林耿輝，方桂真

(揭陽市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科，廣東 揭陽 522031)

近年來，伴隨社會(huì)發(fā)展以及人們生活習(xí)慣的改變，艾滋病蔓延速度有所增快，對(duì)人們的健康造成威脅[1]。盡管抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物的應(yīng)用已得到普及，使此病成為可以控制的慢性傳染病，但患者的預(yù)后和長期生存質(zhì)量仍不容樂觀。大量研究顯示，CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠較為客觀地反映患者機(jī)體免疫功能衰退情況[2]?？共《局委熌軌蛲ㄟ^提升CD4+T淋巴細(xì)胞水平，以調(diào)整CD4+/CD8+比值水平。免疫印跡試驗(yàn)作為目前人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染中最常用的確證實(shí)驗(yàn)之一，已在各級(jí)疾病預(yù)防控制中心廣泛開展[3]。由于新發(fā)HIV感染者尚未接受臨床干預(yù)，其分子生物學(xué)改變能夠更為真實(shí)地反映病毒感染后的病理生理變化，故本研究選取2017年1月至2019年12月揭陽市疾病預(yù)防控制中心確診的共計(jì)1 168例新發(fā)HIV感染者，探討HIV印跡條帶與CD4+T淋巴細(xì)胞水平的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年1月至2019年12月揭陽市疾病預(yù)防控制中心確診的共計(jì)1 168例新發(fā)HIV感染者作為研究對(duì)象，其中2017年620例，2018年400例，2019年148例。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②依據(jù)《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2020年修訂版)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，首次確診為HIV感染；③確診HIV感染后即接受相關(guān)檢查，且臨床資料完整。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他免疫性疾??；②合并重要器官器質(zhì)性病變；③無法配合完成抗病毒治療；④處于妊娠或哺乳期。本研究經(jīng)疾病預(yù)防控制中心醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)及分組方法HIV感染確診當(dāng)日，使用BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀以及該公司的Tritest-CD4-FITC抗體，采用單平臺(tái)法檢測(cè)感染者CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。根據(jù)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行分組。依據(jù)第8版《內(nèi)科學(xué)》[4]，將CD4+T≥500個(gè)·μL-1者納入無免疫抑制組，CD4+T≥200個(gè)·μL-1且<500個(gè)·μL-1者納入輕中度免疫抑制組，CD4+T<200個(gè)·μL-1者納入重度免疫抑制組。進(jìn)行免疫印跡試驗(yàn)。使用HIV 1+2型抗體免疫印跡試劑盒(HIV BLOT 2.2)對(duì)上述標(biāo)本抗體進(jìn)行帶型分析。試劑盒購于MP生物醫(yī)學(xué)亞太有限公司，實(shí)驗(yàn)操作過程嚴(yán)格按照試劑盒產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 新發(fā)HIV感染者免疫印跡帶型新發(fā)HIV感染者免疫印跡帶型見表1。

表1 新發(fā)HIV感染者免疫印跡帶型(n=1 168)

2.2 新發(fā)HIV感染者CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)無免疫抑制組、輕中度免疫抑制組、重度免疫抑制組分別有246例(21.06%)、526例(45.03%)、396例(33.90%)，CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為(576.34±103.42)、(354.29±92.30)、(99.04±23.41)個(gè)·μL-1。

2.3 不同免疫功能HIV感染者免疫印跡帶型分布3組感染者env和pol抗體陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在gag蛋白抗體檢測(cè)中，p55陽性率組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，p24和p17陽性率組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中重度免疫抑制組p24陽性率低于輕中度免疫抑制組(P<0.017)，p17陽性率高于其他兩組(P<0.017)。見表2。

表2 不同免疫功能HIV感染者的免疫印跡帶型分布[n(%)]

3 討論

HIV感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是HIV抗體檢測(cè)，免疫印跡法對(duì)HIV抗體檢測(cè)的價(jià)值已得到廣泛認(rèn)可[5]。作為HIV病毒的主要基因結(jié)構(gòu)，gag、pol和env這3個(gè)編碼區(qū)能夠編碼若干特異性蛋白，這些蛋白進(jìn)入機(jī)體后會(huì)通過免疫反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體，這是HIV抗體檢測(cè)的生物分子學(xué)依據(jù)[6]。

在本研究中，經(jīng)過對(duì)免疫印跡帶型分析，發(fā)現(xiàn)如下特征：(1)抗env基因編碼的gp120一般與gp160相伴出現(xiàn)，這與前人研究結(jié)果相符，gp160是包膜糖蛋白前體，能夠通過裂解產(chǎn)生gp120，且gp120只有1條產(chǎn)生途徑，因而gp120不可能脫離gp160而單獨(dú)存在[7]；(2)抗pol基因編碼抗體p31、p51和p66的檢出率較高，均在95%以上，而抗gag基因編碼抗體p17、p24和p55的檢出率較低，這種差異的內(nèi)在原因及分子生物學(xué)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究；(3)全條帶和次條帶在本研究選取的1 168例新發(fā)HIV感染者中占比最高，其中g(shù)p120和gp160均無缺失，但其余基因抗體均有不同程度的缺失，其中缺失率最高的抗體為p55，之后依次為p17、p51及p31。以上特征基本符合我國其他省市HIV抗體免疫印跡帶型分布特征[8]。

CD4+T淋巴細(xì)胞是人體被HIV病毒侵襲后主要受攻擊細(xì)胞，且伴隨CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量的進(jìn)行性下降，患者免疫功能缺陷愈發(fā)嚴(yán)重，機(jī)會(huì)性感染以及惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均大幅增加，健康和生命安全受到嚴(yán)重威脅[9]。因此，對(duì)于新發(fā)HIV感染者而言，其確診時(shí)的CD4+T淋巴細(xì)胞水平是評(píng)價(jià)患者免疫功能的重要指標(biāo)[10]。本研究根據(jù)研究對(duì)象的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)將其分為無免疫抑制組、輕中度免疫抑制組和重度免疫抑制組，其中無免疫抑制組感染者占比最小，提示在HIV確診早期，感染者免疫功能大多已受到不同程度的損害。對(duì)3組感染者的免疫印跡帶型分布進(jìn)行比較，結(jié)果顯示3組感染者env、pol帶型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示這2種帶型很少受病程影響，在免疫功能受損程度不同的感染者中均有較高的表達(dá)率，其抗體水平對(duì)感染者免疫系統(tǒng)破壞程度的評(píng)估價(jià)值相對(duì)有限[11]。gag蛋白抗體中，除p55以外，p24和p17抗體陽性率組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示這2種蛋白的缺失與機(jī)體免疫功能受損程度密切相關(guān)，這與國外學(xué)者的研究結(jié)果[12]基本相符，其具體機(jī)制目前尚無定論，可能與HIV大量復(fù)制對(duì)抗體的消耗有關(guān)。

綜上所述，免疫印跡帶型分布能夠在一定程度上反映新發(fā)HIV感染者的疾病進(jìn)展和免疫功能受損程度，為臨床確定疾病分期、監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展提供一定參考。