秦健峰，蘇梓霞,2，郝二偉，藍(lán)滴,2，陳鋒，孫燕蓮，韋瑋，杜正彩，侯小濤,2，鄧家剛

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)科學(xué)實驗中心，廣西中藥藥效研究重點實驗室，農(nóng)作物廢棄物功能成分研究協(xié)同創(chuàng)新中心，廣西南寧 530200）（2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧 530200）

隨著生活質(zhì)量和飲食水平的不斷提高，人們不自覺地攝入更多高熱量、高脂、高糖的食品，導(dǎo)致了患高脂血癥、糖尿病、高血壓等疾病的概率也越來越高。高脂血癥（hyperlipidemia，HLP），是一種由于體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常紊亂引起的病癥，主要表現(xiàn)為血漿中的膽固醇（TC）過高和（或）甘油三酯（TG）過高或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）過高或高密度脂蛋白膽固醇水平過低（HDL-C）的各種血脂成分異常[1]，是誘發(fā)動脈粥樣硬化、心血管疾病及脂肪肝病的重要病因[2,3]。高脂血癥已經(jīng)成為冠心病的重要致病因素，逐漸成為嚴(yán)重危害全人類身體健康的奪命兇手[4,5]。

防治高脂血癥的主要措施有藥物治療、運動以及飲食控制等，目前有效治療高脂血癥的藥物主要有他汀類和貝特類藥物，但這些藥物長期使用后會有許多不良反應(yīng)。因此副作用小且資源豐富的中藥在治療高脂血癥方面極具優(yōu)勢。其中以中藥為原料制備的降脂保健茶具有預(yù)防動脈硬化、調(diào)節(jié)人體新陳代謝、降低血壓血脂、保護(hù)肝臟等保健作用，且其采用沖飲的方式進(jìn)行服用，大大提高了用藥依從性，更易被消費者所接受，因此降脂保健茶的開發(fā)前景更為廣闊[6,7]。

金花茶葉是山茶科山茶屬植物金花茶Camellia nitidissima（Merrill）Sealy的葉子，金花茶被美譽為“植物界的大熊貓”、“茶族皇后”，為廣西壯族傳統(tǒng)藥用植物，2010年被國家衛(wèi)生部列入新資源食品名錄[8]。金花茶葉中的主要活性成分有茶多酚、黃酮類、多糖、皂苷等，這些活性成分具有抗腫瘤、抗氧化、降血脂以及防止動脈粥樣硬化等作用[9,10]，對金花茶葉進(jìn)行制茶適宜性的實驗研究，結(jié)果表明金花茶葉的茶多酚/氨基酸比值小，是一種制作保健茶的好原料。羅漢果為葫蘆科多年生藤本植物羅漢果（Siraitia grosvenoriiSwingle）的果實，是廣西道地藥材。羅漢果性涼、味甘，歸肺、大腸經(jīng)，具有清肺利咽，化痰止咳，潤腸通便、保肝、降血糖、降血脂的功效[11-15]。

市售產(chǎn)品主要是以金花茶葉或羅漢果為單一原料所制備，以金花茶葉和羅漢果等原料組合制成的調(diào)節(jié)血脂的復(fù)方產(chǎn)品極少。本研究以金花茶葉和羅漢果組合制備的復(fù)方產(chǎn)品善清金花茶為研究對象，采用高脂血癥小鼠模型，對善清金花茶調(diào)節(jié)血脂水平和護(hù)肝作用進(jìn)行了探究，為善清金花茶的開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

C57BL/6雄性小鼠，40只，體重20±2 g，購于湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2016-0002。小鼠在SPF級動物房進(jìn)行分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水，溫度20~25 ℃，相對濕度50%~60%。普通維持飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機分組后開始實驗。

1.2 實驗藥品與試劑

善清金花茶，廣西中藥藥效研究重點實驗室研制；辛伐他汀，浙江京新藥業(yè)股份有限公司；總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、超氧化物歧化酶、丙二醛測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所；純凈水，娃哈哈有限公司。

普通飼料，成分為玉米33%，豆粕20%，麩皮18%，魚粉5%，面粉15%，酵母粉1%，植物油1%，食鹽1%，其他成分6%，北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

高脂飼料，成分為酪蛋白25.80%，胱氨酸0.40%，麥芽糊精16.30%，蔗糖9.40%，纖維素6.50%，豬油31.70%，大豆油3%，酒石酸膽堿0.30%，礦物質(zhì)及維他命成分6.60%，北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

1.3 實驗儀器

RVC 2-331R真空離心濃縮儀，德國Christ；ALPHA 1-2 LD plus冷凍干燥機，德國Christ；TGL-16M臺式冷凍離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；SOP電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；Envision多功能酶標(biāo)儀，Perkin Elmer。

1.4 實驗方法

1.4.1 受試藥的制備

取適量善清金花茶樣品，按料液比1:10、1:8、1:6，小火保持微沸狀態(tài)下依次浸提三次，每次浸提30 min，合并浸提液，減壓濃縮至適量體積，隨后冷凍干燥24h，成浸膏狀，密封，4 ℃保存。取適量浸膏用純凈水分別配制成濃度為103.98 mg/mL（低劑量組）和207.96 mg/mL（高劑量組）的藥液，取適量辛伐他汀用純凈水配置成0.4 mg/mL,備用。

1.4.2 分組與造模、給藥

C57BL/6小鼠40只，經(jīng)普通飼料進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，稱重后按體重隨機分為空白對照A組、模型B組、陽性藥C組、善清金花茶低劑量SQL組、善清金花茶高劑量SQH組共五組?？瞻讓φ誂組給予普通維持飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，模型B組、陽性藥C組以及善清金花茶給藥組均給予高脂飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。陽性藥組和金花茶低劑量組給藥劑量按照人的等效劑量換算所得，金花茶高劑量為低劑量兩倍，各組小鼠灌胃的藥物及給藥劑量見表1，每次灌胃體積均按0.1 mL/10 g計算，各組每天灌胃一次，連續(xù)灌胃8周。每周對各組小鼠進(jìn)行稱重并記錄，觀察各組小鼠體重變化并重新調(diào)整灌胃體積。

表1 各組小鼠灌胃的藥物及給藥劑量Table 1 Gavage drugs and dosage of mice in each group

1.4.3 血清的獲取及指標(biāo)測定

按“1.4.2”項下方法連續(xù)給藥8周，末次給藥后，小鼠禁食不禁水12 h，摘取眼球取血，靜置1 h后將血樣離心 10 min（4 ℃，3000 r/min），分離血清于-20 ℃密封保存。采用試劑盒檢測血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，并按照公式計算AI值。

1.4.4 肝臟的獲取及指標(biāo)測定

解剖小鼠獲取肝臟，用生理鹽水清洗后，吸干并稱重，并根據(jù)公式計算肝臟指數(shù)，按照試劑盒操作方法測定肝臟組織SOD和MDA含量。

1.4.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用GraphPad Prism 6.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，“n”表示“每組小鼠的數(shù)量”，采用獨立樣本T檢驗分析，以p<0.05認(rèn)為有顯著性差異，p<0.01為有極顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 善清金花茶對小鼠體質(zhì)量的影響

肥胖與高脂血癥息息相關(guān)，而體重是小鼠肥胖程度最為直觀的指標(biāo)之一[16]。各組小鼠體重變化如表2所示，與正常組相比，高脂喂養(yǎng)組小鼠體重變化有顯著差異，說明高脂模型建立成功。與模型組相比，給藥組小鼠體重均有所下降，其中C組和SQL組與B組進(jìn)行比較，有顯著的差異，SQH組小鼠體重有所下降但無顯著性差異。說明善清金花茶可以較好的控制小鼠由于高脂飼料喂養(yǎng)而導(dǎo)致的體重增加，其中善清金花茶低劑量的效果與辛伐他汀的效果接近，有很好的降脂作用，高劑量組的效果不明顯，可能是由于提取物中糖分較多，加大劑量造成小鼠攝取糖分過多使體重增加。

表2 善清金花茶對小鼠體質(zhì)量的影響Table 2 Effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on weight of mice (± s , n=8)

表2 善清金花茶對小鼠體質(zhì)量的影響Table 2 Effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on weight of mice (± s , n=8)

注：“**”表示與模型組相比p<0.01，有極顯著性差異，“*”表示與模型組相比p<0.05，有顯著性差異。下表同。

組別 Weight/g 0 week 2 week 4 week 6 week 8 week空白對照A 組 20.79±0.58 21.50±1.07 21.49±1.18* 21.99±1.14* 22.41±1.29**模型 B 組 21.44±0.89 22.61±1.41 23.03±1.56 23.64±1.73 24.62±1.20陽性藥C 組 21.23±1.02 21.43±0.79 21.66±0.75 22.79±0.90 22.89±1.03**低劑量SQL 組 21.49±0.49 21.66±0.81 22.19±0.98 22.59±1.01 23.14±0.40**高劑量SQH 組 21.35±2.28 22.79±2.00 23.74±1.82 24.10±1.38 24.24±0.85

2.2 善清金花茶對小鼠血脂水平的影響

由表3可知，模型組比空白對照組的TC、TG、LDL-C含量分別增加了34.44%、33.64%、27.45%，HDL-C含量降低了14.94%，說明經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)后，小鼠的血脂明顯升高，高脂血癥模型制造成功。與模型B組比較，給藥組的小鼠血清中TG、TC、LDL-C含量均降低，HDL-C含量均升高，說明陽性藥和善清金花茶均能調(diào)節(jié)高脂模型小鼠的血脂水平。SQL組與B組相比，小鼠血清中的TC、TG、LDL-C的含量分別降低了 20%、16.08%、21.54%，HDL-C的含量增加了27.60%，與陽性藥組相比效果更好，說明其調(diào)節(jié)血脂水平的作用在一定程度上優(yōu)于辛伐他汀。以上說明善清金花茶對高脂血癥小鼠血清的血脂有良好的調(diào)節(jié)作用，低劑量效果更為顯著。

表3 各組小鼠之間的血脂水平Table 3 Blood lipid levels among mice in each group (±s , n=8)

表3 各組小鼠之間的血脂水平Table 3 Blood lipid levels among mice in each group (±s , n=8)

組別 TC/(mmol/L) TG/(mmol/L) HDL-C/(mmol/L) LDL-C/(mmol/L)空白對照A 組 3.31±0.84** 1.07±0.33* 3.28±0.21** 0.51±0.06**模型 B 組 4.45±0.24 1.43±0.23 2.79±0.30 0.65±0.06陽性藥C 組 3.92±0.44** 1.26±0.30 3.25±0.19** 0.56±0.11低劑量SQL 組 3.56±0.35** 1.20±0.21 3.56±0.16** 0.51±0.10**高劑量SQH 組 4.04±0.35 1.16±0.56 3.11±0.67 0.60±0.15

寧恩創(chuàng)等[17]對金花茶葉進(jìn)行降脂實驗研究，發(fā)現(xiàn)金花茶葉水提物低劑量對大鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量分別為降低了5.26%、6.29%、8.32%，HDL-C含量提高了14.55%。林國平等[15]發(fā)現(xiàn)羅漢果對高脂高糖飲食誘導(dǎo)的糖尿病兔的TC、TG含量有降低的作用。以上研究結(jié)果顯示金花茶葉和羅漢果都具有降血脂的作用，而本研究將二者與其他原料科學(xué)的搭配在一起，進(jìn)行取長補短，研究結(jié)果也表明善清金花茶能夠多方面的調(diào)節(jié)血脂，其效果不僅優(yōu)于單組分給藥，并且在一定程度上優(yōu)于陽性藥辛伐他汀。

2.3 善清金花茶對小鼠AI的影響

由圖1可知，模型組小鼠的AI指數(shù)高于空白對照組，說明高脂血癥小鼠造模成功；而經(jīng)陽性藥及善清金花茶給藥后的各組小鼠的 AI均低于模型組，其中低劑量組與模型組相比，p<0.05，有顯著性差異，低劑量SQL組的AI降低了46.07%，與陽性藥相比，SQL降低AI的效果在一定程度上優(yōu)于陽性藥辛伐他汀。說明善清金花茶對緩解高脂血癥小鼠的動脈粥樣硬化有顯著效果。

圖1 善清金花茶對小鼠AI的影響Fig.1 The effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on AI of mice (±s , n=8)

2.4 善清金花茶對小鼠肝臟SOD活性、MDA含量的影響

SOD活性主要可以反映小鼠肝臟機體的抗氧化能力，MDA的含量可以反映小鼠肝臟機體相應(yīng)的過氧化損傷程度。由表4可知，模型組的SOD活性低于空白對照組，模型組的MDA含量高于空白對照組，說明經(jīng)過8周的高脂飲食對小鼠肝臟造成了一定的損傷。給藥后，陽性藥組及善清金花茶低劑量SQL組和高劑量 SQH組的 SOD活性分別增加了 13.89%、19.29%、10.54%，MDA含量分別降低了 26.59%、16.27%、9.33%，說明善清金花茶在一定程度上能提高小鼠肝臟SOD活性，降低MDA含量，提高小鼠肝臟的抗氧化水平，在一定程度上對小鼠肝臟具有潛在的保護(hù)作用。

表4 各組小鼠之間的SOD活性、MDA含量Table 4 SOD activity and MDA content among mice in each group (±s , n=8)

表4 各組小鼠之間的SOD活性、MDA含量Table 4 SOD activity and MDA content among mice in each group (±s , n=8)

組別 SOD/(U/mg prot) MDA/(nmol/mg prot)空白對照A組 137.77±26.06* 4.54±0.76模型B組 109.78±17.46 5.04±0.56陽性藥C組 125.03±2.76* 3.70±0.66*低劑量SQL組 130.96±27.47 4.22±0.30高劑量 SQH 組 121.35±10.83 4.57±0.54

何進(jìn)勇等[18]研究了金花茶的三種提取物的降脂效果，發(fā)現(xiàn)金花茶提取物對高脂血癥小鼠的 SOD活性和MDA含量的影響不大，說明金花茶單獨使用時，對SOD和MDA的影響較小，而善清金花茶對小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)的作用效果優(yōu)于金花茶提取物，善清金花茶對高脂血癥小鼠的肝臟有一定的保護(hù)作用，說明以金花茶為原料的復(fù)方產(chǎn)品相比于單一產(chǎn)品在護(hù)肝方面具有一定的優(yōu)勢。

2.5 善清金花茶對小鼠肝臟指數(shù)的影響

由圖2可知，模型組經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)后，肝臟指數(shù)顯著（p<0.01）高于空白對照組，說明高脂血癥小鼠模型成功建立。給藥后，各組的肝臟指數(shù)均低于模型組，其中陽性藥C組、低劑量SQL組，與模型B組相比，肝臟指數(shù)明顯降低，有極顯著差異（p<0.01），且低劑量SQL組的效果優(yōu)于陽性藥C組，高劑量SQH組的肝臟指數(shù)有所降低但無顯著性差異。說明善清金花茶能夠降低高脂飼料喂養(yǎng)造成的高脂血癥小鼠的肝臟質(zhì)量及脂肪量，并且對肝臟脂肪的增加具有一定的預(yù)防作用。

圖2 善清金花茶對小鼠肝臟指數(shù)的影響Fig.2 The effect of Shanqing Camellia nitidissima tea bag on liver index of mice (±s , n=8)

3 結(jié)論

3.1 隨著人們生活水平的提高，高脂血癥的發(fā)病率呈上升趨勢。高脂血癥是腦血栓、冠心病、動脈粥樣硬化等心血管疾病致病的重要因素。目前，臨床上主要使用他汀類和貝特類等西藥降血脂，雖然效果明顯，但是需要長期使用，易產(chǎn)生肝臟損傷等毒副作用。善清金花茶的原料金花茶葉與羅漢果均具有降血脂的作用，以二者為主要原料制備而成的保健茶降脂效果明顯，安全健康，可以長期飲用而不必?fù)?dān)心毒副作用，且原料均為廣西道地藥材，本土資源豐富，具有廣闊的應(yīng)用前景。

3.2 本實驗通過建立高脂血癥小鼠模型，驗證善清金花茶的調(diào)脂作用。實驗表明，小鼠進(jìn)行高脂飲食干預(yù)后，血清中的TC、TG、LDL-C含量顯著提高，HDL-C顯著降低，AI有所提高，說明在經(jīng)過8周的高脂飲食后，成功建立了小鼠高脂血癥模型。經(jīng)過善清金花茶干預(yù)，可以降低高脂血癥模型小鼠TC、TG、LDL-C含量，提高HDL-C含量，降低AI，表明善清金花茶對高脂血癥小鼠的血脂水平有調(diào)節(jié)作用，其中善清金花茶低劑量的在調(diào)節(jié)血脂水平及降低 AI方面的效果在一定程度上優(yōu)于陽性藥辛伐他汀和高劑量SQH。同時，由于高脂血癥導(dǎo)致小鼠肝臟的 SOD活性降低、MDA含量升高，肝臟指數(shù)升高，說明小鼠肝臟受到一定的損傷。經(jīng)過善清金花茶給藥之后，小鼠肝臟的SOD活性提高，MDA含量降低，肝臟指數(shù)降低，表明善清金花茶對小鼠肝臟有一定的保護(hù)作用。

3.3 綜上所述，善清金花茶在調(diào)節(jié)高脂血癥小鼠的血脂水平以及緩解小鼠的動脈粥樣硬化方面效果顯著，且有一定的護(hù)肝作用。本實驗為善清金花茶的進(jìn)一步開發(fā)及應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。