蔡 金，龔 安

（1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科，貴州 貴陽 550002；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)岐黃國醫(yī)書院，江西 南昌 330025）

有研究指出，胃癌的發(fā)生與TGF-β/Smad信號傳導(dǎo)通路異常存在一定的關(guān)聯(lián)。TGF-β/Smad信號傳導(dǎo)通路具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、生長的作用。此信號傳導(dǎo)通路中任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均可造成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)紊亂，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[1]。本文主要是研究應(yīng)用艾灸療法調(diào)控TGF-β/Smad信號傳導(dǎo)通路在逆轉(zhuǎn)慢性萎縮性胃炎癌前病變方面的效果。

1 資料與方法

1.1 試驗動物

選擇純系合格Wistar大鼠120只，雄性，SPF級，6周齡。采用架式籠養(yǎng)，每籠5只。飼養(yǎng)溫度為（24±2）℃，濕度為（55±5%），每12 h進(jìn)行1次亮暗循環(huán)。讓大鼠自由取食標(biāo)準(zhǔn)飼料和自來水，檢疫3周后進(jìn)行分組試驗。

1.2 分組及處理

將120只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、艾灸胃經(jīng)穴組、對照點(diǎn)組、艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組和對照點(diǎn)+LY2109761組，每組20只大鼠。對各組大鼠進(jìn)行相應(yīng)的處理，具體的處理方法如下：1）正常組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，不進(jìn)行造模。定時對其進(jìn)行捆綁，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。2）模型組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模。定時對其進(jìn)行捆綁，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。3）艾灸胃經(jīng)穴組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模。艾灸其胃經(jīng)穴，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。4）艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模。為其腹腔注射適量的LY2109761，艾灸其胃經(jīng)穴，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。5）對照點(diǎn)組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模。艾灸其對照點(diǎn)，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。6）對照點(diǎn)+LY2109761組大鼠：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模。為其腹腔注射適量的LY2109761，艾灸其對照點(diǎn)，40 min/次，1次/d，持續(xù)進(jìn)行4周。

1.3 造模方法

參照嚴(yán)茂祥[2]的方法進(jìn)行慢性萎縮性胃炎癌前病變造模，具體方法如下：讓大鼠飲用N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍溶液，使用水楊酸、酒精對其進(jìn)行灌胃。定時使用夾子對其進(jìn)行夾尾，采用饑飽失常法對其進(jìn)行處理，為期20周。將N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍加入到等離子水中配備成濃度為1 g/L的儲存液，在4℃下避光儲存。用時將其配制成170 μg/mL的飲用液，并置于表面涂黑色油漆的飲水瓶中，讓大鼠自然飲用（每日更換1次）。使用10 mL/kg濃度為2%的水楊酸鈉溶液對大鼠進(jìn)行灌胃，每日1次（進(jìn)行灌胃前后禁食禁水1 h）。使用10 mL/kg濃度為30%的酒精溶液對大鼠進(jìn)行灌胃，隔日1次（進(jìn)行灌胃前后禁食禁水1 h）。每日對大鼠進(jìn)行1次夾尾，使其保持激怒、爭斗狀態(tài)（持續(xù)1 h）。采用饑飽失常法對其進(jìn)行處理，即足量喂食2 d后停食1 d，循環(huán)實(shí)施。進(jìn)行模型檢測的方法是：從造模第1周開始，每隔1周斷頭處死1只大鼠，取其胃組織行常規(guī)病理檢查。觀察造模情況，觀察內(nèi)容主要包括有無胃黏膜萎縮、腸化生和異型增生及上述情況出現(xiàn)的時間和程度等。

1.4 干預(yù)方法

選穴方法是：選取大鼠的中脘穴、足三里穴作為治療穴位，對照點(diǎn)為中脘穴、足三里穴外側(cè)1 cm。穴位的定位參照《實(shí)驗針灸學(xué)》[3]。取穴方法是：將大鼠左右腓骨小頭前下方和劍突下方兩側(cè)的體毛除去，確定穴位后用苦味酸做標(biāo)記。取胃組織的方法是：讓大鼠禁食1 d后，為其腹腔注射0.3 mL濃度為3%的戊巴比妥。距幽門1.0 cm剖胃取材，沿矢狀線做縱行切開后，用10%的多聚甲醛液進(jìn)行組織固定、標(biāo)號，然后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。

1.5 觀察指標(biāo)

分別對比正常組大鼠、模型組大鼠、艾灸胃經(jīng)穴組大鼠、對照點(diǎn)組大鼠、艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組大鼠、對照點(diǎn)+LY2109761組大鼠胃黏膜中表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）、轉(zhuǎn) 化 生 長 因 子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、Smad3、P53、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、核仁組成區(qū)相關(guān)蛋白（nucl-eolar organizer region associated protein，Ag-NOR）和增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

對本研究中的數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行處理，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 六組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β、Smad3水平的對比

與正常組大鼠相比，模型組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β的水平均較高，其胃黏膜組織Smad3的水平均較低，P＜0.05。與模型組大鼠、艾灸胃經(jīng)穴組大鼠、對照點(diǎn)組大鼠、對照點(diǎn)+LY2109761組大鼠相比，艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β的水平均較低，其胃黏膜組織Smad3的水平較高，P＜0.05。詳見表1。

表1 六組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β、Smad3水平的對比（±s）

表1 六組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β、Smad3水平的對比（±s）

組別 EGF（ng/L） TGF-β（ng/L）Smad3（pg/mL）正常組（n=20） 2256.87±16.59 91.23±5.21 15.51±3.64模型組（n=20） 2811.52±18.01 140.51±7.30 9.23±2.05艾灸胃經(jīng)穴組（n=20）2667.24±17.55 133.27±8.51 11.86±1.98對照點(diǎn)組（n=20） 2703.51±17.93 127.55±5.81 10.57±1.63艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組（n=20）2304.26±16.78 105.62±5.62 14.41±3.20對照點(diǎn)+LY2109761組（n=20） 2597.51±17.22 128.91±6.05 11.36±1.75

2.2 六組大鼠胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA水平的對比

與正常組大鼠相比，模型組大鼠胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA的水平均較高，P＜0.05。與模型組大鼠、艾灸胃經(jīng)穴組大鼠、對照點(diǎn)組大鼠、對照點(diǎn)+LY2109761組大鼠相比，艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組大鼠胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA的水平均較低，P＜0.05。詳見表2。

表2 六組大鼠胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA水平的對比（ng/L，±s）

表2 六組大鼠胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA水平的對比（ng/L，±s）

組別 P53 Bcl-2 Ag-NORs PCNA正常組（n=20） 38.59±3.15 23.01±3.26 77.25±3.41 1.65±0.45模型組（n=20） 56.07±1.26 39.57±1.55 115.02±5.79 3.04±0.91艾灸胃經(jīng)穴組（n=20） 52.31±1.51 32.43±1.50 110.32±5.40 2.61±0.77對照點(diǎn)組（n=20） 50.20±1.40 36.15±1.42 105.45±5.17 2.83±0.84艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組（n=20） 37.66±3.02 25.04±3.08 80.16±3.65 1.80±0.50對照點(diǎn)+LY2109761組（n=20） 48.25±1.33 30.98±1.77 97.25±4.02 2.95±0.88

3 討論

慢性萎縮性胃炎是臨床上常見的一種慢性胃炎。此病具有病程長、易反復(fù)發(fā)作、遷延難愈等特點(diǎn)。有研究指出，慢性萎縮性胃炎轉(zhuǎn)變成胃癌與胃黏膜細(xì)胞信號傳導(dǎo)紊亂造成相關(guān)基因表達(dá)失衡，進(jìn)而引發(fā)胃黏膜細(xì)胞異常增殖有關(guān)。近年來，慢性萎縮性胃炎的發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢。但對于此病，臨床上仍缺乏特效治療方案[4]。中醫(yī)認(rèn)為，慢性萎縮性胃炎屬于“胃脘痛”、“胃痞”等范疇，其病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，其中脾胃氣虛為虛，氣滯血瘀為實(shí)，部分患者存在虛實(shí)夾雜的情況，對其進(jìn)行治療的難度較大[5]。有研究指出，艾灸足陽明經(jīng)穴對胃黏膜損傷性疾病具有一定的預(yù)防作用。本研究的結(jié)果顯示，與模型組大鼠、艾灸胃經(jīng)穴組大鼠、對照點(diǎn)組大鼠、對照點(diǎn)+LY2109761組大鼠相比，艾灸胃經(jīng)穴+LY2109761組大鼠胃黏膜組織EGF、TGF-β的水平、胃黏膜細(xì)胞P53、Bcl-2、Ag-NORs、PCNA的水平均較低，其胃黏膜組織Smad3的水平較高，P＜0.05。這表明，艾灸對慢性萎縮性胃炎癌前病變具有逆轉(zhuǎn)作用。有研究指出，進(jìn)行艾灸可對機(jī)體造成一定的刺激，進(jìn)而可促進(jìn)內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)的產(chǎn)生。另外，艾灸胃經(jīng)穴可有效改善慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜細(xì)胞中增殖相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，同時增強(qiáng)其胃黏膜的預(yù)保護(hù)能力，防止其病情向胃癌發(fā)展。

綜上所述，應(yīng)用艾灸療法調(diào)控干預(yù)TGF-β/Smad信號傳導(dǎo)通路，可抑制胃癌的發(fā)生與發(fā)展。