錢麗萍 陳阿虹 陳婉清 李唯 彭華毅 闕慧卿 林綏

【摘 要】 目的：分析比較不同生長期、不同產(chǎn)地的金線蓮、臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭揮發(fā)油化學(xué)成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，通過GC-MS檢測，分析比較不同生長期、不同產(chǎn)地的金線蓮、臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭揮發(fā)油化學(xué)成分。結(jié)果：從1月齡、2月齡、6月齡福建三明金線蓮、福建寧德金線蓮、福建南平金線蓮、臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭中分別分離鑒定了13（1）、22（2）、28（3）、22（4）、10（5）、32（6）和53（7）個化合物，占揮發(fā)油總量的93.53%、96.98%、94.53%、92.44%、84.32%、89.16%和83.18%。其中，2，3，3-三甲基己烷、亞油酸和棕櫚酸為共有成分，2，2，4，6，6，-五甲基庚烷，2，6，11，15-四甲基十六烷、2，6，10-三甲基十二烷、3，8-二甲基十一烷、4-乙基十一烷和5-（2-甲基丙基）壬烷為臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭單獨共有成分。結(jié)論：該研究為開唇蘭屬藥用植物的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 金線蓮;臺灣銀線蘭;滇南開唇蘭;揮發(fā)油;氣相色譜-質(zhì)譜法

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）12-0017-08

Abstract：Objective Analyze chemical constituents of volatile oils from Anoectochilus roxburghii of different periods and regions，Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus. Methods Volatile oils were subjected to GC-MS analysis，which extracted by water steam distillation from Anoectochilus roxburghii of different periods and regions，Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus，and the chemical constituents of volatile oils from different samples were compared. Results 13（1），22（2），28（3），22（4），10（5），32（6） and 53（7） compounds were identified from Fujian Sanming A. roxburghii with one-month，two-month，six-month harvest period，F(xiàn)ujian Ningde A. roxburghii， Fujian Nanping A. roxburghii，A. formosanus and A. burmannicus，which were 93.53%，96.98%，94.53%，89.16% and 95.52% of the total volatile oils，respectively. Among them，2，3，3-Trimethylhexane，linoleic acid and palmitic acid were the common components，2，2，4，6，6-Pentamethylheptane，2，6，11，15-Tetramethylhexadecane，2，6，10-Trimethyldodecane，3，8-Dimethylundecane，4-Ethylundecane and 5-（2-Methylpropyl）nonane were the common components of Anoectochilus formosanus and Anoectochilus burmannicus alone. Conclusion This study provides basic data for the further development and utilization of medicinal plants of Anoectochilus.

Keywords：A. roxburghii; A. formosanus; A. burmannicus; Volatile oils; GC-MS

金線蓮[Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl.]是開唇蘭屬（Anoectochilus）草本植物，有“藥王”“金草”的美稱，別名金線蘭、金蠶、金石松等[1-2]，主要分布于福建、廣西、云南、臺灣等地。金線蓮全草入藥，具有清熱涼血、祛風(fēng)利濕功效[3-4]，主要用于糖尿病、血尿、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等[5]。金線蓮（Anoectochilus roxburghii）、臺灣銀線蘭（Anoectochilus formosanus）和滇南開唇蘭（Anoectochilus burmannicus）均來源于蘭科開唇蘭屬，是親緣關(guān)系相近的3種植物。臺灣銀線蘭具有清火，解熱，降血壓的功效，用于治療肝脾病、肺癆肺病、血熱吐血、肝火等[6]。現(xiàn)代藥理研究表明，三種植物的水提物、多糖、黃酮等活性成分，具有抗炎[7-9]、抗氧化[9-11]活性。金線蓮作為民間名貴藥材，其揮發(fā)油主要有棕櫚酸、亞油酸、亞麻酸等活性成分，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用[12-13]，而臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭揮發(fā)油活性目前未見報道。研究發(fā)現(xiàn)，不同栽培方式金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分種類和含量存在差異[14-15]，而不同生長期金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分對比分析目前未見報道。為此，本課題對這三種植物揮發(fā)油化學(xué)成分進行比較研究，為開唇蘭屬藥用植物的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料

1.1 原料藥材 5份金線蓮（A. roxburghii）、1份臺灣銀線蘭（A. formosanus）、1份滇南開唇蘭（A. burmannicus）（表1），由福建省華之韻生物科技有限公司提供，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)（藥用植物學(xué)/中藥鑒定）楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定。

1.2 儀器與試劑 Angilent 7890A GC/7000QQQB串聯(lián)四級桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Angilent科技有限公司）;KQ2200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;AL204型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）;Centrifuge 5810 R高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）;RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;SHZ-III型循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）;ABZ1-0501-P型艾科浦超純水系統(tǒng)（頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司）。

試驗用試劑均為國產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取 各稱取金線蓮及其近緣種藥材50 g，剪碎成約0.5 cm小段，置于1 L容量瓶中，加入水500 mL，浸泡24 h后，自動攪拌機攪拌1 h，再置于揮發(fā)油提取器中微沸狀態(tài)提取15 h，收集提取液中的揮發(fā)油，加入乙醚萃取，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，離心后取上清，進樣前用乙醚稀釋成適當(dāng)濃度，用0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2 揮發(fā)油的GC-MS分析 色譜柱：石英毛細管柱DB-1MS （30 m×0.25 mm×0.25 μm;柱溫：40 ℃，以4 ℃/min升溫到250 ℃保持5 min），進樣口溫度：250 ℃;載氣為高純度氦氣，流速：1.0 mL/min，進樣量：0.5 μL;不分流。 質(zhì)譜條件：離子源為EI源，離子源溫度230 ℃，電子能源70 eV，接口溫度280 ℃，四級桿溫度150 ℃，質(zhì)量掃描范圍為30～500 amu，電子倍增器電壓為1381 eV;定性分析通過NITS08.L標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫檢索定性，同時采用峰面積歸一化法計算組分的相對含量。

3 結(jié)果

金線蓮及其近源種揮發(fā)油通過上述GC-MS條件分析，根據(jù)NITS08.L標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫檢索，采用峰面積歸一化法計算組分的相對百分含量，從7個樣品揮發(fā)油中鑒定了13（1）、22（2）、28（3）、22（4）、10（5）、32（6）和53（7）個化合物，分別占揮發(fā)油總量的93.53%、96.98%、94.53%、92.44%、84.32%、89.16%和83.18%，總離子流圖如圖1～7所示，化學(xué)成分分析結(jié)果如表2所示。

4 討論

4.1 不同生長期、不同產(chǎn)地的金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分既有共性，也有個性 從表2可知，5份金線蓮樣品的揮發(fā)油化學(xué)成分以酸類化合物為主，其中，亞油酸和棕櫚酸含量較高，它們是揮發(fā)油的主要活性物質(zhì)，具有降低血液膽固醇[15]和抑制腫瘤[16]活性。對鑒定出的化學(xué)成分進行對比分析，發(fā)現(xiàn)6月齡福建三明金線蓮含有0.03%酮類化合物，較其他樣品化學(xué)種類數(shù)豐富。文獻報道不同栽培模式（組培和地栽）[17-18]、不同光照度[19]、不同移栽月齡[20-21]和不同地理種源[22]的福建金線蓮主要活性成分（多糖、總黃酮等）存在差異，這些可能也是引起不同生長期、不同產(chǎn)地金線蓮揮發(fā)油成分和含量差異的重要原因。

4.2 不同品種的開唇蘭屬植物揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類存在差異性 通過對金線蓮、臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭7份樣品揮發(fā)油化學(xué)成分對比分析發(fā)現(xiàn)，2，3，3-三甲基己烷、亞油酸和棕櫚酸為共有成分。2，2，4，6，6-五甲基庚烷、2，6，11，15-四甲基十六烷、2，6，10-三甲基十二烷、3，8-二甲基十一烷、4-乙基十一烷和5-（2-甲基丙基）壬烷為臺灣銀線蘭和滇南開唇蘭單獨共有成分。此外，本實驗檢出臺灣銀線蘭揮發(fā)油含有順式-10-十七碳烯酸（30.08%），其含量約為1月齡滇南開唇蘭揮發(fā)油中順式-10-十七碳烯酸[23]的18倍。不同種之間的揮發(fā)油化學(xué)成分含量和種類存在差異。

本實驗通過GC-MS檢測分析了金線蓮及其近源種揮發(fā)油化學(xué)成分，結(jié)果表明金線蓮揮發(fā)油化學(xué)成分受生長期和產(chǎn)地的影響，而同屬不同種藥物之間的揮發(fā)油化學(xué)成分存在差異。本實驗研究為開唇蘭屬藥用植物的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

致謝：各個金線蓮品種均由福建省華芝韻生物科技有限公司提供，由福建中醫(yī)藥大學(xué)（藥用植物學(xué)/中藥鑒定）楊成梓副教授及褚克丹教授鑒定，GC-MS是由福建省檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心的曹潔及彭華毅檢測。

參考文獻

[1]蔡文燕，肖華山，范秀珍.金線蓮研究進展[J].亞熱帶植物科學(xué)，2003，32（3）：68-72.

[2]《全國中藥草匯編》編寫組.全國中藥草匯編[G]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1992.

[3]YE S Y，SHAO Q S，ZHANG A L. Anoectochilus roxburghii： A review of its phytochemistry，pharmacology，and clinical applications[J]. Journal of Ethnopharmacology，2017（209）：184-202.

[4]黃有霖.福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].福州：海風(fēng)出版社，2006.

[5]福建中醫(yī)藥研究所. 福建藥物志（第二冊） [M]. 福州：福建科技出版社，1982.

[6]吳青昌.中國本草原色圖譜[M].臺北：臺灣藥草出版社，1981.

[7]YANG Z G，ZHANG X H，YANG L W，et al. Protective effect of Anoectochilus roxburghii polysaccharide against CCl4-induced oxidative liver damage in mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules，2017（96）：442-450

[8]HSIAO H B，WU J B，LIN H，et al. Kinsenoside isolated from Anoectochilus Formosanus suppresses LPS-stimulated inflammatory reactions in macrophages and endotoxin shock in mice[J]. Shock，2011，35（2）：184-190.

[9]BUDLUANG P，PITHCHAKARN P，TING P，et al. Anti-inflammatory and anti-insulin resistance activities of aqueous extract from Anoectochilus burmannicus[J]. Food Science & Nutrition，2017（5）：486-496.

[10]吳巖斌，張超，張秀才，等. 不同來源金線蓮總黃酮含量及其體外抗氧化、降血糖活性研究 [J]. 藥學(xué)服務(wù)與研究，2017，17（3）： 206-209.

[11]SHIH C C，WU Y W，LIN W C . Antihyperglycaemic and anti-oxidant properties of Anoectochilus formosanus in diabetic rats [J]. Clinical & Experimental Pharmacology & Physiology，2010，29（8）：684-688.

[12]陳焰，陳新峰，闕萬才，等.金線蓮揮發(fā)油成分的提取及其體外抗腫瘤作用研究[J].中國藥業(yè)，2012，21（6）： 21-22.

[13]林碧霞. 金線蓮揮發(fā)油成分的提取及體外免疫活性研究[D].福州：福建醫(yī)科大學(xué)，2017.

[14]陳文娟，吳水華，繆存信，等.不同溶劑萃取野生金線蓮揮發(fā)油的GC-MS分析[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，12（10）：42-45.

[15]戚登斐，張潤光，韓海濤，等.核桃油中亞油酸分離純化技術(shù)研究及其降血脂功能評價[J].中國油脂，2019，44（2）：104-108.

[16]周瑤瑤，陳鳳云，屠文駱.棕櫚酸在體外通過促進凋亡作用抑制宮頸癌Hela細胞增殖的研究[J].實用腫瘤學(xué)雜志，2019，33（5）：402-406.

[17]賴榮才. 金線蓮的人工培養(yǎng)及其主要活性成分的調(diào)控研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2012.

[18]吳顯芝，楊順剛.不同栽培模式、不同栽培基質(zhì)對金線蓮組培苗生長的影響[J].種子，2020，39（4）：146-149.

[19]牛歡，韋坤華，徐倩，等.不同光照度對金線蓮生長、生理特性和藥用成分的影響[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報，2020，29（1）：26-36，43.

[20]李惠華，曾碧玉.廣西金線蓮不同移栽月齡生物學(xué)性狀及活性成分含量研究[J].亞熱帶植物科學(xué)，2019，48（3）：227-231.

[21]蔣元斌. 兩種金線蓮不同生長期主要活性成分動態(tài)變化[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2012.

[22]曾碧玉，蘇明華，陳清西，等.不同地理種源金線蓮不同采集時間活性成分分析研究[J].熱帶作物學(xué)報，2020，41（4）：811-818.

[23]陳阿虹，錢麗萍，陳婉清，等.滇南開唇蘭揮發(fā)油化學(xué)成分比較研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2018，29（12）： 2877-2880.

（收稿日期：2020-12-01 編輯：劉斌）