段劍禮，陳 征，王玉琢

1.中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院泌尿外科（廣州 510655）

2.暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科（廣州 510630）

3.不列顛哥倫比亞大學(xué)泌尿系研究所（加拿大不列顛哥倫比亞省溫哥華市 V5Z1M9）

2021年最新數(shù)據(jù)顯示全球有超過141萬例前列腺癌（prostate cancer，PCa）新發(fā)病例，在全部腫瘤新發(fā)病例中高居第三，相關(guān)死亡病例有37.5萬例，是男性的第五大死因[1]。中國(guó)男性自60歲起進(jìn)入PCa發(fā)病高峰期，且PCa發(fā)病率與死亡率隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，并有逐步低齡化的征象[2-3]。研究數(shù)據(jù)表明，由于患者之間存在個(gè)體差異，約15%的PCa患者有較高的疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)相同的治療方案表現(xiàn)出高復(fù)發(fā)、易轉(zhuǎn)移和高致死率等特點(diǎn)，增加了患者預(yù)后的不確定性[4]。隨著精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，根據(jù)PCa患者的個(gè)體化腫瘤特征施行不同的治療方案是未來的主要發(fā)展方向[5-6]。在免疫缺陷的小鼠中構(gòu)建人源性腫瘤異種移植（patient-derived tumor xenograft，PDX）模型，不僅可以避免腫瘤細(xì)胞被異體攻擊，更重要的是可借助小鼠體內(nèi)微環(huán)境模擬人體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的適宜生長(zhǎng)環(huán)境，更完整的保留親代基因型，降低外界對(duì)基因突變的干擾，較好的體現(xiàn)了個(gè)體化腫瘤特征[7]。PDX模型在研究癌癥進(jìn)展、制定個(gè)體化治療方案和臨床前藥效測(cè)試等方面發(fā)揮著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于腫瘤的研究中。本研究主要圍繞PDX模型在男性PCa中的相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1 前列腺癌PDX模型的構(gòu)建

完整的PDX模型構(gòu)建包括人源腫瘤組織的獲取、免疫缺陷小鼠的選擇和植入部位的選擇三部分。

1.1 人源腫瘤組織的獲取

獲取人體PCa組織的主要方式是手術(shù)切除和腫瘤病灶穿刺。將獲取的腫瘤組織先放至培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，PBS清洗后在無菌操作下切成3～4 mm小碎塊或直接裂解為單個(gè)細(xì)胞的懸浮液，再將其導(dǎo)入小鼠的預(yù)定種植位置即完成前列腺腫瘤的初次接種[8]。為提高腫瘤種植的成功率，常將基質(zhì)膠或成纖維細(xì)胞等與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的物質(zhì)一同注入小鼠體內(nèi)，腫瘤增長(zhǎng)穩(wěn)定后，可進(jìn)行再次傳代或凍存，但經(jīng)凍存的腫瘤組織其傳代效率相對(duì)較低[9-10]。

1.2 免疫缺陷小鼠的選擇

1976年，Schroeder等首次將人源性PCa組織種植到裸鼠中并成功回收，同時(shí)設(shè)計(jì)對(duì)照試驗(yàn)驗(yàn)證了雄激素在人PCa組織來源的異種移植中具有重要作用，此后裸鼠在PCa的PDX模型中被廣泛應(yīng)用[11]。此類小鼠的優(yōu)勢(shì)在于通體無毛發(fā)較易觀察皮下成瘤的范圍，同時(shí)由于先天缺乏胸腺細(xì)胞導(dǎo)致裸鼠無細(xì)胞免疫，有利于異種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。但裸鼠的不同基因遺傳背景可影響異種移植的成功率，且裸鼠體內(nèi)仍保留部分體液免疫和非特異性免疫，使得裸鼠尚不能制成最理想的PDX模型[12]。SCID小鼠因Prkdc基因突變導(dǎo)致細(xì)胞免疫和體液免疫雙重缺失，減少了腫瘤被攻擊的可能性。該類小鼠擁有較完善的非特異性免疫系統(tǒng)，隨年齡增長(zhǎng)體內(nèi)可能會(huì)產(chǎn)生T細(xì)胞和B細(xì)胞，稱為滲漏現(xiàn)象[13]。基于此，后續(xù)研究對(duì)SCID小鼠進(jìn)行改良，開發(fā)出擁有低活性NK細(xì)胞和低滲漏率的NOD-SCID小鼠和缺乏NK細(xì)胞的NSG小鼠，并在PCa-PDX模型構(gòu)建中均取得不錯(cuò)的效果[14-15]。由于NOD-SCID和 NSG小鼠價(jià)格昂貴，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求較高，目前在PCa-PDX模型構(gòu)建中應(yīng)用最廣泛的仍是裸鼠和SCID小鼠。

1.3 植入部位的選擇

常用的植入部位包括皮下種植、原位種植和腎包膜種植。皮下種植指將人源性腫瘤碎片直接種植于小鼠皮下，優(yōu)點(diǎn)包括操作簡(jiǎn)便，易上手，同時(shí)可清晰監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。裸鼠的皮下種植均可肉眼觀測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)情況，方便測(cè)量與完善實(shí)驗(yàn)計(jì)劃。皮下種植部位常取血供相對(duì)豐富之處，如雙側(cè)腹股溝及腋下等，但由于皮下血供的天然劣勢(shì)，皮下移植的成功率不穩(wěn)定，在20%～75%范圍內(nèi)波動(dòng)[16-17]。同時(shí)，皮下種植的腫瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散，常為聚集性成團(tuán)，不利于腫瘤侵襲性實(shí)驗(yàn)的開展。

原位種植指直接將人源性PCa接種在小鼠前列腺部位，其血供相對(duì)皮下更為豐富，一定程度上提高了種植的成功率。原位種植可模擬最接近人類PCa發(fā)生發(fā)展的微環(huán)境，充分考慮了實(shí)驗(yàn)調(diào)控指標(biāo)及各項(xiàng)體內(nèi)因素對(duì)PCa生長(zhǎng)的影響，使PDX模型實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加可信。接種于原位的腫瘤可增加轉(zhuǎn)移的成功率，較好的模擬腫瘤在前列腺部位的進(jìn)展過程，故在大多數(shù)PCa轉(zhuǎn)移模型研究中均優(yōu)先考慮使用原位種植[18-19]。但原位種植技術(shù)難度較高，需耗費(fèi)大量時(shí)間學(xué)習(xí)及操作，種植后通常需要借助超聲或探查性手術(shù)來確認(rèn)腫瘤的生長(zhǎng)情況，在日常腫瘤測(cè)量及轉(zhuǎn)移檢測(cè)中均離不開影像學(xué)的支持。

Wang等率先成功將人體PCa組織種植于腎包膜下，開創(chuàng)了腎包膜下種植體系[20]。相比前兩種方案，腎包膜下種植更好地體現(xiàn)了人源性PCa的特征，不僅完整保留了原發(fā)PCa組織的分子特征、腫瘤異質(zhì)性、轉(zhuǎn)移能力以及對(duì)治療的反應(yīng)性等關(guān)鍵生物學(xué)特性，還因血供充足大幅度提高了腫瘤種植的成功率（50%～95%）。同時(shí)，該技術(shù)還可從冷凍庫(kù)中回收PDX，提高模型的使用效率。目前活體腫瘤實(shí)驗(yàn)室（the living tumor laboratory，LTL）使用腎包膜下移植技術(shù)，已成功建立超過250種可移植的PDX模型，廣泛用于各種良惡性腫瘤的基礎(chǔ)研究、轉(zhuǎn)化研究以及個(gè)體化研究中，體現(xiàn)了腎包膜下種植的獨(dú)特價(jià)值。但該技術(shù)仍有不足之處：①操作復(fù)雜，需要熟練的技術(shù)人員完成；②對(duì)小鼠手術(shù)損傷較大，增加了感染的風(fēng)險(xiǎn)；③因小鼠腎臟較小且腎包膜較脆弱，操作過程需更加精細(xì)；④與原位種植一樣，該方式也需要依靠影像學(xué)技術(shù)進(jìn)行長(zhǎng)期觀察[21]。

值得注意的是，種植成功率除受構(gòu)建PDX模型時(shí)的操作步驟和方式選擇影響外，還受以下因素影響：①雄激素水平，高、低劑量的雄激素補(bǔ)充對(duì)腫瘤種植的生長(zhǎng)有不同影響，故在補(bǔ)充雄激素時(shí)需預(yù)先估測(cè)閾值；②組織的離體時(shí)間，由于離體組織內(nèi)部處于缺氧狀態(tài)，離體時(shí)間越長(zhǎng)，種植成功率越低，提示種植時(shí)應(yīng)保持組織的新鮮，并盡可能切成薄片以利于組織的氧供；③基質(zhì)微環(huán)境，PDX模型的生長(zhǎng)與載體的基質(zhì)微環(huán)境息息相關(guān)，使用新生鼠精囊間質(zhì)、基質(zhì)膠或?qū)诱尺B蛋白等與腫瘤切片混合可重建小鼠體內(nèi)腫瘤基質(zhì)微環(huán)境，提高種植成功率[22-25]。

2 PDX模型的優(yōu)勢(shì)與不足

C4-2、LNcap、DU145等PCa細(xì)胞系的體外模型或?qū)⒓?xì)胞系直接種植至小鼠體內(nèi)構(gòu)建體內(nèi)模型仍是目前應(yīng)用最廣泛的研究工具，但由于細(xì)胞系本身與患者自身腫瘤差異性較大，時(shí)常會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床應(yīng)用并不一致[26]。相比于傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)和類器官模型，PDX模型的優(yōu)勢(shì)在于：①完整保留了人體腫瘤的基因，擁有更加接近于個(gè)體的異質(zhì)性，有利于腫瘤基因組的研究和治療；②保持了腫瘤在組織學(xué)上的持續(xù)性，在腫瘤轉(zhuǎn)移的研究中作用顯著；③接受體內(nèi)微環(huán)境調(diào)控和內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響使實(shí)驗(yàn)結(jié)論更為客觀。

但PDX模型也存在一定缺陷。如模型構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜且成本昂貴，目前仍缺乏大規(guī)模量產(chǎn)的技術(shù)。初代PDX生長(zhǎng)速率幾天到幾個(gè)月不等，而次代及后續(xù)的PDX模型大約需要40～50天才能獲得理想大小的腫瘤[27]，且大多數(shù)會(huì)在數(shù)次傳代中停止增殖并逐步衰老[28]。此外，鑒于動(dòng)物體內(nèi)微環(huán)境與人類有所差異，該技術(shù)的發(fā)展還受限于異種動(dòng)物的免疫系統(tǒng)。

值得一提的是，使用同一親本來源的組織樣本進(jìn)行體內(nèi)外雙重驗(yàn)證已逐步成為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的共識(shí)。類器官是一種三維的培養(yǎng)方式，即提取來自人體的器官細(xì)胞在特定培養(yǎng)環(huán)境下增殖成類似器官的小團(tuán)，為組織功能的體外實(shí)驗(yàn)提供了新方式。由于類器官和原始PDX模型之間的轉(zhuǎn)錄組和基因組特征高度一致，故可進(jìn)行相關(guān)PDX模型的藥物敏感性篩選和基因編輯等實(shí)驗(yàn)。有研究利用類器官培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了去勢(shì)抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer，CRPC）PDX模型的體外擴(kuò)增和機(jī)制研究[29]。條件性重編程細(xì)胞（conditional reprogramming cell，CRC）技術(shù)是指提取人源性細(xì)胞并與射線照射后的小鼠成纖維細(xì)胞Swiss 3T3-J2進(jìn)行共培養(yǎng)，從而使人源性細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定傳代，該技術(shù)改良了原代細(xì)胞培養(yǎng)模式，提高了人源性細(xì)胞的擴(kuò)增產(chǎn)量[30]。Ci等將PCa組織在體外培養(yǎng)成穩(wěn)定擴(kuò)增的CRC細(xì)胞，再將該細(xì)胞移植于NOD / SCID小鼠的腎包膜下，構(gòu)建自發(fā)性神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌（neuroendocrine prostate cancer，NEPC）的PDX模型，不僅保持了腫瘤與人體的基因一致性，還解決了PDX模型不能大量擴(kuò)增的難題，同時(shí)亦可以在體內(nèi)外實(shí)現(xiàn)高通量化學(xué)藥物篩選和基因修飾，為PDX模型的構(gòu)建和應(yīng)用提供了新的思路[31]。PCa中傳統(tǒng)細(xì)胞系、類器官培養(yǎng)、PDX模型差異見表1。

表1 PCa中傳統(tǒng)細(xì)胞系、類器官和PDX模型的比較Table 1.Comparison of traditional cell lines,organoids and PDX models in PCa

3 PDX模型在前列腺癌中的應(yīng)用

3.1 PDX模型在局限性前列腺癌中的應(yīng)用

PC-82是1977年建立的第一個(gè)雄激素依賴的PCa PDX模型，來源于1例行根治性切除術(shù)的58歲男性患者，經(jīng)過去勢(shì)和雌激素治療后，該模型的生長(zhǎng)速度可逐步減緩并退化[32]。隨后，PCa各個(gè)類型的 PDX模型開始被建立并逐步在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用（表2）。在1991年至2005年期間，有研究分別從156例患者中收集了261個(gè)PCa樣本，并將其皮下植入雄性SCID小鼠中，這些PDX模型被統(tǒng)一命名為L(zhǎng)uCaP PDX[33]，LuCaP 系列基本涵蓋了常見的PCa類型，其中從21個(gè)原位PCa組織中成功構(gòu)建了4個(gè)局限性PCa的PDX模型，它們很好地驗(yàn)證了人類PCa的主要基因組和表型特征的改變，如雄激素受體的擴(kuò)增、PTEN缺失、TP53缺失和突變、RB1丟失、TMPRSS2-ERG重排、SPOP突變等。

表2 部分PCa PDX模型的構(gòu)建及應(yīng)用總結(jié)Table 2.Construction and application of PDX Model in PCa

原發(fā)性PCa的轉(zhuǎn)移機(jī)制是當(dāng)前研究熱點(diǎn)。一項(xiàng)研究將局限性PCa不同部位的組織切片制成不同的PDX模型，通過原位種植到小鼠前列腺中來測(cè)試每個(gè)亞系的轉(zhuǎn)移能力，發(fā)現(xiàn)LTL-220N和LTL-221N亞系是非轉(zhuǎn)移性的，而LTL-220M亞系在體內(nèi)可自發(fā)轉(zhuǎn)移，提示在局限性PCa中只有少數(shù)癌細(xì)胞具有轉(zhuǎn)移潛能[34]。將局限性PCa組織種植于雌性小鼠體內(nèi)可顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，提示雌二醇可以通過與雄激素作用無關(guān)的機(jī)制在動(dòng)物模型中抑制PCa的生長(zhǎng)，對(duì)PCa的早期治療有指導(dǎo)意義[35]。值得注意的是，PCa PDX模型用來評(píng)估藥物的治療效果時(shí)成本較高且不一定時(shí)時(shí)準(zhǔn)確，有研究將PCa PDX模型中的腫瘤組織切片，在體外培養(yǎng)約6天后測(cè)試其對(duì)雄激素拮抗劑的敏感性，發(fā)現(xiàn)恩雜魯胺可顯著降低AR陽性腫瘤切片的增殖能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡并降低了PSA的分泌，此結(jié)果與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)一致，提示這種離體組織切片擁有與本體一致的藥敏特點(diǎn)，合理利用此模型可極大降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量和成本[36]。

3.2 PDX模型在轉(zhuǎn)移性前列腺癌中的應(yīng)用

轉(zhuǎn)移是PCa致死的主要原因，尋找檢測(cè)指標(biāo)和新型治療方法至關(guān)重要。若能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)原發(fā)PCa的轉(zhuǎn)移情況，將為患者提供更加精準(zhǔn)的治療方案。Lin等將來自患者的轉(zhuǎn)移性PCa組織塊種植到腎包膜下，經(jīng)5次連續(xù)種植后進(jìn)行原位種植，觀察腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生和進(jìn)展，其中PCa1-met是從淋巴結(jié)中分離出的亞型，已證明在47個(gè)宿主中均可侵犯至多個(gè)器官，如淋巴結(jié)、肺、肝、腎、脾臟和骨骼等，同時(shí)在與局限性PCa進(jìn)行基因組對(duì)比分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，ASAP1與PCa的轉(zhuǎn)移緊密相關(guān)，可作為新型腫瘤標(biāo)志物[42-43]。另一研究對(duì)5個(gè)不同類型PCa-PDX模型進(jìn)行全基因組及全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)間質(zhì)來源的轉(zhuǎn)移信號(hào)是PCa轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)，不僅可以預(yù)測(cè)早期腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能，還對(duì)早期PCa患者的治療選擇有指導(dǎo)意義[38]。EphA2在PCa中的表達(dá)與腫瘤的侵襲性有關(guān)，而一線用藥恩雜魯胺會(huì)誘導(dǎo)其在PDX模型高表達(dá)，使用EphA2降解劑可極大減少原位種植腫瘤的轉(zhuǎn)移，提示該藥在轉(zhuǎn)移性PCa中有廣闊的應(yīng)用前景[44]。

目前已經(jīng)開發(fā)出多種高轉(zhuǎn)移性PCa模型。LAPC-9是在長(zhǎng)期去勢(shì)環(huán)境中產(chǎn)生的適應(yīng)性雄激素非依賴型PDX模型[45]。BM18是應(yīng)用較多的骨轉(zhuǎn)移PDX模型，顯示出PSA、AR和CK-18蛋白陽性并對(duì)雄激素敏感，且BM18對(duì)紫杉烷類化合物和多激酶抑制劑表現(xiàn)出較高的敏感性[46]。利用LAPC-9和BM18在不同激素水平下的差異進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)雄激素敏感性不同的轉(zhuǎn)移性PCa PDX模型觸發(fā)了不同的基質(zhì)反應(yīng)，并鑒定出具有50個(gè)基因的基質(zhì)標(biāo)記分子，這些基質(zhì)標(biāo)記分子與格里森評(píng)分、轉(zhuǎn)移進(jìn)展和無進(jìn)展生存率等呈線性關(guān)系[47]。

3.3 PDX模型在去勢(shì)抵抗性前列腺癌中的應(yīng)用

雄激素剝奪治療是轉(zhuǎn)移性PCa的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，但是多數(shù)患者最終會(huì)進(jìn)展為CRPC，對(duì)CRPC的機(jī)制研究和臨床處理仍是泌尿外科的難點(diǎn)。從基因?qū)用娣治鯟RPC改變的原因能夠更好的診斷與判斷預(yù)后，有研究成功構(gòu)建了20個(gè)來源于CRPC患者的PDX模型，并證實(shí)傳代后腫瘤染色體改變與患者中的基本一致[29]。通過對(duì)8例CRPC-PDX模型的分析，發(fā)現(xiàn)AR陰性的CRPCPDX模型中UBE2C基因的表達(dá)顯著高于AR陽性的腺癌模型，且CRPC-PDX模型中的AR、RB和CCND1啟動(dòng)子區(qū)域均未甲基化[48]。

對(duì)CRPC患者的臨床治療評(píng)估也是研究的重點(diǎn)。阿比特龍對(duì)部分CRPC患者有效，但會(huì)產(chǎn)生耐藥性，將CRPC-PDX模型用阿比特龍進(jìn)行治療，利用基因表達(dá)和免疫組化等方式探索阿比特龍耐藥機(jī)制和潛在靶點(diǎn)，借此發(fā)現(xiàn)阿比特龍耐藥相關(guān)的分子標(biāo)志物，并證明了阿比特龍耐藥時(shí)會(huì)產(chǎn)生持續(xù)的AR / GR信號(hào)，對(duì)后續(xù)CRPC患者的治療提供新的思路[49]。有研究利用CRPC-PDX模型進(jìn)一步證實(shí)了轉(zhuǎn)錄共激活因子CBP / p300對(duì)維持CRPC生長(zhǎng)的意義，并由此開發(fā)出CBP / p300小分子抑制劑，在體內(nèi)外抑制了PCa的生長(zhǎng)[50-51]。耐阿比特龍的PDX模型LuCaP 58被用于研究CRPC患者骨轉(zhuǎn)移的治療方案，發(fā)現(xiàn)鐳-223可有效抑制腫瘤誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞生長(zhǎng)并保護(hù)了正常的骨骼結(jié)構(gòu)，同時(shí)還能降低小鼠體內(nèi)PSA水平并縮小腫瘤的總體積，提示鐳-223可限制骨中PCa的增殖[52]。近期，靶向降解劑研究在PCa中取得突破性進(jìn)展，其中小分子ARV-110是一種降解AR的口服靶向嵌合體類藥物，與AR特異性結(jié)合并介導(dǎo)其降解，在所有癌細(xì)胞系及PDX模型中，該藥對(duì)恩雜魯胺治療不敏感的腫瘤顯示出有效的抑制性。對(duì)在標(biāo)準(zhǔn)治療方案上有所進(jìn)展的mCRPC患者有極大幫助，目前美國(guó)Arvinas 公司已開始對(duì)ARV-110進(jìn)行相關(guān)的臨床試驗(yàn)[53]。

3.4 PDX模型在神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌中的應(yīng)用

PCa發(fā)展的晚期階段通常以對(duì)雄激素不敏感的快速增殖狀態(tài)為特征，一些晚期腫瘤主要由神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞組成，稱為NEPC。NEPC體內(nèi)研究的基礎(chǔ)是構(gòu)建合適的PDX模型，LuCaP系列已成功建立了5種NEPC-PDX模型，其中LuCaP 49穩(wěn)定增殖了4年，該模型來源于1例BII期PCa患者的轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)，擁有更快的倍增時(shí)間（平均6.5天），對(duì)雄激素剝奪治療不敏感，缺乏AR和PSA但表達(dá)突觸素、CD57等神經(jīng)內(nèi)分泌蛋白等特征。此外，源于前列腺尿道切除術(shù)的LuCaP 93、肝轉(zhuǎn)移的LuCaP 145.1和LuCaP 173.1以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的LuCaP 145.2等均表現(xiàn)出NEPC特征和相似的基因組特征[33,39]。LTL通過穿刺活檢提取組織制成局限性PCa PDX模型，去勢(shì)后長(zhǎng)時(shí)間暴露于缺乏雄激素的環(huán)境中自動(dòng)轉(zhuǎn)化為NEPC，由此建立了首個(gè)由腺癌自發(fā)向NEPC轉(zhuǎn)分化的PDX模型，稱為L(zhǎng)TL331/331R。該模型可完全表征供體患者的疾病特征，其發(fā)展方式提示局限性PCa可以通過適應(yīng)性反應(yīng)直接演變?yōu)楦呶Ｐ訮Ca[24,31]。目前，LTL331/331R模型被用于整個(gè)轉(zhuǎn)分化過程中的基因組、轉(zhuǎn)錄組和表觀遺傳學(xué)等研究方向。利用該模型在NEPC的多項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)DEK蛋白、轉(zhuǎn)錄因子BRN2、絲氨酸/精氨酸重復(fù)基質(zhì)4（SRRM4）、異染色質(zhì)蛋白1α（HP1α）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子ONEUCT2等特異標(biāo)志物表達(dá)升高[40,54-57]。該自發(fā)模型的廣泛應(yīng)用增進(jìn)了對(duì)NEPC發(fā)生發(fā)展的理解，為NEPC潛在生物學(xué)特性的研究和治療靶標(biāo)提供了新的方向。

精準(zhǔn)診斷及治療NEPC離不開對(duì)其發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究。神經(jīng)內(nèi)分泌表型與CRPC的進(jìn)展有關(guān)，對(duì)相關(guān)患者及PDX模型進(jìn)行全基因組微陣列分析，提示同一部位神經(jīng)內(nèi)分泌狀態(tài)和腺癌狀態(tài)可能是同時(shí)存在的，CHRPC + / SYP +雙重陽性可做為神經(jīng)內(nèi)分泌型CRPC的分子表型，且該表型不一定與AR活性有關(guān)[58]。在一項(xiàng)涉及18例NEPC-PDX模型的研究中，發(fā)現(xiàn)PSMA基因受到明顯抑制，進(jìn)而使得SSTR2表達(dá)上調(diào)，提示可使用PSMA作為NEPC診斷的靶向分子[59]。有研究將NEPC-PDX和腺癌之間的蛋白質(zhì)組進(jìn)行差異性分析，發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)發(fā)生、細(xì)胞周期調(diào)控和DNA修復(fù)相關(guān)的蛋白質(zhì)在NEPC中均有所升高，而與線粒體功能有關(guān)的蛋白質(zhì)水平則降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄抑制因子REST可直接調(diào)節(jié)神經(jīng)元基因表達(dá)，對(duì)NEPC患者的治療和預(yù)后較為重要[60]。

針對(duì)NEPC患者的治療目前尚無明確有效的方案，部分原因是其分子表征較差。伊立替康（一種拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑）與順鉑的聯(lián)用被證明在NEPC PDX模型LTL352中具有良好的治療效果，該方案不僅可抑制腫瘤的繼續(xù)生長(zhǎng)，還在一定程度上殺傷腫瘤細(xì)胞，減少腫瘤體積[41]。Aurora-A是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，在NEPC中有明顯的過表達(dá)，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)及LTL352模型研究均證實(shí)NEPC對(duì)Aurora-A激酶抑制劑有高度敏感性，提示Aurora-A激酶抑制劑可單獨(dú)或協(xié)助治療NEPC和CRPC，但仍需繼續(xù)進(jìn)行相關(guān)臨床驗(yàn)證[61-62]。

4 結(jié)語

綜上所述，PCa PDX模型構(gòu)建的理論基礎(chǔ)與技術(shù)水平逐步趨于成熟，包括LTL在內(nèi)的各大實(shí)驗(yàn)室正努力構(gòu)建一個(gè)品系齊全的PCa PDX模型庫(kù)，并逐步推進(jìn)其商業(yè)化進(jìn)程。從現(xiàn)有研究看，PDX模型在各階段PCa的基因分析、靶標(biāo)檢測(cè)、藥物測(cè)試和新藥驗(yàn)證等方面均有顯著作用，促進(jìn)了個(gè)體化醫(yī)療的可能性，為體內(nèi)研究提供了穩(wěn)定可靠的載體。未來如何繼續(xù)提高PDX模型的成功率、實(shí)現(xiàn)PDX模型批量化生產(chǎn)及形成完整優(yōu)質(zhì)產(chǎn)業(yè)鏈?zhǔn)侵档盟伎嫉男路较颉?/p>