李大偉，薛 松，陳倩倩，祝美華，毛楷凡，劉正平＊

（1. 山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250101；2. 山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101）

他克莫司（tacrolimus）是一種大環(huán)內(nèi)酯類新型免疫抑制劑，從筑波鏈霉菌中分離得到[1]，是與環(huán)孢霉素類似但更為強(qiáng)效的免疫抑制劑，其抑制T細(xì)胞的作用是環(huán)孢素A的10～100倍[2]。近年，他克莫司在眼部疾病中的應(yīng)用受到越來越多的重視，臨床上已廣泛應(yīng)用于春季角結(jié)膜炎[3-5]、難治性過敏性結(jié)膜炎[6-7]、自身免疫性結(jié)膜炎[8-9]、角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)[10-12]等，取得了較好的治療效果。

他克莫司溶解性差，幾乎不溶于水，因此生物利用度低，嚴(yán)重影響藥效。納米混懸液是以表面活性劑為穩(wěn)定劑，將藥物顆粒分散在水中，通過自組裝技術(shù)或破碎技術(shù)制備的一種亞微膠體分散系統(tǒng)，粒徑一般在10～1000 nm[13]。與傳統(tǒng)意義上的基質(zhì)骨架型納米體系相比，納米混懸液不需要載體材料，通過表面活性劑的穩(wěn)定作用，將納米級(jí)藥物粒子分散在水中形成穩(wěn)定的體系。納米混懸液有以下優(yōu)勢(shì)：粒徑小、比表面積大，與生物膜有較強(qiáng)的黏附、滲透作用，不易被清除，能提高生物利用度[14-15]。

本研究首先采用溶劑-反溶劑法制備他克莫司納米微?；鞈乙海缓笸ㄟ^離心沉淀法去除有機(jī)溶劑，加入穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等制成中值粒徑（D50）＜0.3 μm，沉降體積比＞0.9，可保持貯存穩(wěn)定性的納米混懸滴眼液，確定并優(yōu)化了粒度適宜、穩(wěn)定性良好的無菌他克莫司納米混懸液的制備工藝。

在進(jìn)行個(gè)稅遞延保險(xiǎn)額度調(diào)整的過程中，該額度不應(yīng)該是一成不變的，應(yīng)該隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展情況、物價(jià)、城市經(jīng)濟(jì)發(fā)展情況等因素來針對(duì)性的進(jìn)行調(diào)整，同時(shí)政策調(diào)整過程中也應(yīng)該與保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)、行業(yè)協(xié)會(huì)進(jìn)行充分溝通，必要時(shí)通過社會(huì)調(diào)研來了解個(gè)稅遞延保險(xiǎn)發(fā)展的實(shí)際需求，使定額的調(diào)整更加科學(xué)，提升客戶滿意度的同時(shí)也不會(huì)破壞社會(huì)的穩(wěn)定發(fā)展。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

RW 20 digital攪拌器（美國(guó)IKA公司）；Sorvall BIOS A離心機(jī)（美國(guó)賽默飛公司）；Mastersizer 2000激光粒度儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）。

式中，可見頻率步進(jìn)雷達(dá)脈沖組回波信號(hào)混頻、采樣后可視為一組離散Chirp信號(hào)。因此，目標(biāo)高分辨距離像的運(yùn)動(dòng)補(bǔ)償問題可以轉(zhuǎn)化為Chirp信號(hào)參數(shù)估計(jì)問題。對(duì)式(10)結(jié)果進(jìn)行MDCFT處理，得

1.2 試藥

綜合類實(shí)驗(yàn)室兼具上述兩種或兩種以上功能，如藥劑學(xué)(化學(xué)與工學(xué))、生藥學(xué)(生物學(xué)與化學(xué))、生物醫(yī)學(xué)工程(生物學(xué)與放射性)等，需依據(jù)具體情況尋找和制定防控點(diǎn)。

他克莫司（福建科瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：170615，含量：99.8 %）；聚乙烯醇（江西阿爾法高科藥業(yè)有限公司，批號(hào)：160922，含量：99.5 %）；苯扎氯銨[泰柯棕化（張家港）有限公司，批號(hào)：20170127，含量99.5 %]；氯化鈉（河北華晨藥業(yè)有限公司，批號(hào)：160619，含量：99.9 %）；磷酸二氫鈉（AR；國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170218，含量：99.0 %）；磷酸氫二鈉（AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170218，含量：99.0 %）；無水乙醇（AR，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170218，含量：99.7 %）。

2 方法與結(jié)果

2.1 他克莫司納米混懸滴眼液的制備

2.1.1 他克莫司納米微粒的制備 將他克莫司1.00 g溶解于4 ml無水乙醇中，加10 %（w/v）苯扎氯銨水溶液4 ml，攪拌均勻；經(jīng)0.22 μm聚偏氟乙烯（PVDF）濾膜過濾，制得他克莫司溶液；在無菌條件下，將他克莫司溶液在高速攪拌（1500 r/min）下加入滅菌注射用水160 ml中，析出他克莫司納米微粒，繼續(xù)攪拌6 h，在無菌條件下，將上述溶液離心（10 000 r/min）10 min，收集固體，加入160 ml 注射用水，使固體微粒懸浮，再次離心（10 000 r/min）10 min，收集固體，制得他克莫司納米微粒。

2.2.2 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集及分析 由Minitab 18版軟件生成三中心全因子試驗(yàn)表，按設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)。采用馬爾文2000粒度儀測(cè)定粒徑，分散相選擇水，分散相折射率選擇1.330，粒子折射率選擇1.620，泵速設(shè)置為2000 r/min。測(cè)定結(jié)果見表2。

2.2.1 全因子試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按L19（24）全因子設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察藥物-溶劑比、溶劑-反溶劑比、攪拌速度、攪拌時(shí)間對(duì)他克莫司納米混懸液粒徑的影響。

通過軟件分析了主效應(yīng)和二階交互效應(yīng)對(duì)粒徑的影響，通過Pareto圖可見攪拌速度和藥物-溶劑比這2個(gè)因素顯著影響他克莫司納米微粒的粒徑，見圖1。對(duì)影響粒徑的因素進(jìn)行方差分析也可看出攪拌速度和藥物-溶劑比可顯著影響粒徑，其P值均小于0.05。

2.2 他克莫司納米微粒制備工藝優(yōu)化

他克莫司納米微粒制備工藝是制備他克莫司納米混懸滴眼液的關(guān)鍵工藝，將影響混懸滴眼液粒度，進(jìn)而影響其吸收速率和程度。研究中先后采用球磨法、高壓均質(zhì)法、氣流粉碎法和溶劑-反溶劑法等制備納米微粒，考察其粒徑，最終選擇采用溶劑-反溶劑法制備他克莫司納米微粒。在此基礎(chǔ)上，采用全因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)一步對(duì)他克莫司納米微粒制備工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。

2.1.3 他克莫司納米混懸滴眼液的制備 在無菌條件下，將他克莫司納米微粒加入輔料溶液中，攪拌均勻，加注射用水至1000 ml，即得他克莫司納米混懸滴眼液。

表1 他克莫司納米混懸液制備工藝全因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1.2 輔料溶液的制備 將透明質(zhì)酸1.20 g在攪拌下加入900 ml注射用水中，攪拌2 h以上使溶脹完全；在攪拌下加入聚乙烯醇7.00 g，繼續(xù)攪拌至完全溶解；加入10 %苯扎氯銨溶液1.00 g，攪拌均勻；加入氯化鈉8.50 g、磷酸氫二鈉0.05 g、磷酸二氫鈉0.76 g，繼續(xù)攪拌溶解，加磷酸和5 mol/L氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)pH值至5.0，經(jīng)0.45 μm聚醚砜濾膜過濾后，121 ℃滅菌15 min即得。

表2 他克莫司納米混懸液全因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

由結(jié)果分析可知，攪拌速度和藥物-溶劑比是顯著影響他克莫司混懸液粒徑的主要因素，為了研究攪拌速度和藥物-溶劑比對(duì)粒徑的影響情況，繪制了D50和D90的等值線圖，其中在等值線圖里控制了溶劑-反溶劑比例為1:40，攪拌時(shí)間為6 h。由圖2可見快速攪拌、較小的藥物-溶劑比制備的他克莫司納米混懸液樣品的粒徑更小。

表3 D50方差分析表

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合手術(shù)適應(yīng)證；②于本院行麥默通微創(chuàng)旋切術(shù)；③患者及其家屬自愿配合心理干預(yù)行為。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神障礙或有精神疾病史者；②近期發(fā)生重大生活事件者。③合并其他重大疾病者。

圖1 對(duì)D50和D90有影響的主效應(yīng)和二階交互效應(yīng)的分析

使用Minitab軟件對(duì)影響他克莫司納米混懸液粒徑的因素進(jìn)行分析并建模擬合。對(duì)D50進(jìn)行分析擬合的結(jié)果顯示其失擬P=0.37>0.05、彎曲P=0.12>0.05，對(duì)D90進(jìn)行分析擬合時(shí)具有相同的規(guī)律，表明此模型合適。表3為對(duì)D50分析和擬合的結(jié)果。

圖2 D50與D90的等值線圖

根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果，確定他克莫司納米混懸液的最優(yōu)工藝參數(shù)：藥物-溶劑比為1:4、溶劑-反溶劑比為1:40、攪拌速度為1500 r/min、攪拌時(shí)間為6 h。

2.3 優(yōu)選工藝驗(yàn)證

根據(jù)優(yōu)化后的工藝制備3批他克莫司納米混懸滴眼液，D50為0.18～0.21 μm，沉降體積比為0.96。將樣品置溫度40 ℃±2 ℃、相對(duì)濕度75 %±5 %的條件下放置6個(gè)月，分別測(cè)定0 d和1，2，3，6月時(shí)樣品的D50、D90和沉降體積比，結(jié)果見表4。3批樣品的D50、D90和沉降體積比結(jié)果均在限度要求范圍內(nèi)，6個(gè)月與0 d相比均未發(fā)生顯著變化，表明采用溶劑-反溶劑法制備他克莫司納米混懸滴眼液的工藝穩(wěn)定，重復(fù)性好。

這次事件，讓我明白了很多。班主任作為班級(jí)管理的第一責(zé)任人，要敢于承認(rèn)自己的錯(cuò)誤，和學(xué)生站在一條線上，用自己真誠的行為打動(dòng)學(xué)生。這種榜樣的力量會(huì)有更強(qiáng)的感染力，無形中會(huì)讓學(xué)生對(duì)你敞開心扉，把班級(jí)當(dāng)成自己的家，從而有利于班級(jí)的管理和良好班風(fēng)的形成。

表4 優(yōu)選工藝驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

本研究采用溶劑-反溶劑法制備他克莫司納米混懸液，通過離心法去除有機(jī)溶劑制得納米微粒，加入穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等制成粒度D50小于0.3 μm，并具有較好穩(wěn)定性的他克莫司納米混懸滴眼液。

本研究通過全因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究了藥物-溶劑比、溶劑-反溶劑比、攪拌速度、攪拌時(shí)間對(duì)制備納米微粒的粒徑影響，確定最優(yōu)工藝參數(shù)：藥物-溶劑比為1:4、溶劑-反溶劑比為1:40、攪拌速度為1500 r/min、攪拌時(shí)間為6 h。制備的3批他克莫司納米混懸滴眼液D50均在300 nm內(nèi)，沉降體積比均＞0.90；樣品進(jìn)行加速試驗(yàn)考察，6個(gè)月樣品的粒徑和沉降體積比與0 d樣品比較，未見顯著變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：優(yōu)選的他克莫司納米混懸滴眼液制備工藝可行，產(chǎn)品質(zhì)量可控，穩(wěn)定性良好。