劉 翠 劉昊昆 朱曉鳴,3 韓 冬,3 金俊琰 楊云霞 解綬啟,3

(1. 中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所淡水生態(tài)與生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430072; 2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué), 北京 100049;3. 湖北省水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料工程技術(shù)研究中心, 武漢 430072)

藻類因其蛋白質(zhì)含量高, 氨基酸配比合理, 所含脂肪多以不飽脂肪酸為主, 且富含維生素(如維生素A、B1、B2、B6、B12、VC、VE、煙酸鹽、生物素、葉酸和泛酸等), 礦物質(zhì)和類胡蘿卜素等能夠提高傳統(tǒng)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值, 最終影響人類和動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康[1]。螺旋藻(Arthrospira platensis)隸屬于藍(lán)藻門(mén), 是目前開(kāi)發(fā)利用最多的微藻之一, 在水產(chǎn)養(yǎng)殖中可用作蛋白質(zhì)替代源或功能性添加劑。在之前的研究中發(fā)現(xiàn)螺旋藻能夠替代5%的魚(yú)粉, 同時(shí)能顯著提高鸚鵡魚(yú)(Oplegnathus fasciatus)的特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率[2]。在飼料中添加1%的螺旋藻能夠顯著增強(qiáng)尼羅羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)的抵抗嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)的能力, 提高感染后的存活率[3]。同時(shí), 螺旋藻富含類胡蘿卜素能夠提高水產(chǎn)動(dòng)物的體色和色素含量[4,5]。葉黃素廣泛存在于植物中, 尤其是萬(wàn)壽菊, 主要呈橙黃色或紅色, 常用作家禽和水產(chǎn)動(dòng)物著色劑[6]。溶血卵磷脂是由卵磷脂失去一個(gè)脂肪酸基團(tuán)所形成的磷脂的統(tǒng)稱, 研究表明溶血卵磷脂能夠促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和對(duì)脂類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[7,8]。

魚(yú)類的體色是由真皮層下的色素細(xì)胞和色素顆粒相互作用形成的。魚(yú)體內(nèi)的色素主要包括黑色素和類胡蘿卜素。和其他動(dòng)物一樣, 魚(yú)類不能自身合成類胡蘿卜素, 必須從食物中獲取[9]。因此, 類胡蘿卜素缺乏會(huì)嚴(yán)重影響魚(yú)體體色, 在飼料中添加含天然或者人工合成的類胡蘿卜素改善魚(yú)體體色是水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的熱點(diǎn)。同時(shí), 隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和生活水平的不斷提高, 人們對(duì)水產(chǎn)品的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)要求越來(lái)越高。水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)因此備受關(guān)注, 但在高度密度集約化養(yǎng)殖條件下, 魚(yú)類體色異常和健康問(wèn)題頻頻出現(xiàn)。養(yǎng)殖中發(fā)生體色異常的多為無(wú)鱗魚(yú), 但近年來(lái)有鱗魚(yú)類也經(jīng)常發(fā)生體色異常。養(yǎng)殖魚(yú)類體色異常不僅降低了其商品價(jià)值,同時(shí)給養(yǎng)殖者帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

黃顙魚(yú)(Pelteobagrus fulvidraco)隸屬于鯰形目、鲿科, 黃顙魚(yú)屬, 分布于河川、湖泊、溝渠等水域中, 其肉質(zhì)細(xì)嫩、少刺無(wú)鱗、營(yíng)養(yǎng)豐富, 是一種優(yōu)質(zhì)名貴經(jīng)濟(jì)魚(yú)類。雜交黃顙魚(yú)“黃優(yōu)一號(hào)”是以連續(xù)3代選育的黃顙魚(yú)為母本, 以連續(xù)2代選育的瓦氏黃顙魚(yú)(Pelteobaggrus vachelli)為父本, 人工雜交得到的子一代。黃顙魚(yú)“黃優(yōu)一號(hào)”較好地展現(xiàn)了雜交優(yōu)勢(shì), 與黃顙魚(yú)相比, 生長(zhǎng)速度顯著提高, 同時(shí)品質(zhì)比瓦氏黃顙魚(yú)接受度更高。但在人工養(yǎng)殖條件下黃顙魚(yú)體色異常仍是比較受關(guān)注的問(wèn)題。本文主要比較研究了飼料中添加螺旋藻及葉黃素對(duì)雜交黃顙魚(yú)“黃優(yōu)一號(hào)”生長(zhǎng)、抗氧化和體色異常調(diào)控的影響, 以及在飼料中添加溶血磷脂對(duì)黃顙魚(yú)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)4組飼料, 不添加任何色素源的對(duì)照組(Con), 添加2%的螺旋藻組(SP), 添加0.2%的葉黃素組(Lut)及添加2%螺旋藻和0.1%溶血磷脂組(SPL)。飼料配方、化學(xué)組成和色素含量如表 1所示。其中螺旋藻購(gòu)于內(nèi)蒙古鄂爾多斯綠蚨源螺旋藻業(yè)有限公司, 葉黃素由湖北省武漢市大北農(nóng)水產(chǎn)科技有限公司提供, 溶血卵磷脂由珠海建明工業(yè)有限公司提供。飼料由實(shí)驗(yàn)飼料機(jī)(SLR-45, 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院漁業(yè)機(jī)械研究所)制成顆粒于60℃烘干,冷藏于4℃?zhèn)溆谩?/p>

表1 飼料配方及生化組成Tab. 1 Formulation and chemical composition of experimental diets

1.2 飼養(yǎng)管理

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前, 對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)暫養(yǎng)2周進(jìn)行馴化。暫養(yǎng)期間用商品飼料飽食投喂實(shí)驗(yàn)魚(yú), 使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)條件, 每天投喂2次, 時(shí)間為8:30和18:30;實(shí)驗(yàn)前1天, 實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h, 選取體格健壯、規(guī)格均勻的個(gè)體[體重(4.79±0.01) g], 稱重后隨機(jī)放入12個(gè)養(yǎng)殖缸中, 每缸60尾。實(shí)驗(yàn)魚(yú)先用對(duì)照組飼料飼養(yǎng)20d至體表顏色異常, 再用4種飼料飼養(yǎng)35d, 共4個(gè)處理, 每處理3平行。實(shí)驗(yàn)期間, 每天8:30和18:30投喂, 每次投喂1h至表觀飽食。

實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的圓缸(水體積250 L)中進(jìn)行。使用充氣頭在非投喂期間連續(xù)充氣增氧。實(shí)驗(yàn)期間水溫變化范圍為(28.5±1)℃。光照周期為12L﹕12D, 光照周期從8:00至20:00, 使用節(jié)能燈作為光源。每周監(jiān)測(cè)水體溶氧、氨氮和pH, 溶氧＞7.5 mg/L, 氨氮＜0.1 mg/L, pH為6.5—7.0。

1.3 攻毒實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)用菌為嗜水氣單胞菌, 由中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所健康養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室李愛(ài)華老師提供。該菌由鯽魚(yú)體內(nèi)分離出, 經(jīng)BHI固體培養(yǎng)基復(fù)蘇生長(zhǎng)后, 單克隆轉(zhuǎn)移到BHI液體培養(yǎng)基, 在30℃條件下培養(yǎng)6h, 然后在3500×g離心10min, 收獲沉淀物并用PBS沖洗3次, 獲得攻毒實(shí)驗(yàn)菌種。在正式試驗(yàn)之前, 先進(jìn)行一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn), 通過(guò)腹腔注射0.5 mL四種濃度(2×107、2×108、2×109和2×1010CFU/mL)的嗜水氣單胞菌, 確定本實(shí)驗(yàn)雜交黃顙魚(yú)在27.5℃時(shí)的3d半致死濃度為2×109CFU/mL。

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 每缸選15尾魚(yú)腹腔注射0.5 mL 2×109CFU/mL嗜水氣單胞菌進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)水溫27.5℃。統(tǒng)計(jì)攻毒后96h內(nèi)各處理組雜交黃顙魚(yú)的累計(jì)存活率。存活率計(jì)算公式如下:

存活率(%)=(存活魚(yú)總數(shù)/起始魚(yú)總數(shù))×100

1.4 實(shí)驗(yàn)取樣

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí), 隨機(jī)取3組(每組12尾)魚(yú)抹干稱重, 存于-20℃冰箱中, 用于初始體成分分析。在20d實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 將實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h后, 稱重取樣, 隨機(jī)選3個(gè)缸, 每缸取2尾魚(yú)抹干稱重, 存于-20℃冰箱中, 用于中間體重成分分析每缸取4尾拍照記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)體表顏色。在35d養(yǎng)殖結(jié)束后將實(shí)驗(yàn)魚(yú)饑餓24h后, 稱重取樣, 每缸取2尾魚(yú)抹干稱重, 存于-20℃冰箱中, 用于終末體成分分析。然后每缸取6尾魚(yú),用肝素鈉(濃度: 0.2%)抗凝的注射器尾靜脈取血,放入抗凝離心管中, 在4℃下3000 r/min離心7min,取上清血漿于-80℃冰箱保存, 用于血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定。上述6尾魚(yú)抽完血后冰盤(pán)解剖, 取背皮和腹皮用滅菌后的錫箔紙包起來(lái)于-80℃冰箱保存, 用于色素含量的測(cè)定。另外每缸取3尾魚(yú)麻醉后用柯尼卡-美能達(dá)CR400色差計(jì)(Japan)進(jìn)行皮膚顏色的測(cè)定, 在每尾魚(yú)左側(cè)背部和腹部的同一位置(分別為背鰭下部和腹部)測(cè)量2次, 在每次測(cè)量中, 色差計(jì)的探頭需旋轉(zhuǎn)180度, 將2次測(cè)量的結(jié)果取平均值。L表示亮度, +a*表示紅色, -a*表示綠色, +b*表示黃色, -b*表示藍(lán)色[10]。C表示色飽和度, 計(jì)算公式為C=(a*2+b*2)1/2[11]。最后拍取各個(gè)處理組實(shí)驗(yàn)魚(yú)照片。

1.5 樣品分析

全魚(yú)和飼料的生化組成測(cè)定參考AOAC[12]的方法, 水分是在105℃烘干至恒重測(cè)得; 粗蛋白采用凱氏定氮儀(2300 Kjeltec Analyzer Unit, FOSS TECATOR, Sweden)測(cè)定; 粗脂肪用索氏抽提法(Soxtoc system HT6, Tecator, Haganas, Sweden)以乙醚為溶劑測(cè)定; 灰分在馬福爐(中國(guó)湖北英山縣建立電爐制造廠)中550℃下充分灼燒測(cè)得。

皮膚和飼料葉黃素的測(cè)定分別根據(jù)Karadas等[13]和Ferreira等[14]描述的方法略做修改。皮膚前處理如下: 準(zhǔn)確稱取皮膚樣品200—300 mg(精確到0.0001 g)放入10 mL離心管中, 加入0.7 mL 5% NaCl溶液和1 mL乙醇, 后用組織勻漿機(jī)勻漿3min, 勻漿時(shí)加入2 mL正己烷, 勻漿后加入2 mL正己烷反復(fù)沖洗勻漿機(jī)上殘留的組織樣品, 之后合并提取劑,在4℃ 4600 r/min條件下離心10min, 取上清液并放入氮吹儀吹干, 殘留物復(fù)溶于色譜級(jí)甲醇﹕甲基叔丁基醚=86﹕14(v/v), 溶解液經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾, 后上機(jī)(Waters e2695, USA)分析。飼料樣品的前處理: 準(zhǔn)確稱取飼料樣品1 g(精確到0.001), 加入蒸餾水1 mL, 漩渦振蕩1min后加3 mL提取劑(正己烷﹕丙酮﹕乙醇﹕甲苯=50﹕35﹕30﹕35,v/v/v/v), 漩渦振1 min, 于黑暗處放置16h。之后加入40%氫氧化鉀-甲醇溶液皂化飼料中的葉黃素酯, 然后加入3 mL正己烷, 于黑暗處放置1h, 加入3 mL 10%硫酸鈉溶液,放置1h, 收集正己烷層并準(zhǔn)確記錄體積。用移液器吸取200 μL正己烷層, 氮吹儀吹干, 殘留物復(fù)溶于色譜級(jí)甲醇﹕甲基叔丁基醚= 86﹕14(v/v), 溶解液經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾, 待上機(jī)(Waters e2695, USA)進(jìn)樣分析。高效液相色譜用的色譜柱是Waters YMC Carotenoid C30 column (5 μm, 4.6 mm×250 mm), 流動(dòng)相A是甲醇﹕甲基叔丁基醚﹕水=810﹕150﹕40, 流動(dòng)相B是甲醇﹕甲基叔丁基醚= 60﹕900。

血漿超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化氫酶(GPX)、還原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的測(cè)定均使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒。

1.6 數(shù)據(jù)處理

使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn); 方差齊性后, 進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA); 若各實(shí)驗(yàn)組間差異顯著, 則進(jìn)行Duncan’s多重比較;P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)和飼料利用

如表 2所示, 對(duì)照飼料養(yǎng)殖20d后各個(gè)處理組的實(shí)驗(yàn)魚(yú)的末重沒(méi)有任何差異。后期不同飼料投喂35d后, 各個(gè)處理組間特定生長(zhǎng)率(SGR)和攝食率(FR)均沒(méi)有顯著差異(P＞0.05); 但螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組飼料效率(FE)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05), 其中螺旋藻加溶血卵磷脂組飼料效率最高(P＜0.05)。對(duì)照組的蛋白沉積率(PRE)顯著低于另外3個(gè)處理組(P＜0.05), 同樣的, 螺旋藻加溶血卵磷脂組蛋白沉積率最高(P＜0.05)。

表2 不同實(shí)驗(yàn)飼料對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)和飼料利用的影響Tab. 2 Effects of different diets on growth and feed utilization of yellow catfish (n=3)

2.2 全魚(yú)基本組分

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 各組間全魚(yú)水分、蛋白和脂肪含量沒(méi)有顯著差異(P＞0.05); 葉黃素和螺旋藻加溶血卵磷脂組灰分含量顯著低于對(duì)照組(P＞0.05)(表 3)。

表3 不同實(shí)驗(yàn)飼料對(duì)黃顙魚(yú)的魚(yú)體組成的影響Tab. 3 Effects of different diets on body chemical composition of yellow catfish (%; n=3)

2.3 魚(yú)體體色和皮膚色素含量

在養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后(表 4), 各組間實(shí)驗(yàn)魚(yú)皮膚亮度沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05); 螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組皮膚黃度顯著高于另外兩組(P＜0.05);同時(shí), 螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組背部皮膚紅度顯著高于對(duì)照組(P＜0.05); 螺旋藻加溶血卵磷脂組腹部皮膚紅度顯著高于對(duì)照組(P＜0.05); 螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組實(shí)驗(yàn)魚(yú)皮膚顏色飽和度顯著高于另外兩組(P＜0.05)。在養(yǎng)殖初期, 對(duì)照組飼料養(yǎng)殖20d和后期不同飼料養(yǎng)殖35d后實(shí)驗(yàn)魚(yú)照片如圖 1所示。

圖1 不同養(yǎng)殖階段和不同處理組的實(shí)驗(yàn)魚(yú)Fig. 1 The fish of different stage and different treatment groups

表4 不同實(shí)驗(yàn)飼料對(duì)黃顙魚(yú)皮膚的顏色的影響Tab. 4 Body color of yellow catfish fed different experimental diets (n=9)

對(duì)照飼料養(yǎng)殖20d和各處理組實(shí)驗(yàn)魚(yú)背部皮膚葉黃素含量沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05; 表 5); 螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組腹部皮膚葉黃素含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表5 不同實(shí)驗(yàn)飼料對(duì)黃顙魚(yú)皮膚葉黃素含量的影響Tab. 5 Effects of different diets on skin lutein contents of yellow catfish (μg/g)

2.4 血液抗氧化指標(biāo)和攻毒后存活率

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 對(duì)照組超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著低于另外3個(gè)處理組(P＜0.05; 表 6);各組過(guò)氧化氫酶(CAT)活性沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05); 螺旋藻加溶血卵磷脂組谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)活性和還原型谷胱甘肽(GSH)含量顯著高于葉黃素和對(duì)照組(P＜0.05); 螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組的丙二醛(MDA)含量顯著低于另外2個(gè)處理組(P＜0.05)。

表6 不同實(shí)驗(yàn)飼料對(duì)黃顙魚(yú)血漿抗氧化產(chǎn)物和抗氧化酶活性的影響Tab. 6 Effects of different diets on oxidant and antioxidant activities in the plasma of yellow catfish (n=6)

如圖 2所示, 攻毒96h后螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂組的實(shí)驗(yàn)魚(yú)累計(jì)存活率顯著高于葉黃素和對(duì)照組(P＜0.05)。

圖2 不同處理組對(duì)黃顙魚(yú)攻毒后96h累計(jì)存活率的影響Fig. 2 The cumulative survival rate (%) of yellow catfish fed with different diets challenging with A. hydrophila for 96h

3 討論

3.1 生長(zhǎng)和飼料利用

本研究前期使用不補(bǔ)充任何色素添加劑的對(duì)照組飼料投喂雜交黃顙魚(yú), 20d后各個(gè)處理間的實(shí)驗(yàn)魚(yú)體重沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在后期35d用對(duì)照組飼料及分別添加葉黃素、螺旋藻和螺旋藻加溶血卵磷脂的飼料繼續(xù)投喂雜交黃顙魚(yú), 對(duì)雜交黃顙魚(yú)生長(zhǎng)和攝食率的影響并不顯著, 但造成飼料效率和蛋白沉積率的差異。螺旋藻作為新型水產(chǎn)動(dòng)物飼料原料已經(jīng)引起了較高的關(guān)注, 在High density(Salmo trutta caspius)飼料中添加2.64%的螺旋藻替代2%的魚(yú)粉對(duì)魚(yú)體的生長(zhǎng)和飼料利用均無(wú)顯著影響, 但當(dāng)添加量達(dá)到3.96%替代4%的魚(yú)粉時(shí), 實(shí)驗(yàn)魚(yú)的特定生長(zhǎng)率和飼料轉(zhuǎn)化效率顯著提高[15], 說(shuō)明螺旋藻可以替代水產(chǎn)動(dòng)物飼料中的魚(yú)粉, 從而減輕魚(yú)粉供不應(yīng)求的壓力。在飼料中添加螺旋藻的含量高達(dá)75%對(duì)尼羅羅非魚(yú)的生長(zhǎng)沒(méi)有負(fù)面影響, 而且添加量在30%左右時(shí), 魚(yú)體的生長(zhǎng)達(dá)到最大值[16]。有學(xué)者報(bào)道螺旋藻能夠改善動(dòng)物腸道微生物平衡, 從而促進(jìn)食物消化吸收, 最終提高動(dòng)物的生長(zhǎng)[4,5]。卵磷脂可以提高飼料轉(zhuǎn)化率, 促進(jìn)脂質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn),提高魚(yú)類對(duì)脂肪和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[17]。在本研究中, 飼料中添加0.1%的溶血卵磷脂能顯著提高雜交黃顙魚(yú)的飼料效率, 于本研究結(jié)果一致的是在異育銀鯽飼料中添加0.1%的溶血卵磷脂同樣能提高異育銀鯽的飼料效率[7]。在對(duì)建鯉(Cyprinus carpiovar. Jian)的研究中發(fā)現(xiàn), 添加0.1%的乳化劑溶血卵磷脂實(shí)驗(yàn)魚(yú)的飼料效率相比于對(duì)照組顯著提高17.9%[18], 相似的是在本研究中添加0.1%溶血卵磷脂相比于只添加2%的螺旋藻處理組, 黃顙魚(yú)的飼料效率顯著提升30.3%。葉黃素是家禽和水產(chǎn)飼料中常用的著色劑, 較多的研究結(jié)果顯示其對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用[19,20], 這與本研究結(jié)果一致。

3.2 全魚(yú)基本組分

在本研究中, 葉黃素、螺旋藻和溶血卵磷脂的添加對(duì)雜交黃顙魚(yú)的體蛋白和體脂肪均無(wú)顯著影響, 這與在淡水蝦(Macrobrachium rosenbrgii)[21]、尼羅羅非魚(yú)[22,23]和奧尼羅非魚(yú)(Oreochromis aureus♂×Oreochromis niloticus♀)[24]中的研究結(jié)果一致。但之前研究表明添加28.79%的螺旋藻能夠降低魚(yú)體的脂肪含量[25], 是因?yàn)槁菪甯缓环N具有抗氧化和降脂功能的多酚類物質(zhì)[26—28]。此外, 螺旋藻富含多不飽和脂肪酸, 能夠降低膽固醇和甘油三酯在魚(yú)體肝臟中的大量堆積, 從而降低體脂的含量[29]。

3.3 魚(yú)體體色

魚(yú)類的體色是影響其品質(zhì)的重要因素之一, 直接影響?zhàn)B殖魚(yú)類的價(jià)格和消費(fèi)者的選擇。野生黃顙魚(yú)體表顏色為黃黑相間的黃褐色, 但在人工養(yǎng)殖過(guò)程中, 配合飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量, 色素的缺乏及養(yǎng)殖環(huán)境和魚(yú)體自身的健康狀況均會(huì)對(duì)魚(yú)類的體色造成影響[30]。在本研究中, 前期由于飼料中缺乏色素的補(bǔ)充造成雜交黃顙魚(yú)體色退化, 在后期飼料中添加葉黃素, 螺旋藻及溶血卵磷脂對(duì)雜交黃顙魚(yú)皮膚的亮度沒(méi)有影響, 但可以增加魚(yú)體皮膚的黃度、紅度和飽和度, 其中螺旋藻的提升效果更為顯著, 說(shuō)明螺旋藻能夠更快效的改善魚(yú)體體色, 提高水產(chǎn)動(dòng)物的品質(zhì), 從而增加水產(chǎn)品的價(jià)值。螺旋藻作為天然的類胡蘿卜素來(lái)源, 在其他研究中也得到證實(shí)能夠增強(qiáng)魚(yú)體的體色和肉色[31,32]。葉黃素同樣能夠改善魚(yú)類的體色, 在飼料中添加葉黃素和蝦青素混合物能夠增強(qiáng)大黃魚(yú)皮膚的黃度值, 改善魚(yú)體的體色[33]。但本研究的結(jié)果表明, 在雜交黃顙魚(yú)的體色異常的情況下, 飼料中添加螺旋藻能夠比葉黃素更高效的改善魚(yú)體的體色。與對(duì)照組相比, 螺旋藻飼料中添加溶血卵磷脂能夠顯著改善魚(yú)體的體色, 但與只添加螺旋藻的處理組相比, 差異并不顯著。

在飼料中添加螺旋藻及溶血卵磷脂, 雜交黃顙魚(yú)腹部皮膚葉黃素的含量顯著高于對(duì)照組, 添加葉黃素也能夠增加腹部皮膚的葉黃素含量, 但效果并不顯著。在本研究中, 雖然葉黃素飼料中的葉黃素含量高于螺旋藻飼料, 但最終葉黃素在雜交黃顙魚(yú)皮膚中的沉積量卻相反, 可能是由于螺旋藻飼料中葉黃素更易被魚(yú)體吸收。在沙鰍(Botia dario)的研究中發(fā)現(xiàn), 飼料中添加10%的螺旋藻可以顯著增加魚(yú)體皮膚和肌肉中的類胡蘿卜素含量[34]。葉黃素屬于脂溶性類胡蘿卜素, 和其他類胡蘿卜素一樣,魚(yú)體不能自身合成, 必須從食物中獲取[35]。葉黃素在動(dòng)物體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收, 需要脂質(zhì)的參與, 最終由高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)轉(zhuǎn)運(yùn)到靶組織中[36]。溶血卵磷脂是一種生物乳化劑, 能夠有效促進(jìn)乳糜微粒的形成, 增強(qiáng)脂肪的吸收和利用,進(jìn)而有助于葉黃素的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)[24]。

3.4 抗氧化能力和存活率

近年來(lái), 螺旋藻在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用不只是作為魚(yú)粉的替代源, 同時(shí)作為一種功能型添加劑越來(lái)越受關(guān)注。螺旋藻因其富含藻藍(lán)蛋白、類胡蘿卜素和藻多糖等生物活性物質(zhì), 能夠增強(qiáng)抗氧化酶的活性, 防止脂質(zhì)過(guò)氧化和DNA損傷, 清除自由基[37]。在本研究中, 飼料中添加螺旋藻能夠增強(qiáng)雜交黃顙魚(yú)血漿超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)活性, 同時(shí)增加還原型谷胱甘肽(GSH)含量, 降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量。與本研究一致, 螺旋藻能夠顯著提高羅非魚(yú)GSH含量,GPX和SOD活性降低的現(xiàn)象, 通過(guò)清除自由基和提高魚(yú)體的抗氧化性能使溴氰菊酯對(duì)魚(yú)體的毒性最小化[37]。同時(shí), 在石斑魚(yú)(Plectropomus leopardus)的飼料中添加螺旋藻能夠顯著增強(qiáng)魚(yú)體的總抗氧化能力(T-AOC), 降低丙二醛的含量, 顯著提高魚(yú)體感染哈維式弧菌(V. harveyi)后的存活率[38]。此外,研究表明魚(yú)體的抗氧化狀態(tài)和魚(yú)體體色具有相關(guān)性, 虹鱒肝臟的非酶和酶抗氧化反應(yīng)都與皮膚和肌肉的紅度值顯著相關(guān)[39], 同樣在本研究中抗氧化能力高的實(shí)驗(yàn)魚(yú)相對(duì)應(yīng)黃度值也顯著提高, 說(shuō)明提高魚(yú)體的抗氧化能力同時(shí)可以促進(jìn)魚(yú)體著色。在本文中, 螺旋藻能夠顯著提高雜交黃顙魚(yú)感染嗜水氣單胞菌后的存活率, 提高魚(yú)體對(duì)病菌的抵抗能力。這些結(jié)果表明螺旋藻可以作為水產(chǎn)動(dòng)物的免疫增強(qiáng)劑。在飼料中添加葉黃素和蝦青素等比例混合物, 能夠增強(qiáng)大黃魚(yú)的總抗氧化能力, SOD和CAT(過(guò)氧化氫酶)活性, 降低MDA含量, 說(shuō)明飼料中添加螺旋能夠增強(qiáng)魚(yú)體抗氧化能力[33]。此外, 葉黃素能夠提高金魚(yú)(Carassius auratus)幼魚(yú)養(yǎng)殖中的存活率[40], 這與本研究中的結(jié)果相似。

4 結(jié)論

在本研究中, 飼料中添加0.2%葉黃素、2%螺旋藻及復(fù)合添加2%螺旋藻和0.1%的溶血磷脂對(duì)雜交黃顙魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)沒(méi)有負(fù)面影響, 并且可以增加飼料效率和蛋白沉積率; 葉黃素、螺旋藻和溶血卵磷脂的添加對(duì)雜交黃顙魚(yú)魚(yú)體水分, 蛋白和脂肪含量沒(méi)有影響; 飼料中添加2%螺旋藻及復(fù)合添加2%螺旋藻和0.1%的溶血磷脂可以增加雜交黃顙魚(yú)皮膚的黃度, 紅度和飽和度及雜交黃顙魚(yú)皮膚中葉黃素含量, 同時(shí)可以增強(qiáng)雜交黃顙魚(yú)抗氧化能力,降低魚(yú)體血漿中丙二醛含量。此外葉黃素、螺旋藻和溶血卵磷脂的添加均可以提高雜交黃顙魚(yú)感染嗜水氣單胞菌后的存活率, 但螺旋藻添加組的效果更為顯著。綜上所述, 雜交黃顙魚(yú)“黃優(yōu)一號(hào)”在前期投喂缺乏色素的飼料造成體色異常后, 飼料中添加螺旋藻或配合添加溶血卵磷脂比葉黃素更有效地改善魚(yú)體的體色, 同時(shí)更能提高黃顙魚(yú)的抗氧化能力和抗病力。