王 婧 李光燃 肖玉欣 鄧遠(yuǎn)坤 唐宇龍 譚碧娥

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128)

腸黏膜上皮細(xì)胞終身不斷自我更新，其增殖和分化是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過程，新生的上皮細(xì)胞沿著隱窩絨毛軸向上遷移，從未分化的細(xì)胞到活躍增殖的隱窩細(xì)胞，直到成熟的具有吸收功能的絨毛上皮細(xì)胞[1]。前期研究證明，仔豬腸道黏膜氨基酸的利用，在黏膜代謝和損傷修復(fù)中具有關(guān)鍵作用[2-9]。多胺(腐胺、亞精胺和精胺)及其主要前體物質(zhì)(精氨酸、谷氨酰胺和脯氨酸等)在仔豬腸道黏膜細(xì)胞增殖分化和損傷修復(fù)中發(fā)揮重要的作用[2，6-9]。多胺與DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的生物代謝有關(guān)，在細(xì)胞分化、細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用；對(duì)新生仔豬細(xì)胞增殖和分化至關(guān)重要，是小腸黏膜生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟所必需的物質(zhì)[10]，可促進(jìn)腸腺隱窩細(xì)胞的增殖、分化和移行，促進(jìn)腸黏膜的損傷修復(fù)[11]。仔豬腸道多胺代謝與腸黏膜的生長(zhǎng)密切相關(guān)，可作為腸道損傷修復(fù)的指征[12]。但是，多胺作為氨基酸的代謝產(chǎn)物，如何被腸黏膜感應(yīng)利用從而調(diào)控黏膜增殖的機(jī)制尚不清楚。

研究表明，氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體不僅具有轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的功能，并且可以通過感受細(xì)胞內(nèi)外氨基酸含量等環(huán)境變化對(duì)胞內(nèi)一系列代謝活動(dòng)進(jìn)行調(diào)節(jié)[12-13]。某些氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體能通過轉(zhuǎn)運(yùn)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氨基酸含量，從而調(diào)控細(xì)胞內(nèi)氨基酸感受體下游信號(hào)，發(fā)揮氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體和受體的雙重功能[14-15]。Na+依賴性中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體2(SNAT2)是氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)感受體的典型代表，前期已克隆得到豬SNAT2的編碼基因，發(fā)現(xiàn)在仔豬十二指腸、空腸和回腸黏膜中均有表達(dá)，而且許多調(diào)控多胺代謝的前體氨基酸均能調(diào)控SNAT2的表達(dá)[16]。進(jìn)一步證實(shí)，SNAT2通過哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號(hào)通路調(diào)控腸上皮細(xì)胞增殖和蛋白質(zhì)合成；且抑制SNAT2可改變哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白C1(mTORC1)的上游調(diào)控因子基因的表達(dá)[17]。因此，本試驗(yàn)選用腐胺(多胺的一種)以及能代謝生成多胺的前體物質(zhì)脯氨酸和N-氨甲酰谷氨酸(NCG)，通過灌服哺乳仔豬，探討其調(diào)控SNAT2表達(dá)及其營(yíng)養(yǎng)感應(yīng)信號(hào)通路的作用，以期為仔豬腸道氨基酸利用和健康調(diào)控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取遺傳背景相近(精液來源相同)、胎次相同的4窩“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交仔豬32頭，按照同窩和體重相近的原則配對(duì)分成4組，每組8頭豬，從出生當(dāng)日開始分別灌服同體積生理鹽水(對(duì)照組)、腐胺(5 mg/kg BW)、脯氨酸(25 mg/kg BW)和NCG(8 mg/kg BW)，每天2次。腐胺的用量是基于Grant等[18]報(bào)道結(jié)果，脯氨酸的用量是母乳2倍[19]，NCG的用量是基于Wu等[20]的報(bào)道結(jié)果。母豬在相同飼養(yǎng)條件下飼喂同一飼糧(玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧)，仔豬正常哺乳。仔豬14日齡斷奶，飼喂相同的乳豬料，斷奶后3 d，屠宰采樣。

1.2 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早晨空腹，試驗(yàn)豬稱取體重，頸靜脈處穿刺采血5 mL，靜置30 min后3 000×g離心15 min，分離血清，-80 ℃凍存，待測(cè)膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)含量。試豬放血屠宰，分離空腸和回腸，生理鹽水沖洗后，刮取黏膜，迅速放入液氮速凍后，-80 ℃保存，用于游離氨基酸含量檢測(cè)以及RNA和蛋白質(zhì)的提取。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，所有試驗(yàn)豬空腹稱重，計(jì)算平均日增重(ADG)。

1.3.2 腸黏膜游離氨基酸含量測(cè)定

稱取空腸黏膜組織0.5 g，加入5 mL 0.1 mol/L HCl勻漿，5 000×g離心10 min，取上清液0.5 mL，并加入等體積的8%磺基水楊酸，混勻，4 ℃靜止過夜。12 000×g離心10 min，吸取上清，再次12 000×g離心10 min，取上清過濾膜后用LC-6A型高效液相色譜儀(日本島津公司)測(cè)定氨基酸含量。

1.3.3 血清CCK含量測(cè)定

血清中CCK含量采用CCK酶聯(lián)免疫試劑盒(EIA-CCK-1，RayBiotech)測(cè)定。所有試劑在25 ℃室溫下平衡30 min后制備，血清樣品避免反復(fù)凍融，按照說明書操作步驟檢測(cè)。

1.3.4 mRNA相對(duì)表達(dá)量測(cè)定

采用Trizol試劑(Invitrogen，美國(guó))提取空腸、回腸黏膜樣品中的總RNA。使用無菌、無RNase的DNase Ⅰ(Promega 公司，德國(guó))處理，去除總RNA樣品中存在的痕量基因組DNA。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司，大連)說明書進(jìn)行操作,將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)GenBank中登入的基因序列，依據(jù)引物設(shè)計(jì)原則，采用Primer5.0 軟件進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)(表1)。引物序列由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為模板，采用SYBR-Green Ⅰ染料(Molecular Probes，Eugene，OR)法，使用ABI 7900HT-PCR儀(ABI Biotechnology，美國(guó))對(duì)樣品進(jìn)行擴(kuò)增，并運(yùn)用配套軟件(Applied Biosystem，SDS2.3)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。以最小循環(huán)閾值(Ct)和最高熒光值為標(biāo)準(zhǔn)，分別對(duì)循環(huán)條件、退火溫度、引物濃度進(jìn)行優(yōu)化。分別檢測(cè)空腸、回腸黏膜組織中相關(guān)基因表達(dá)量。

表1 引物序列

1.3.5 蛋白質(zhì)表達(dá)水平測(cè)定

采用Western blot檢測(cè)空腸和回腸黏膜組織SNAT2蛋白表達(dá)水平。取500～1 000 mg空腸和回腸黏膜組織樣品置于放有液氮的研缽中磨碎，裝至放有600 μL蛋白裂解液(RIPA)的1.5 mL離心管中，劇烈振蕩，在4 ℃冰箱中靜置1～2 h，4 ℃、12 000×g離心15 min，取上清。以牛血清蛋白(BSA)為標(biāo)準(zhǔn)品，采用雙氯喹酸法測(cè)定蛋白濃度。用5×十二烷基硫酸鈉(SDS)樣品緩沖液稀釋上清液(含組織蛋白)，在沸水中加熱5 min。將溶液冷凍后，采用Western blot檢測(cè)空腸和回腸黏膜組織SNAT2蛋白表達(dá)水平。以下一抗用于蛋白定量: SNAT2(1∶1 000，Santa Cruz Biotechnology)；β-肌動(dòng)蛋白(β-actin,1∶1 000，Cell Signaling Technology)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

各基因表達(dá)量以β-actin為內(nèi)參，對(duì)獲得的信號(hào)、數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用2-ΔΔCt法對(duì)定量結(jié)果進(jìn)行計(jì)算分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差(ANOVA)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，差異顯著者采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

3.1 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，哺乳仔豬初始體重一致，14日齡斷奶3 d后，哺乳期灌服腐胺和脯氨酸的仔豬終末體重顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。與對(duì)照組相比，灌服腐胺、脯氨酸和NCG均顯著提高了仔豬的平均日增重(P<0.05)。

表2 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺仔豬腸黏膜游離氨基酸含量的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，腐胺組仔豬空腸黏膜精氨酸含量顯著降低(P<0.05)；NCG組仔豬空腸黏膜精氨酸含量顯著升高(P<0.05)；此外，灌服脯氨酸和NCG顯著降低了空腸黏膜丙氨酸含量(P<0.05)。

表3 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬空腸黏膜游離氨基酸含量的影響

2.3 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬腸道SNAT2 mRNA相對(duì)表達(dá)量和蛋白表達(dá)水平的影響

由圖1和圖2可知，與對(duì)照組相比，哺乳期灌服NCG顯著提高了斷奶后第3天仔豬回腸黏膜SNAT2 mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)；灌服腐胺和NCG均顯著提高了空腸和回腸黏膜SNAT2蛋白表達(dá)水平(P<0.05)，但灌服脯氨酸顯著降低了空腸和回腸黏膜SNAT2蛋白表達(dá)水平(P<0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下同圖。

圖2 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬小腸黏膜SNAT2蛋白表達(dá)水平的影響

2.4 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬腸道氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)感應(yīng)相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由表4可知，在空腸黏膜中，與對(duì)照組相比，灌服脯氨酸和NCG均顯著提高仔豬PAT1、CasR、PLCβ2和T1R3 mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)；腐胺組PAT1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。

表4 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬空腸黏膜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)感應(yīng)相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由表5可知，在回腸黏膜中，與對(duì)照組相比，脯氨酸組和NCG組y+LAT2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，而EAAC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，腐胺組y+LAT2 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，而T1R3 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。

表5 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬回腸黏膜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)感應(yīng)相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

2.5 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬血清CCK含量及小腸黏膜膽囊收縮素受體(CCKR)mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖3和圖4可知，與對(duì)照組相比，NCG組仔豬血清中CCK含量顯著高于脯氨酸組(P<0.05)，且NCG組仔豬空腸黏膜CCKRmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他各組(P<0.05)。

圖3 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬血清中CCK的含量的影響

圖4 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬空腸黏膜CCKR mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

2.6 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺仔豬腸道m(xù)TOR信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由表6可知，在空腸黏膜中，與對(duì)照組相比，哺乳期灌服NCG顯著提高了仔豬MAP4K3和mTOR的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)。

表6 N-氨甲酰谷氨酸、脯氨酸及腐胺對(duì)仔豬空腸黏膜mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

3 討 論

研究表明，多胺對(duì)正常生理?xiàng)l件下的腸道上皮細(xì)胞完整性的維持具有重要意義；在腸道上皮細(xì)胞損傷后，需要多胺作為瞬時(shí)能量來源協(xié)助修復(fù)[21]。雖然母豬初乳中多胺的含量很高，但隨著日齡的增長(zhǎng)逐漸降低[22]。因此，外源添加多胺物質(zhì)對(duì)腸道黏膜的生長(zhǎng)發(fā)育和修復(fù)損傷具有重要作用[21]。精氨酸被認(rèn)為是多胺合成的主要前體，然而仔豬小腸中精氨酸酶活性較低，不足以催化精氨酸合成充足的多胺[23]。脯氨酸可經(jīng)鳥氨酸脫羧酶分解代謝生成多胺，且仔豬小腸中鳥氨酸脫羧酶活性較高，故脯氨酸被認(rèn)為是仔豬腸道多胺合成的主要前體物質(zhì)[24]。NCG作為N-乙酰谷氨酸的類似物，能促進(jìn)內(nèi)源性精氨酸及精氨酸代謝產(chǎn)物的合成，如通過尿素循環(huán)產(chǎn)生多胺[25]。有研究認(rèn)為，NCG可能有助于克服精氨酸向幼齡動(dòng)物機(jī)體中傳遞的實(shí)際限制[26-27]。多胺之間可以互相轉(zhuǎn)化，腐胺可轉(zhuǎn)化為精胺和亞精胺[28]。因此，本試驗(yàn)選用多胺或促進(jìn)多胺生成的前體物，通過灌服哺乳仔豬，以期提高仔豬腸道氨基酸的利用，促進(jìn)提早成熟，緩解斷奶應(yīng)激。多胺調(diào)控仔豬腸道發(fā)育的作用在我們已發(fā)表的研究中得到證實(shí)[20]。本試驗(yàn)中，哺乳期灌服腐胺、脯氨酸和NCG均顯著提高了仔豬平均日增重，這與多胺和NCG促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)速率的前期研究相符[5,29]，同時(shí)下文重點(diǎn)討論的血清氨基酸含量與氨基酸感應(yīng)信號(hào)通路的研究結(jié)果也支持這一結(jié)論。

首先，灌服NCG顯著增加了仔豬空腸黏膜中精氨酸的含量，同時(shí)提高了回腸黏膜SNAT2的mRNA相對(duì)表達(dá)量；灌服腐胺和NCG顯著提高了空腸和回腸黏膜SNAT2的蛋白表達(dá)水平。外源補(bǔ)充NCG能夠促進(jìn)仔豬內(nèi)源精氨酸的合成[30]。有研究表明，當(dāng)增加氨基酸供應(yīng)時(shí)，SNAT2的mRNA及蛋白表達(dá)水平以一種依賴mTOR通路的途徑顯著提高[31]，這可能是對(duì)于增加的胞內(nèi)氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)壓力的一種適應(yīng)性機(jī)制[32]。但是，脯氨酸作為SNAT2的底物，降低了空腸和回腸黏膜中的SNAT2蛋白表達(dá)水平，表現(xiàn)出對(duì)SNAT2的抑制作用。這也許與底物和SNAT2轉(zhuǎn)運(yùn)Km系數(shù)相關(guān)[33]。腐胺、脯氨酸和NCG分別上調(diào)了空腸PAT1及回腸EAAC1的mRNA相對(duì)表達(dá)量。PAT1是Na+依賴的亞氨基轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體，主要負(fù)責(zé)脯氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)[34]。外源補(bǔ)充脯氨酸可提高PAT1的表達(dá)[35]。EAAC1則主要是Na+依賴的小腸谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體[36]。NCG可調(diào)控谷氨酸向精氨酸的代謝，影響谷氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)[5, 27]。灌喂脯氨酸并未顯著增加空腸黏膜中脯氨酸的含量，這可能由于脯氨酸進(jìn)入腸道細(xì)胞后直接代謝生成多胺[12]。

此外，CasR和T1R1/T1R3是重要的氨基酸感應(yīng)受體，屬于哺乳類GPCRs家族[37]。灌服脯氨酸和NCG顯著上調(diào)了空腸黏膜中CasR與T1R3的mRNA相對(duì)表達(dá)量，灌服腐胺顯著上調(diào)了回腸黏膜中T1R3的mRNA相對(duì)表達(dá)量。之前的報(bào)道顯示，底物的刺激，如胞外的Ca2+和氨基酸等，可以使得Ca2+感應(yīng)受體CasR表達(dá)上調(diào)[38]。T1R1/T1R3作為直接感受機(jī)體能量狀態(tài)和胞外氨基酸濃度的感受器，有研究表明基因敲除該感受體后會(huì)直接影響氨基酸含量作為信號(hào)傳遞到mTORC1的過程[39]。本研究結(jié)果提示多胺及其前體氨基酸對(duì)CasR和T1R1/T1R3感應(yīng)受體具有調(diào)控作用。并且，NCG與脯氨酸可能通過影響氨基酸含量改變氨基酸感應(yīng)受體的表達(dá)[40]。已有研究表明，L-谷氨酸和L-精氨酸可以通過激活 T1R1/T1R3來提高胰島素的分泌[41-42]。具體機(jī)制可能為T1R1/T1R3通過Gg，激活PLCβ2，產(chǎn)生DAG和IP3，IP3與IP3R3結(jié)合，使胞內(nèi)儲(chǔ)存的Ca2+被釋放出來，進(jìn)而激活TRPM5通道，Na+流入細(xì)胞內(nèi)，最終導(dǎo)致膜去極化和神經(jīng)遞質(zhì)釋放[15,32,38]。

轉(zhuǎn)運(yùn)載體介導(dǎo)的氨基酸感應(yīng)機(jī)制是其作為生電轉(zhuǎn)運(yùn)感受體，誘導(dǎo)膜去極化和激素分泌[42]。氨基酸刺激可以轉(zhuǎn)換成化學(xué)信號(hào)，通過轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白構(gòu)象的改變或氨基酸與轉(zhuǎn)運(yùn)載體的簡(jiǎn)單結(jié)合引起信號(hào)傳導(dǎo)[43-44]。感應(yīng)信號(hào)主要通過與味覺受體結(jié)合提高胞內(nèi)游離Ca2+濃度進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放[45]。胞外信號(hào)也可與G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的結(jié)合，激活磷脂酶Cβ2(PLCβ2)，使4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)發(fā)生水解作用，導(dǎo)致了位于細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)膜上的IP3-門控鈣離子通道打開，儲(chǔ)備的Ca2+釋放，進(jìn)而激活瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白5(TRPM5)從而促進(jìn)膜的去極化。通過檢測(cè)以上營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)感應(yīng)信號(hào)途徑相關(guān)的基因表達(dá)及激素分泌的水平發(fā)現(xiàn)灌服脯氨酸和NCG提高了空腸PLCβ2的表達(dá)量，同時(shí)NCG促進(jìn)了CCK的分泌。CCK作為一種腸道激素，能夠調(diào)節(jié)胰島素的分泌、胃排空和食欲[46]。CCK的分泌受到多種因素影響，氨基酸能夠通過激活CasR促進(jìn)CCK的分泌[47]。本研究結(jié)果顯示，NCG和脯氨酸能夠正向調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)利用和相關(guān)激素的分泌。有研究證實(shí)，飼糧中添加NCG 10 d后環(huán)江香豬的平均日增重顯著高于基礎(chǔ)飼糧組，可能是由于NCG可以促進(jìn)仔豬腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而改善機(jī)體的氨基酸平衡和蛋白質(zhì)代謝，從而提高仔豬的生長(zhǎng)性能[48-49]。

氨基酸刺激mTOR信號(hào)通路的表達(dá)。NCG對(duì)mTOR信號(hào)通路基因的表達(dá)調(diào)控主要反映在MAP4K3和mTORmRNA相對(duì)表達(dá)量的升高。MAP4K3是一個(gè)保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，參與到多種信號(hào)通路連接，包括免疫缺陷同系物(IMD)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、雷帕霉素受體C1(TORC1)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的信號(hào)通路[5,50]。有研究表明MAP4K3的活性直接受到氨基酸含量的調(diào)節(jié)，且不是通過胰島素的作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)mTORC1的表達(dá)[51]。然而，腐胺及脯氨酸對(duì)MAP4K3及mTOR信號(hào)通路的mRNA相對(duì)表達(dá)量無顯著作用。這可能與NCG，而非腐胺和脯氨酸，顯著增加了仔豬腸道黏膜中精氨酸含量有關(guān)。

4 結(jié) 論

哺乳期灌服腐胺、脯氨酸和NCG對(duì)仔豬腸道氨基酸含量、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體及感應(yīng)信號(hào)的調(diào)控存在差異性。與腐胺和脯氨酸相比，NCG的作用更加明顯。NCG可提高仔豬空腸黏膜中精氨酸含量，促進(jìn)SNAT2的相對(duì)表達(dá)量，并上調(diào)多種氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體和感應(yīng)受體的相對(duì)表達(dá)量，刺激胃腸激素CCK的分泌以及mTOR信號(hào)通路的相對(duì)表達(dá)量。脯氨酸的作用主要表現(xiàn)在調(diào)控氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體，但可能通過反饋機(jī)制抑制了SNAT2的相對(duì)表達(dá)量。腐胺雖然上調(diào)了SNAT2的相對(duì)表達(dá)量，但對(duì)腸道黏膜氨基酸含量、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體和mTOR信號(hào)通路的相對(duì)表達(dá)量以及CCK的分泌均無顯著影響。因此，NCG可通過促進(jìn)不同氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體的表達(dá)，激活相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)感應(yīng)信號(hào)，從而改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。