李 香，陳胡羚，陳 瑩，王虹雅，侯巧弟，王萍萍，郭珊珊，李引乾*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊陵 712100；2.陜西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西西安 710016；3.寶雞市鳳翔區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣站，陜西寶雞 721400)

甲砜霉素(Thiamphenicol，TAP)是氯霉素類廣譜抗菌藥物，TAP為白色的結(jié)晶性粉末，pH呈中性，無(wú)臭味。TAP對(duì)光及熱的穩(wěn)定性好，但具有引濕性。室溫下的溶解度為5 g/L～10 g/L，較氯霉素略大，在乙醇中的溶解度為50 g/L，TAP幾乎不溶于乙醚與氯仿[1-2]。TAP是一種肝微粒體酶抑制劑，因抑制許多藥物(如降糖藥、抗凝劑、抗癲癇藥和環(huán)磷酰胺)在肝中的代謝而增加其作用時(shí)間和毒性[3-4]，此外，TAP在較低血藥濃度時(shí)，可降低青霉素的抗菌活性，故應(yīng)將青霉素先于TAP數(shù)小時(shí)使用[5]。為防止用藥合并癥的發(fā)生，應(yīng)注意TAP與其他藥物的相互作用。

乳房炎作為我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展始終面臨的難題，目前有許多相關(guān)藥物投入使用。理想的治療藥物應(yīng)滿足以下特點(diǎn)：①最小抑菌濃度低；②肌內(nèi)注射時(shí)藥物利用度高；③藥物在血液中呈游離狀態(tài)；④藥物的脂溶性高；⑤藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合率低；⑥藥物的半衰期長(zhǎng)；⑦藥物活性不受炎性分泌物的影響；⑧藥物在體內(nèi)不蓄積[6]。目前，除了抗生素療法，中藥療法、激素療法、物理療法、封閉療法、生物療法等都可用于乳房炎的治療。根據(jù)乳房炎類型不同，治療藥物或方法也有所不同[7]。急性乳房炎常采用紅霉素、四環(huán)素、磺胺嘧啶鈉或其他抗生素進(jìn)行全身治療，也可用青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、卡那霉素等抗生素進(jìn)行乳室灌注。慢性乳房炎常采用卡那霉素或環(huán)丙沙星配合青霉素共同灌注治療。隱性乳房炎常通過(guò)提高家畜自身免疫力來(lái)預(yù)防，盡量避免使用抗生素，必要時(shí)可采用青霉素和鏈霉素聯(lián)合灌注治療[8]。

目前，大多都使用單種抗菌藥用于預(yù)防和治療家畜乳房炎，其制作的工藝簡(jiǎn)單易操作，但效果發(fā)揮較為緩慢，且使用也較為復(fù)雜。將藥物研制成復(fù)方注射液，可以有效提高藥物的作用效果，減少藥物使用量，增強(qiáng)藥物安全性，有利于藥物的臨床使用。因此，本研究以TAP為主藥，輔以氟尼辛葡甲胺[9-10]及其他輔料，研制出復(fù)方TAP注射液，并對(duì)該注射液進(jìn)行質(zhì)量控制研究和體外抑菌試驗(yàn)，為其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品及試劑 TAP(批號(hào)20180611)，武漢貝爾卡生物醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品；氟尼辛葡甲胺(批號(hào)20170921)，河北佰品生物科技有限公司產(chǎn)品；聚乙二醇400(分析純，批號(hào)20180318)、乙醇胺(分析純，批號(hào)20170926)、無(wú)水亞硫酸鈉(批號(hào)20170307)和N，N-二甲基甲酰胺(批號(hào)20180118)，陜西盤龍翊海醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 試驗(yàn)用菌 無(wú)乳鏈球菌、大腸埃希氏菌及金黃色葡萄球菌，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)室分離并保存。

1.1.3 儀器設(shè)備 pH計(jì)(Bante210)，上海般特儀器有限公司產(chǎn)品；大容量恒溫水浴箱(DZ-75 L)、澄明度檢測(cè)儀(YB-Ⅲ)，成都華衡儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 復(fù)方TAP注射液的研制

1.2.1.1 復(fù)方TAP注射液的處方 復(fù)方TAP注射液以TAP為主藥，分別以氟尼辛葡甲胺、N，N-二甲基甲酰胺、聚乙二醇400、無(wú)水亞硫酸鈉和活性炭作為輔藥，助溶劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑和吸附劑，通過(guò)預(yù)試驗(yàn)，確定主藥和附加劑的用量。

1.2.1.2 處方工藝 根據(jù)處方進(jìn)行配液，利用活性炭吸附，采用濾膜濾過(guò)溶液后，進(jìn)行灌裝、滅菌、以及查漏，制得復(fù)方TAP注射液，即按照一般注射液的生產(chǎn)工藝進(jìn)行制備[11]。

1.2.1.3 質(zhì)量控制 澄明度檢查，利用澄明度檢測(cè)儀對(duì)所制備的復(fù)方TAP注射液進(jìn)行澄明度檢測(cè)，對(duì)其外觀特征進(jìn)行描述，主要觀察有無(wú)可見(jiàn)異物；pH 檢查，利用pH計(jì)對(duì)制備的復(fù)方TAP注射液的pH進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2 復(fù)方TAP注射液的藥敏試驗(yàn)

1.2.2.1 抗菌藥液的制備 以本試驗(yàn)研制的復(fù)方TAP注射液為試驗(yàn)藥(記為A液)。以TAP注射液為對(duì)照藥(記為B液)，按配方制備TAP注射液，攪拌澄清后再加入活性炭，振蕩均勻，20 min后用過(guò)濾，用乙醇胺調(diào)節(jié)pH至7.0～7.5，最后用微孔濾膜過(guò)濾，灌封，滅菌得TAP注射液。

1.2.2.2 藥敏試驗(yàn) 按參考文獻(xiàn)[12]方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方TAP注射液質(zhì)量控制結(jié)果

2.1.1 澄明度檢查結(jié)果 制備的復(fù)方TAP注射液澄清，未見(jiàn)異物，符合獸藥典對(duì)注射液澄明度要求[13]。

2.1.2 pH檢查結(jié)果 復(fù)方TAP注射液pH檢測(cè)結(jié)果為7.3，在規(guī)定的4.0～9.0范圍內(nèi)[13]，符合獸藥典注射液對(duì)pH的要求。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 MIC測(cè)定結(jié)果 A液對(duì)無(wú)乳鏈球菌、大腸埃希氏菌及金黃色葡萄球菌的MIC試驗(yàn)結(jié)果如圖1。A液(復(fù)方TAP注射液)對(duì)3種細(xì)菌的MIC分別為12、12、8 mg/L表1。B液對(duì)3種細(xì)菌的MIC結(jié)果如圖2。B液(TAP注射液)對(duì)3種細(xì)菌的MIC分別是16、12、16 mg/L見(jiàn)表1。

表1 兩種注射液對(duì)3種致病菌的MIC結(jié)果

A.無(wú)乳鏈球菌; B.大腸埃希氏菌; C.金黃色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

A.無(wú)乳鏈球菌; B.大腸埃希氏菌; C.金黃色葡萄球菌A.S.agalactiae; B.E.coli; C.S.aureus

結(jié)果顯示，復(fù)方TAP注射液(A液)對(duì)無(wú)乳鏈球菌、大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌呈現(xiàn)良好的抑菌效果，優(yōu)于TAP注射液(B液)。

2.2.2 MBC測(cè)定結(jié)果 A液(復(fù)方TAP注射液)對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC是32 mg/L，見(jiàn)表2。A液對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC試驗(yàn)結(jié)果如圖3。A液對(duì)大腸埃希氏菌的MBC試驗(yàn)結(jié)果如圖4。A液(復(fù)方TAP注射液)對(duì)大腸埃希氏菌的MBC是32 mg/L，見(jiàn)表2。A液(復(fù)方TAP注射液)對(duì)無(wú)乳鏈球菌不殺菌，見(jiàn)表2。A液對(duì)無(wú)乳鏈球菌的MBC試驗(yàn)結(jié)果，如圖5。

表2 兩種注射液對(duì)3種致病菌的MBC結(jié)果

A～F.A液濃度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid A are 4,8,16,32,64,128 mg/L

A～C.A液濃度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 8,16,32 mg/L

A～C.A液濃度32、64、128 mg/LA-C.The concentrations of liquid A are 32,64，128 mg/L

B液對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC試驗(yàn)結(jié)果，如圖6。B液(TAP注射液)對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC是64 mg/L，見(jiàn)表2。B液對(duì)大腸埃希氏菌MBC試驗(yàn)結(jié)果，如圖7。B液(TAP注射液)對(duì)大腸埃希氏菌的MBC是32 mg/L，見(jiàn)表2。B液對(duì)無(wú)乳鏈球菌的MBC試驗(yàn)結(jié)果，如圖8。B液(TAP注射液)對(duì)無(wú)乳鏈球菌不殺菌，結(jié)果見(jiàn)表2。復(fù)方TAP注射液(A液)與TAP注射液(B液)對(duì)大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌均具有明顯的體外殺菌作用，而對(duì)無(wú)乳鏈球菌則無(wú)體外殺菌作用。

A～F.B液濃度4、8、16、32、64、128 mg/LA-F.The concentrations of liquid B are 4,8,16,32,64,128 mg/L

A～C.B液濃度8、16、32 mg/LA-C.The concentrations of liquid B are 8,16,32 mg/L

A、B.B液濃度64 mg/L and 128 mg/LA，B.The concentrations of liquid B are 64 mg/L and 128 mg/L

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)最佳處方的選擇采用了正交試驗(yàn)和極差法兩種方法。本試驗(yàn)考慮溶劑性質(zhì)及性價(jià)比最終確定以水作為溶劑。N，N-二甲基甲酰胺[14]和N，N-二甲基乙酰胺均可作為本試驗(yàn)處方的助溶劑，而以N，N-二甲基甲酰胺效果最為明顯，因此選N，N-二甲基甲酰胺作助溶劑。PEG-400[15]無(wú)毒無(wú)刺激，且能很好地保持溶液的穩(wěn)定性，故選其作為穩(wěn)定劑。無(wú)水亞硫酸鈉與本試驗(yàn)處方不會(huì)發(fā)生配伍禁忌，故選其作為抗氧化劑。質(zhì)量控制是注射液生產(chǎn)必檢的項(xiàng)目?jī)?nèi)容，本試驗(yàn)以注射液生產(chǎn)要求分別對(duì)澄明度、酸堿度進(jìn)行進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，本試驗(yàn)制備的復(fù)方甲砜霉素注射液各項(xiàng)檢查均合格，符合藥典要求。

TAP是一種廣譜抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌都有作用[16]。本試驗(yàn)結(jié)果得出，復(fù)方甲砜霉素注射液與甲砜霉素注射液對(duì)金葡菌和大腸埃希氏菌的殺菌效果明顯，對(duì)無(wú)乳鏈球菌無(wú)殺菌作用。分析可能是由于氟尼辛葡甲胺為解熱鎮(zhèn)痛劑，主要起解熱鎮(zhèn)痛的作用，而無(wú)抑菌作用，但在實(shí)際應(yīng)用中，氟尼辛葡甲胺可對(duì)疾病的恢復(fù)起著一定的促進(jìn)作用。