喻雄華 喻軼

萸芪糖漿是本院注冊制劑,該制劑由黃芪等12味中藥組成,常用于對脾胃氣虛、營養(yǎng)不良的患者進(jìn)行調(diào)理。本實(shí)驗(yàn)主要從萸芪糖漿對厭食大鼠進(jìn)食量、β-Ep含量、損傷胃黏膜的修復(fù)作用等三個(gè)方面來研究萸芪糖漿在改善厭食大鼠營養(yǎng)攝入方面的功效。

1 試劑及實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)條件 本實(shí)驗(yàn)在湖北中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心開展。實(shí)驗(yàn)室條件如下：相對濕度為60%～70%,室溫為22℃,在實(shí)驗(yàn)過程中所有大鼠均為自由飲食。動(dòng)物飼料：由湖北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康大鼠30只,體重(50±10)g；由湖北中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,證號(hào)：NO:42010200001694。

1.3實(shí)驗(yàn)用藥 萸芪糖漿：由黃芪、山茱萸等12味中藥組成,仙桃市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備。

1.4主要試劑 ①抑肽酶：湖北生物化學(xué)制藥有限公司產(chǎn)品；②4%多聚甲醛：湖北錦康生物科技有限公司,用前由仙桃市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科配制成4%的濃度；③β-Ep放射免疫試劑盒：由錦康生物技術(shù)有限公司提供。

1.5主要儀器 低溫冰箱(Sigma 2kl5,美國)、低速冷凍離心機(jī)(Sigma 2kl5,美國)、電子分析天平(SartoriusBP-61型l/100000g,德國)、生化分析儀(西門子公司,日本)。

2 萸芪糖漿對大鼠攝食總量的影響

2.1動(dòng)物分組 將30只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組及治療組,每組10只。其中正常組為健康大鼠,模型組為脾虛癥造模大鼠(造模具體方法參考2.2),該組大鼠在造模成功后正常飼養(yǎng)無藥物干預(yù)。治療組為脾虛癥大鼠治療組,即在大鼠造模成功后在飼養(yǎng)過程中進(jìn)行藥物干預(yù)。

2.2模型及飼料制作

2.2.1造模方法 采用病因模擬法造模。造模成功判定標(biāo)準(zhǔn)：與正常組對比模型組大鼠每日的進(jìn)食量<正常組30%,體重<正常組10%,且沒有其他脾虛的癥狀,則可以判定造模成功,反之則造模失敗。

2.2.2飼料制備 特制飼料的制備：選用牛奶、魚粉、大豆粉、玉米粉、糖、雞蛋,豬肉,按1∶1∶2∶1∶1∶1.8∶2比例配制。混勻后制成小塊狀,每塊約15 g,干燥后冷藏。模型組和治療組使用特制飼料喂養(yǎng),正常組給予日常使用的飼料喂養(yǎng)。自由飲食5周。

2.3給藥方法

2.3.1實(shí)驗(yàn)用藥的配制 萸芪糖漿：由仙桃市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。

2.3.2給藥劑量及方法［1］萸芪糖漿治療組：給藥劑量以成人體重的標(biāo)準(zhǔn),以公式進(jìn)行換算。其中D為藥物量,W已換算的大鼠用量,K是常數(shù),用人與大鼠等效量作為大鼠的用藥量,大約1.5 ml/100 g,用來灌胃,每天8:30灌胃一次；正常組及模型組大鼠則在相同時(shí)間注入等量的生理鹽水。各組大鼠喂養(yǎng)7 d后,開始灌胃,第35天晚20:00開始禁食,第36天8:00處死,然后制備標(biāo)本。

2.4觀察指標(biāo) 按規(guī)定分別記錄正常組、模型組以及治療組大鼠每日的攝食量。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.6三組大鼠攝食量變化情況比較 第7天,三組大鼠攝食量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第14、21、28、35天,模型組大鼠攝食量均低于正常組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)；第14、21天,治療組大鼠攝食量低于正常組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)；第28、35天,治療組攝食量高于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)；第28、35天,治療組與正常組攝食量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組大鼠攝食量變化情況比較(,g)

表1 三組大鼠攝食量變化情況比較(,g)

注：與正常組比較,aP<0.05；與模型組比較,bP<0.05

3 萸芪糖漿對大鼠β-Ep的調(diào)節(jié)作用

3.1動(dòng)物分組 同2.1相同。

3.2模型制作 同2.2相同。

3.3給藥方法

3.3.1實(shí)驗(yàn)用藥的配制 同2.3.1相同。

3.3.2給藥劑量及方法 同2.3.2相同。

3.4觀察指標(biāo) ①比較三組胃竇黏膜、下丘腦、血漿β-Ep含量。②觀察實(shí)驗(yàn)大鼠胃竇黏膜組織病理的變化。

3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 同2.5相同。

3.6實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

3.6.1實(shí)驗(yàn)方法 ①取出大鼠的眼球,取靜脈血,置于含有抑肽酶和10% EDTA -Na2的管中,充分搖勻,放入低溫離心機(jī)中離心l0 min,分離血漿,置于-70℃環(huán)境中保存［2,3］。②取出腦和胃。將胃壁組織和腦組織取出后加入生理鹽水,隨后將下丘腦分離并取出胃竇黏膜將其稱重后置于勻漿管中,隨后在勻漿管中加入1 ml的冰醋酸在室溫下靜置1 h,最后4℃離心15 min取上清-80℃保存［4,5］。

3.6.2結(jié)果 模型組與正常組下丘腦β-Ep含量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；模型組胃竇黏膜、血漿β-Ep含量低于正常組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ；治療組下丘腦β-Ep含量高于正常組及模型組,胃竇黏膜、血漿β-Ep含量高于高于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05) ；治療組與正常組胃竇黏膜、血漿β-Ep含量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 三組大鼠胃竇黏膜、下丘腦、血漿β-Ep的含量比較()

表2 三組大鼠胃竇黏膜、下丘腦、血漿β-Ep的含量比較()

注：與正常組比較,aP<0.05;與模型組比較,bP<0.05

4 萸芪糖漿對實(shí)驗(yàn)大鼠胃竇黏膜病理變化的影響

將胃壁組織取出后制作病例切片,制作病例切片過程如下：首先將取出的胃壁組織進(jìn)行石蠟包埋,隨后將用切片機(jī)包埋好的樣本進(jìn)行切片處理,最后將切片進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色,染色觀察切片,結(jié)果見圖a,圖b,圖c,圖d,圖e,圖f。

圖a 正常組胃竇黏膜層組織(HE染色)

圖b 正常組胃竇黏膜下層組織(HE染色)

圖c 模型組胃竇黏膜層組織(HE染色)

圖d 模型組胃竇黏膜下層組織(HE染色)

圖e 治療組胃竇黏膜層組織(HE染色)

圖f 治療組胃竇黏膜下層組織(HE染色)

5 討論

5.1萸芪糖漿可增加實(shí)驗(yàn)大鼠攝食量 研究表明,治療組大鼠與正常組大鼠相比膳食改善不顯著,而與模型組相比有了顯著改善,說明萸芪糖漿可改善大鼠食欲。

5.2萸芪糖漿有調(diào)節(jié)厭食大鼠血漿、下丘腦和胃竇黏膜β-Ep含量的作用 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,模型組與正常組下丘腦β-Ep含量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；模型組胃竇黏膜、血漿β-Ep含量低于正常組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05) ；治療組下丘腦β-Ep含量高于正常組及模型組,胃竇黏膜、血漿β-Ep含量高于高于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ；治療組與正常組胃竇黏膜、血漿β-Ep含量比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。使用萸芪糖漿治療后,濃度都有顯著增加,說明萸芪糖漿能促進(jìn)β-Ep的合成與分泌從而起到增進(jìn)食欲的作用。

5.3萸芪糖漿有修復(fù)炎癥的作用 從胃竇組織的HE染色病例切片結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn),在未經(jīng)過治療的模型大鼠中,大鼠的胃竇黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)脫落,并且呈現(xiàn)了與人類胃竇炎類似的病理改變。而在經(jīng)過萸芪糖漿治療后的治療組大鼠胃竇黏膜病例切片中發(fā)現(xiàn)其原本的病例狀態(tài)基本恢復(fù)正常,由此可以說明萸芪糖漿具有修復(fù)炎癥的功效。

綜上所述,萸芪糖漿對可增強(qiáng)厭食大鼠對營養(yǎng)的攝入,同時(shí)對損傷的胃黏膜有修復(fù)作用。所以可以推斷萸芪糖漿可增強(qiáng)人體營養(yǎng)的吸收,改善厭食癥狀。