhì)量指標(biāo)實施實驗室過程改進(jìn)和質(zhì)量監(jiān)控》(GP35 A)[4]，2017年，我國國家衛(wèi)計委頒布了《臨床實驗室質(zhì)量指標(biāo)》(WS/T496 2017)，為我國臨床實驗室質(zhì)量指標(biāo)體系的建立提供了標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)[5]。烏魯木齊2017年1月至2020年12月共檢測核酸樣本229136例，采用幾種主要指標(biāo)對核酸檢測日常運行情況進(jìn)行監(jiān)控，質(zhì)量指標(biāo)項目主要來源于每月給國家衛(wèi)健委上報的質(zhì)量指標(biāo)[3]，2017～2020年總體核酸檢測情況，A系統(tǒng)和B系統(tǒng)比較，核酸檢出率、實驗失敗率有顯著性差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；兩個系統(tǒng)均進(jìn)行兩兩比較，A系統(tǒng)樣本采集錯誤率2018年與2019年有顯著性差異（P＜0.05），實驗失敗率2017年與2018年有顯著性差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；B系統(tǒng)設(shè)備故障率：2017年與2020年有顯著性差異（P＜0.05），設(shè)備故障率：2018年與2020年有差異（P＜0.05），其余無顯著性差異（P＞0.05）；樣本采集錯誤率0.010%，標(biāo)本錯誤主要原因是：樣本不足量、核酸酶免試管條碼貼錯、集中化樣本因冷凍后在運輸過程中導(dǎo)致嚴(yán)重溶血；核酸檢出率A系統(tǒng)0.091%高于B系統(tǒng)0.043%，主要與檢測試劑最低檢出限等有關(guān)；A系統(tǒng)拆分檢出率56.949%，與山東[6]接近，反映匯集反應(yīng)性pool拆分效率的指標(biāo)，本實驗室在每月分析中可以看出，在檢測室間質(zhì)評之后的1周拆分效率較低，可能是室間質(zhì)評樣本中有HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA陽性樣本，檢測之后沒有消毒徹底導(dǎo)致；室間質(zhì)評滿意度12次結(jié)果均為100分，但其中一次B系統(tǒng)核酸檢測設(shè)備檢測結(jié)果中，有一室間質(zhì)評樣本HIV項目混樣檢測結(jié)果為陰性，但仔細(xì)觀察擴(kuò)增圖異常才分析得出正確結(jié)果；室內(nèi)質(zhì)控失控率較低，主要出現(xiàn)為HCV RNA匯集未檢測出，室內(nèi)質(zhì)控失控及時填寫失控報告并進(jìn)行分析；實驗失敗率，A系統(tǒng)低于B系統(tǒng)，實驗失敗主要為陽性未檢測出、內(nèi)標(biāo)未出、陰性檢測到陽性結(jié)果、實驗室溫度超出30 ℃、實驗室干燥、人為因素、其他原因?qū)嶒炇〉?；設(shè)備故障率，主要為匯集表現(xiàn)為未加上樣本頻繁；提取故障主要表現(xiàn)為維護(hù)無法進(jìn)行、設(shè)備報錯、提取磁珠異常等；擴(kuò)增故障未出現(xiàn)過。本實驗室機(jī)采血小板、RH樣本按照混樣規(guī)則分配在不同的pool中，與全血已知陰性樣本混樣，拆分當(dāng)日進(jìn)行，保證樣本在采集后72 h內(nèi)發(fā)放結(jié)果，并且機(jī)采血小板、RH樣本可提前檢測出結(jié)果，運行效果良好。

本研究的實驗室在2016年建立了實驗室質(zhì)量體系之后，通過新疆臨檢中心PCR實驗室驗收，本研究通過對本實驗室質(zhì)量指標(biāo)的分析探索，不斷持續(xù)改進(jìn)，以提高實驗室檢測能力。