趙文彬 王 曦 李二龍 韓成龍 劉珈言 梅 蓉

四川大學(xué)華西醫(yī)院皮膚性病科（四川成都 610041）

尖銳濕疣是臨床中常見的一種性傳播疾病，主要由人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）引起，發(fā)病率及傳染率較高[1]。近幾年我國(guó)尖銳濕疣發(fā)病率顯著上升，且呈年輕化趨勢(shì)，一些患者經(jīng)過(guò)系統(tǒng)治療后依舊有很大的復(fù)發(fā)可能，如何降低患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，已成為性病臨床工作的難點(diǎn)[2-3]。尖銳濕疣發(fā)病、消退、復(fù)發(fā)及癌變等都與免疫功能密切相關(guān)，患者血清中輔助型T細(xì)胞1（T helper 1 cell，Th1）濃度降低、輔助型T細(xì)胞2（T helper 2 cell，Th2）濃度升高時(shí)，會(huì)引起Th1/Th2比值失衡，造成復(fù)發(fā)[4-5]。血清白細(xì)胞介素12（Interleukin 12，IL-12）、白細(xì)胞介素2（Interleukin 2，IL-2）為Th1型細(xì)胞亞群常見因子，白細(xì)胞介素4（Interleukin 4，IL-4）、白細(xì)胞介素10（Interleukin 10，IL-10）為Th2型細(xì)胞亞群常見因子，與患者機(jī)體免疫功能有關(guān)[6]。本研究旨在探討血清白細(xì)胞介素因子IL-2、IL-12、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值，為臨床提供參考依據(jù)，報(bào)告如下。

資料與方法

一、一般資料

選取我院2017年10月至2019年10月收治的68例尖銳濕疣患者，根據(jù)治療后是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組（31例）和無(wú)復(fù)發(fā)組（37例）；同時(shí)選擇同期健康體檢者35例為對(duì)照組。復(fù)發(fā)組男16例，女15例；年齡20～52歲，平均年齡（35.96±4.72）歲；病程2～13月，平均（7.49±2.18）月；疣體直徑1～10 mm，平均直徑（5.16±1.18）mm；疣體數(shù)目1～4個(gè)，平均（2.18±0.54）個(gè)，總數(shù)98個(gè)；皮損單發(fā)15例，多發(fā)16例。無(wú)復(fù)發(fā)組男18例，女19例；年齡21～53歲，平均年齡（36.74±4.86）歲；病程2～12月，平均（7.34±2.09）月；疣體直徑1～11 mm，平均直徑（5.23±1.21）mm；疣體數(shù)目1～5個(gè)，平均（2.23±0.55）個(gè)，總數(shù)103個(gè)；皮損單發(fā)17例，多發(fā)20例。對(duì)照組男18例，女17例；年齡22～50歲，平均年齡（34.76±3.52）歲。本研究獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《尖銳濕疣診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》[7]中關(guān)于尖銳濕疣診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡≥20周歲；（3）6月內(nèi)未接受免疫療法；（4）疣體部位均為會(huì)陰、肛周、包皮、冠狀溝、陰道內(nèi)及大小陰唇等常見部位。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）自身免疫性疾病者；（2）其他感染性疾病者；（3）嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病者；（4）妊娠期或哺乳期者；（5）合并惡性腫瘤者。

二、方法

（一）血清采集

于治療前及治療3月后選擇研究對(duì)象清晨空腹下抽取5mL外周靜脈血，于室溫（25℃）靜置2h，3500r/min離心10min，分離取得血清，置于-80℃環(huán)境中保存。

（二）血清白細(xì)胞介素因子測(cè)定

將治療前及治療3月后血清樣品取出，在25℃條件下復(fù)溶，存放于5℃環(huán)境中備用。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）雙抗體夾心法測(cè)定IL-12、IL-2、IL-4、IL-10水平，賽默飛世爾科技公司提供檢測(cè)試劑盒。

（三）復(fù)發(fā)判定標(biāo)準(zhǔn)

于治療3月后判斷患者復(fù)發(fā)情況[8]。復(fù)發(fā)：無(wú)再接觸史情況下，治療部位及周圍出現(xiàn)新的疣體；無(wú)復(fù)發(fā)（痊愈）：皮損完全消退，創(chuàng)面完全愈合，醋酸白試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件處理上述數(shù)據(jù)，以百分率（%）表示計(jì)數(shù)資料，組間行χ2檢驗(yàn)；以（x±s）表示計(jì)量資料，數(shù)據(jù)分析前進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，滿足正態(tài)且方差齊性，采用單因素方差分析，組間比較采用Studen-Newman-Keuls法；采用ROC曲線評(píng)價(jià)IL-12、IL-2、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值，并確定上述檢測(cè)指標(biāo)最佳截?cái)嘀?。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、三組IL-2、IL-12、IL-4、IL-10水平比較

復(fù)發(fā)組、無(wú)復(fù)發(fā)組IL-12、IL-2低于對(duì)照組（P＜0.05），IL-4、IL-10高于正常對(duì)照組（P＜0.05）；復(fù)發(fā)組IL-2、IL-12水平低于無(wú)復(fù)發(fā)組（P＜0.05），IL-4、IL-10水平高于無(wú)復(fù)發(fā)組（P＜0.05），見表1。

二、血清IL-12、IL-2、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值

經(jīng)ROC曲線處理，結(jié)果顯示血清IL-2、IL-12、IL-4、IL-10預(yù)測(cè)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的最佳截?cái)嘀捣謩e為3.16 pg/mL、3.13 pg/mL、3.73 pg/mL、6.03 pg/mL，AUC值分別為0.756、0.739、0.788、0.757。見表2及圖1。

表2 血清IL-12、IL-2、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值

討論

尖銳濕疣為常見的鱗狀上皮疣狀增生病變，有較高的傳染性，性傳播是主要傳播途徑，對(duì)患者身體健康及生活質(zhì)量均有不同程度的負(fù)面影響[9]。尖銳濕疣患者細(xì)胞免疫功能變化與疾病發(fā)生、轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，患者多表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞免疫異常，其中以自然殺傷細(xì)胞異常、T淋巴細(xì)胞亞群異常及細(xì)胞因子失衡所引起的細(xì)胞免疫反應(yīng)抑制效應(yīng)最為普遍[10-11]。部分尖銳濕疣患者經(jīng)過(guò)有效治療后依舊有復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，盡早發(fā)現(xiàn)并確診是改善患者預(yù)后的重要途徑[12]。尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者體內(nèi)Th1/Th2比值失衡是引起復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素，而IL-2、IL-12、IL-4、IL-10均為Th1型細(xì)胞亞群及Th2型細(xì)胞亞群常見因子，分別介導(dǎo)細(xì)胞因子與體液免疫，有著抗病毒及提高機(jī)體抵抗力作用，可阻滯HPV病毒增殖與轉(zhuǎn)移，對(duì)預(yù)測(cè)患者病情復(fù)發(fā)的效果顯著[13-14]。

本研究中，復(fù)發(fā)組、無(wú)復(fù)發(fā)組IL-12、IL-2水平低于對(duì)照組，IL-4、IL-10水平高于對(duì)照組，提示尖銳濕疣患者IL-12、IL-2及IL-4、IL-10較健康群體有明顯變化，尖銳濕疣患者全身性細(xì)胞免疫功能低于健康群體。有研究發(fā)現(xiàn)，尖銳濕疣疾病的發(fā)生與患者免疫功能密切相關(guān)[15]。當(dāng)人體免疫功能受影響，無(wú)法建立有效的免疫反應(yīng)時(shí)，可產(chǎn)生特異性局部抗HPV病毒的細(xì)胞免疫，誘發(fā)尖銳濕疣，并造成疾病持續(xù)發(fā)展。T淋巴細(xì)胞在人體HPV病毒清除過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，尖銳濕疣患者Th1型細(xì)胞因子水平顯著降低，Th2型細(xì)胞因子水平顯著增高，Th1與Th2型細(xì)胞因子存在交互作用失衡情況[16]。Th1型細(xì)胞亞群包括IL-12、IL-2細(xì)胞因子，存在介導(dǎo)細(xì)胞免疫作用；Th2型細(xì)胞亞群包括IL-4、IL-10細(xì)胞因子，有介導(dǎo)體液免疫作用。其中，IL-2細(xì)胞因子可激發(fā)人體Th細(xì)胞活性，有助于NK細(xì)胞增殖，抗病毒活性廣泛；當(dāng)NK細(xì)胞活性下降越明顯，尖銳濕疣損害越嚴(yán)重，且患者NK細(xì)胞活性降低，會(huì)進(jìn)而激發(fā)IL-2降低，減弱機(jī)體自分泌效應(yīng)，降低抗HPV病毒活性。在尖銳濕疣患者體內(nèi)，高水平IL-2細(xì)胞因子可降低HPV病毒增殖，對(duì)改善患者癥狀有顯著效果；IL-12細(xì)胞因子可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)向Th1型發(fā)展，刺激Th1細(xì)胞發(fā)育增殖，高濃度IL-12因子能提高尖銳濕疣患者Th1細(xì)胞亞群濃度，有助于調(diào)節(jié)Th1/Th2比值失衡，提高臨床療效[17]。IL-4、IL-10水平升高時(shí)可抑制IL-2合成，使IL-2所介導(dǎo)的一系列生物學(xué)效應(yīng)下降，削弱抗病毒能力，預(yù)示患者抗HPV病毒能力降低，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高。

本研究中，復(fù)發(fā)組IL-12、IL-2水平低于無(wú)復(fù)發(fā)組，IL-4、IL-10水平高于無(wú)復(fù)發(fā)組，提示IL-12、IL-2、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。尖銳濕疣的發(fā)生及發(fā)展、消退、復(fù)發(fā)、癌變等均與患者自身免疫應(yīng)答密切相關(guān)，而在抗病毒免疫中輔助性T細(xì)胞起到極為關(guān)鍵的作用，其中Th1型細(xì)胞參與細(xì)胞免疫，Th2型細(xì)胞參與體液免疫，分別介導(dǎo)、激發(fā)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)及Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。Th1/Th2比值平衡是維持人體正常免疫功能的重要因素，會(huì)誘導(dǎo)免疫耐受，具有清除病毒作用；而Th1/Th2比值失衡會(huì)降低或抑制患者淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞功能，使得靶細(xì)胞殺傷效應(yīng)降低，導(dǎo)致HPV病毒生長(zhǎng)繁殖，引起尖銳濕疣復(fù)發(fā)。尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者細(xì)胞免疫功能下降，其Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)減弱，而Th2型免疫反應(yīng)增強(qiáng)，說(shuō)明復(fù)發(fā)患者存在Th1與Th2型細(xì)胞因子失衡情況，會(huì)造成患者細(xì)胞免疫功能抑制，降低患者對(duì)HPV病毒的清除能力及抵抗能力[18]。另外，尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者IL-4、IL-10水平較高，說(shuō)明患者體內(nèi)Th2型細(xì)胞功能正處于亢進(jìn)狀態(tài)，進(jìn)一步證實(shí)患者體內(nèi)Th1/Th2比值處于失衡狀態(tài)，易引起復(fù)發(fā)。對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)患者來(lái)說(shuō)，細(xì)胞內(nèi)HPV病毒感染所引起的免疫反應(yīng)以Th1應(yīng)答為主，高水平Th1型細(xì)胞亞群可清除病毒，而低水平Th1型細(xì)胞亞群則會(huì)降低患者清除HPV病毒能力，故血清IL-2、IL-12水平較低的尖銳濕疣患者經(jīng)過(guò)系統(tǒng)治療后，依舊存在較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[19-20]。Th2型細(xì)胞亞群功能提高，會(huì)影響人體對(duì)病毒的耐受性，造成疾病遷延不愈，因此血清IL-4、IL-10水平較高的尖銳濕疣患者，易在治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況，經(jīng)久不愈。有研究表明，尖銳濕疣患者普遍存在Th2型細(xì)胞亞群增高及Th1型細(xì)胞亞群降低情況，同時(shí)伴Th1/Th2比值失衡現(xiàn)象[21]。筆者認(rèn)為，尖銳濕疣患者在經(jīng)HPV病毒所激發(fā)的細(xì)胞免疫應(yīng)答中，Th1型細(xì)胞亞群功能減弱，Th2型細(xì)胞亞群功能顯著增強(qiáng)，患者細(xì)胞活動(dòng)處于強(qiáng)勢(shì)狀態(tài)，無(wú)法清除病毒，造成尖銳濕疣的遷延與復(fù)發(fā)。

本研究中，采用ROC曲線評(píng)價(jià)血清白細(xì)胞介素因子IL-2、IL-12、IL-4、IL-10對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值，發(fā)現(xiàn)上述受檢指標(biāo)AUC值范圍為0.5～1.0；當(dāng)上述受檢指標(biāo)AUC值范圍≥0.9時(shí)，提示該指標(biāo)對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)有著較高的預(yù)測(cè)價(jià)值，當(dāng)AUC值范圍為0.8～0.7時(shí)，提示該指標(biāo)對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)有一定預(yù)測(cè)價(jià)值；若AUC值范圍≤0.6時(shí)，則提示該指標(biāo)對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值較低。本研究經(jīng)ROC曲線分析，發(fā)現(xiàn)血清IL-2、IL-12、IL-4、IL-10的AUC值 分 別 為0.756、0.739、0.788、0.757，提示IL-2、IL-12、IL-4、IL-10均對(duì)尖銳濕疣復(fù)發(fā)有一定預(yù)測(cè)價(jià)值；而尖銳濕疣患者IL-2、IL-12、IL-4、IL-10最佳截?cái)嘀捣謩e為3.16 pg/mL、3.13 pg/mL、3.73 pg/mL、6.03 pg/mL，提示尖銳濕疣患者IL-2、IL-12、IL-4、IL-10水平分別在此范圍時(shí)有復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，臨床需盡早做好相應(yīng)的干預(yù)準(zhǔn)備。

綜上所述，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清IL-2、IL-12、IL-4、IL-10水平可作為尖銳濕疣復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)的參考指標(biāo)之一，為臨床診療提供了一定參考，但本研究所選樣本量過(guò)低，且未針對(duì)不同病程、疾病嚴(yán)重程度等患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)展開深入研究，故存在局限性，在今后可針對(duì)此方向并適當(dāng)擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步分析，為此領(lǐng)域提供一定參考。