薛長(zhǎng)暉，袁少明

1. 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院（青島 266109）；2. 青島昊鑫新能源科技有限公司（青島 266732）

蒲公英[1]屬于菊科草本植物，葉子主要是披針形，長(zhǎng)度5～21 cm不等，寬度1～5 cm不等，據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》記載，蒲公英可用于醫(yī)治多種炎癥，有助于治療感冒引起的發(fā)熱，還有一些感染和腫痛的療用，如尿路感染、療毒瘡腫等；中草藥手冊(cè)記載，蒲公英對(duì)清熱、解讀、催生乳汁有好的作用，可醫(yī)治疔瘡，利尿，緩瀉?！侗静菥V目拾遺》中補(bǔ)充了蒲公英的一些藥理作用，如抗腫瘤作用、通乳、抗菌作用、利膽作用等?！侗静菥V目》記載，蒲公英含多種多類(lèi)化學(xué)成分，如蒲公英賽醇、豆甾醇、金菊賽醇，葡萄糖甙，葡萄糖等，還有樹(shù)脂、橡膠等，蒲公英還含有黃酮類(lèi)物質(zhì)[2,4]，對(duì)蒲公英黃酮的研究較少，亞硝酸鹽廣泛存在于食物中，很容易變成致癌物亞硝胺，清除亞硝酸鹽可以起到防癌作用[5]，通過(guò)比較黃酮和黃酮Cu絡(luò)合物對(duì)亞硝酸鹽的清除作用，找到更好的應(yīng)用于亞硝酸鹽清除的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

蒲公英（市售，干燥后磨粉過(guò)篩儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?；蘆?。▏?guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；亞硝酸鈉（AR，南京奧多福尼生物科技有限公司）；檸檬酸、磷酸氫二鈉（泰州恒利化工）；氫氧化鈉（AR，中國(guó)上海化學(xué)試劑有限公司）；鹽酸萘乙二胺（AR）；對(duì)氨基苯磺酸（天津市博迪化工有限公司）；鹽酸萘乙二胺（天津市巴斯夫化工有限公司）；硫酸銅、鹽酸、硝酸鋁（天津市巴斯夫化工有限公司）；95%乙醇（AR，萊陽(yáng)化學(xué)試劑廠(chǎng)）；蒸餾水。

紫外分光光度計(jì)（島津儀器（蘇州）有限公司）；集熱式磁力攪拌器（銀壇市康威威實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)）；恒溫加熱的磁力攪拌器；V-5000分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；電子分析天平（奧豪斯國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 含量測(cè)定方法

采用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法[6-8]測(cè)定黃酮含量，將得到的黃酮提取溶液與提前配制好的、質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液混合，稀釋成1 mg/mL的樣品備用。使用紫外分光光度法，掃標(biāo)本樣品。確定該樣品中黃酮含量。

1.2.2 抗亞硝化反應(yīng)測(cè)定

通過(guò)確定最大吸收波長(zhǎng)，選擇顯色反應(yīng)，用分光光度法進(jìn)行測(cè)定[9-10]，在最大吸收波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)清除率公式計(jì)算出清除率。清除率按式（1）計(jì)算。

1.2.3 蒲公英黃酮Cu絡(luò)合物的制備[11-12]

取2 mL已知濃度的蒲公英黃酮提取液于25 mL容量瓶，按照1∶1比例加入硫酸銅溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

由圖1可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為A=11.576C+0.0093，相關(guān)系數(shù)R2=0.9966。用上述方法測(cè)得蒲公英提取液的吸光度為0.386，竹葉黃酮質(zhì)量濃度為1.000 mg/mL，黃酮類(lèi)活性物質(zhì)質(zhì)量濃度為0.814 mg/mL。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.2 反應(yīng)條件對(duì)蒲公英黃酮類(lèi)物質(zhì)及其Cu絡(luò)合物抗亞硝化反應(yīng)效果的影響[13-15]

2.2.1 反應(yīng)濃度的影響

從圖2可知，質(zhì)量濃度為0.814 mg/mL時(shí)，清除率達(dá)到最大值，此時(shí)的清除效果最好。

圖2 反應(yīng)濃度對(duì)清除率的影響

2.2.2 反應(yīng)pH的影響

從圖3可知，pH 3時(shí)清除率達(dá)到最大值；人體的體液和血液的pH 7左右，pH 7時(shí)蒲公英黃酮提取液及其金屬絡(luò)合物對(duì)亞硝酸鹽也有一定清除作用，綜上所知，最佳反應(yīng)pH為3，蒲公英黃酮提取液的清除作用對(duì)人體內(nèi)的亞硝酸鹽的清除有積極作用，可以清除致癌物前體。

圖3 反應(yīng)pH對(duì)清除率的影響

2.2.3 反應(yīng)溫度的影響

從圖4可知，50 ℃時(shí)清除率達(dá)到最大，聯(lián)系實(shí)際，人體的正常溫度在37 ℃左右[21]，此時(shí)蒲公英中黃酮清除率可達(dá)48%，對(duì)正常人體內(nèi)清除亞硝酸鹽具有實(shí)際意義。

圖4 反應(yīng)溫度對(duì)清除率的影響

2.2.4 反應(yīng)時(shí)間的影響

從圖5可知，無(wú)論是蒲公英黃酮銅絡(luò)合物還是蒲公英黃酮，反應(yīng)時(shí)間30 min時(shí)，清除率最大。

圖5 反應(yīng)時(shí)間對(duì)清除率的影響

3 討論

3.1 蒲公英黃酮提取液對(duì)亞硝酸根的清除作用

試驗(yàn)證明，蒲公英黃酮提取液確實(shí)對(duì)亞硝酸根具有良好清除作用。結(jié)果表明，最佳清除條件為黃酮提取液質(zhì)量濃度0.814 mg/mL、pH 3、反應(yīng)溫度50 ℃、反應(yīng)時(shí)間30 min。

通過(guò)反應(yīng)pH的影響和反應(yīng)溫度的影響，可知在pH 3、溫度37 ℃、黃酮提取液質(zhì)量濃度0.81 mg/mL條件下，反應(yīng)30 min，清除率可達(dá)62%左右，對(duì)人體內(nèi)亞硝酸根的清除作用具有實(shí)際意義，對(duì)人類(lèi)生活具有實(shí)際意義。

3.2 蒲公英黃酮提取液的金屬絡(luò)合物對(duì)亞硝酸根的清除作用

試驗(yàn)證明，蒲公英黃酮提取液的金屬絡(luò)合物對(duì)亞硝酸根具有良好清除作用。結(jié)果表明，黃酮提取液的金屬絡(luò)合物，最佳清除條件為：質(zhì)量濃度0.814 mg/mL，調(diào)節(jié)至pH 3，反應(yīng)溫度50 ℃，反應(yīng)時(shí)間30 min時(shí)具有最好的清除效果。整體變化的趨勢(shì)和蒲公英黃酮提取液基本上一致。

3.3 蒲公英黃酮類(lèi)物質(zhì)及其金屬絡(luò)合物的清除作用的比較

蒲公英黃酮提取液本身對(duì)亞硝酸根有良好的清除效果。同時(shí)，蒲公英黃酮提取液的金屬絡(luò)合物，對(duì)亞硝酸根的清除也具有良好效果。但是，蒲公英黃酮提取液的金屬絡(luò)合物對(duì)亞硝酸鹽清除效果要優(yōu)于單純的含有蒲公英黃酮提取液。因此，蒲公英黃酮在人體內(nèi)結(jié)合Cu離子后，抗癌效果更加理想。

4 結(jié)論

由以上試驗(yàn)可知，蒲公英黃酮提取液和蒲公英黃酮提取液的金屬絡(luò)合物對(duì)亞硝酸根都具有良好的清除作用，最佳的清除條件為質(zhì)量濃度0.814 mg/mL、pH 3、反應(yīng)溫度50 ℃、反應(yīng)時(shí)間30 min。在此條件下，清除率可以達(dá)到62%左右，這對(duì)人體內(nèi)亞硝酸根的清除作用具有實(shí)際的意義，此外，研究發(fā)現(xiàn)蒲公英黃酮Cu絡(luò)合物對(duì)亞硝酸根清除效果優(yōu)于蒲公英黃酮，說(shuō)明蒲公英黃酮若在體內(nèi)結(jié)合Cu離子后，抗癌效果會(huì)更加理想。