茆春陽，杜燕，周波，牛陽，王榮，李亞榮，馬飛云

1 寧夏醫(yī)科大學(xué) 寧夏銀川 750004

2 濟寧醫(yī)學(xué)院 山東濟寧 272000

輕度 認(rèn) 知 障 礙（Mild Cognitive Impairment MCI）[1]是指記憶力或其他認(rèn)知功能進行性減退，但不影響日常生活能力，且未達到癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)。每年約有10%～30%患者發(fā)展為MCI[2]，約20%～66%MCI患者在2～4年內(nèi)進展為癡呆[3]。隨著人口老齡化速度的加快，和該病病程長、病理改變不可逆轉(zhuǎn)以及缺乏有效的治療手段等問題，已經(jīng)成為影響人們生活質(zhì)量的重要因素。八珍益智方來源于《成方便讀》，具有增強智力、延緩衰老的功效[4]。該疾病在西醫(yī)治療方面方法較單一、療效不顯著，而中醫(yī)藥在延緩衰老、增強記憶力等方面有西藥不可替代的優(yōu)勢。本研究發(fā)揮中醫(yī)藥多途徑、多靶點的整體治療優(yōu)勢，通過觀察老年小鼠輕度認(rèn)知功能障礙改善情況，探討八珍益智方的功效。從而在該疾病治療方面走出一條新路，體現(xiàn)中醫(yī)“未病先防，既病防變”的思想。

材料與方法

1 動物

昆明種小鼠（2月齡）20只，體重（22g±2）g，雌雄各半，昆明種小鼠（16月齡）100只，體重（36g±5）g，雌雄各半，由寧夏醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。

2 藥物與試劑

八珍益智方，組成為龍眼肉30g、蓮子肉15g，茯苓 30g，山藥 30g，白術(shù) 15g，芡實 15g，陳皮 15g，炙甘草15g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院提供，方中所用藥材去除雜質(zhì)，按方劑組方量配比，煎煮，濾取煎液后濃縮至藥液含生藥 12.5ml/kg、25ml/kg、50ml/kg；腦復(fù)康片（吡拉西坦片）（東北制藥總廠，0.4g/片，批號：國藥準(zhǔn)字H21021775）。

3 儀器

避暗箱、跳臺儀，淮北正華設(shè)備有限公司。

4 造模方法

參考周曉密[5]輕度認(rèn)知功能障礙小鼠模型的制備，將16月齡小鼠于術(shù)前8～12h禁食，期間可自由飲水，用10%水合氯醛（3mL/kg，腹腔注射）將其麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺上，隨后將頸部皮膚剪毛備皮并用活力碘消毒，行頸側(cè)向切口，仔細(xì)分離皮膚和肌肉，顯露并游離雙側(cè)頸總動脈，在頸總動脈近心側(cè)距頸內(nèi)動脈（ICA）和頸外動脈（ECA）分叉處約1.5cm處用0號手術(shù)縫合線將頸總動脈和直徑0.45mm的注射器針頭一并仔細(xì)扎緊絲線打成活結(jié)，然后小心拔出針頭，縫合傷口，造成腦持續(xù)性低灌注。術(shù)后每日肌注青霉素1.6萬U，連續(xù)3d，抗感染。

5 分組與處理

5.1 避暗試驗 取16月齡老年模型小鼠50只，隨機分為5組，即老年對照組、腦復(fù)康陽性對照組（0.6 g/kg）、八珍益智方劑低劑量組（12.5 ml/kg）、中劑量組（25 ml/kg）和高劑量組（50 ml/kg），每組 10 只。另取10只青年小鼠作青年對照組。青年對照組和老年對照組均灌服等容積生理鹽水。各組每日灌胃1次，連續(xù)給藥21d，于末次給藥后1h用避暗法進行測試，將小鼠尾對暗室放入，小鼠鉆洞進入暗室遭電擊因而獲得記憶，24h后測試記憶功能，以鉆洞潛伏期（即小鼠自放入明室至鉆入暗室遭電擊的時間，記作潛伏期）和5 min內(nèi)鉆洞次數(shù)（即錯誤數(shù)）作指標(biāo)。

5.2 跳臺試驗 取16月齡老年模型小鼠50只，隨機分為5組，即老年對照組、腦復(fù)康陽性對照組（0.6g/kg）、八珍益智方低劑量組（12.5 ml/kg）、中劑量組（25 ml/kg）和高劑量組（50ml/kg），每組10只。另取10只青年小鼠作青年對照組。青年對照組和老年對照組均灌服等容積生理鹽水。各組每日灌胃1次，連續(xù)給藥21d，于末次給藥后1h用跳臺法進行測試，用跳臺法訓(xùn)練小鼠，訓(xùn)練前10min除對照組外，訓(xùn)練5 min，24 h后復(fù)測，記錄小鼠自放入跳臺至第1次跳下時間（即觸電潛伏期）和5 min內(nèi)觸電次數(shù)（錯誤數(shù)）作指標(biāo)。

6 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件分析處理，所有計量資料均以（±s）表示，各組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗，等級資料采用秩和檢驗。P<0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 八珍益智方對老年小鼠認(rèn)知功能的影響（避暗試驗）

與青年對照組相比，老年對照組小鼠認(rèn)知功能明顯減退，差異極其顯著（P<0.01）；八珍益智方和腦復(fù)康4組均能改善老年小鼠的認(rèn)知功能，與老年對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），且八珍益智方劑中、高劑量組優(yōu)于腦復(fù)康組。見表1。

表1 八珍益智方對老年小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（避暗法，±s）

表1 八珍益智方對老年小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（避暗法，±s）

注：與老年對照組比較：**P<0.05，***P<0.001；與腦復(fù)康組比較：△P<0.05

組別 只數(shù) 劑量/ml·kg-1 潛伏期/s 5 min內(nèi)錯誤數(shù)/次青年對照組 10 NS（等容積） 236±121*** 0.6±0.5***老年對照組 10 NS（等容積） 48.4±21.6 2.5±0.7腦復(fù)康組 10 0.6 142±113** 0.9±0.6**八珍組（低） 10 12.5 164±106** 0.7±0.5**八珍組（中） 10 25 234±135*** 0.5±0.5***△八珍組（高） 10 50 241±142***△ 0.4±0.5***△

2 八珍益智方劑對老年小鼠認(rèn)知功能的影響（跳臺試驗）

與青年對照組相比，老年對照組小鼠認(rèn)知功能明顯減退，差異極其顯著（P<0.01）；而八珍益智方和腦復(fù)康兩組均能改善老年小鼠的認(rèn)知功能，與老年對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），且八珍益智方劑中、高劑量組優(yōu)于腦復(fù)康組。見表2。

表2 八珍益智方對老年小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（跳臺法，±s）

表2 八珍益智方對老年小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（跳臺法，±s）

注：與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；與腦復(fù)康組比較：△P<0.05。

組別 只數(shù) 劑量/ml·kg-1 潛伏期/s 5 min內(nèi)錯誤數(shù)/次青年對照組 10 NS（等容積） 215±35.2** 0.8±0.5**老年對照組 10 NS（等容積） 64.1±40.3 2.2±0.4腦復(fù)康組 10 0.6 14.8±51.4* 1.0±0.6**八珍組（低） 10 12.5 10.6±57.5** 0.9±0.6**八珍組（中） 10 25 218±42.4**△ 0.6±0.7***△八珍組（高） 10 50 226±62.1**△ 0.6±0.5***△

討 論

輕度認(rèn)知功能障礙（MCI）是介于正常老化和老年癡呆之間的狀態(tài)，主要表現(xiàn)為認(rèn)知功能下降，記憶力減退，視空間技能損害等，且呈進行性加重的過程。結(jié)合MCI臨床表現(xiàn)，祖國醫(yī)學(xué)將其歸屬為“癡呆、健忘、呆病、神病”等范疇[6-7]，歷代大多醫(yī)家認(rèn)為輕度認(rèn)知功能障礙當(dāng)從虛、實兩方面論治，虛者多為髓海不足和脾腎兩虛；實者多為痰濁蒙竅和瘀血內(nèi)阻。腎為先天之本，主藏精，生髓，髓屬營養(yǎng)之物，至清至純，上通于腦?！秲?nèi)經(jīng)》云“人始生，先成精，精成而腦髓生。”腦為髓之海，腦髓有賴于腎精的不斷生化。腎精充足，髓海得養(yǎng)，腦發(fā)育健全，則可見思維敏捷，精力充沛；反之，腎精不足，髓?？仗?，腦失所養(yǎng)，可出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)耳鳴，痙痠眩冒，懈怠安臥?！夺t(yī)方集解》曰：“人之精與志，皆藏于腎，腎精不足則腎氣衰，不能上通于心，故迷惑善忘也。”《三因極一病證方論》云：“脾主意與思，意者記所往事，思則兼心之所為。”周永紅[8]認(rèn)為，腦髓的充足與否決定腦的功能，腦萎髓空、神機失用是MCI的基本病機。關(guān)徐濤等[9]“五臟致呆”理論中提出若脾失運化，清陽之氣無力上升，則可出現(xiàn)健忘之癥；腎虛髓空，腦失充養(yǎng)，則出現(xiàn)靈機記性減退?！鹅`樞·經(jīng)脈》曰：“水足髓充，則元神清湛而強記不忘矣?！痹谥嗅t(yī)學(xué)中，腎為先天之本，脾為后天之本，可以對人的神志起到關(guān)鍵作用，因此，在治療上當(dāng)以填精補髓，補腎健脾為主。臨床中關(guān)于中醫(yī)藥治療MCI研究較多，且療效顯著。何迎春[10]研究發(fā)現(xiàn)，運用健脾填精法治療MCI，其臨床有效率達到86.7%，并能降低MCI向癡呆的轉(zhuǎn)化率，且無不良反應(yīng)，為MCI防治提供了新思路。夏明磊等[11]建立血管性癡呆大鼠模型，通過觀察增智方組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，發(fā)現(xiàn)增智方能明顯提高血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，并能降低降低血漿 ET含量和升高NO含量。有相關(guān)證據(jù)提示[12]，遺忘型輕度認(rèn)知障礙患者中存在外周炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α等升高。謝淑玲等[13]認(rèn)為遺忘型輕度認(rèn)知障礙以腎虛痰瘀為主要病機，同時發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周免疫系統(tǒng)之間有可能存在一定的聯(lián)系，經(jīng)過長期臨床總結(jié)的益智安神方在治療aMCI腎虛痰瘀證中，能夠降低aMCI向AD的轉(zhuǎn)化率，降低IL-1β、IL-6炎性水平，從而達到改善患者整體認(rèn)知功能水平。侯燕等[14]在臨床中運用益智散穴位貼敷聯(lián)合補元聰腦方治療MCI，觀察其療效發(fā)現(xiàn)此方法可以預(yù)防MCI，并能降低患者血清Aβ1－42及P－tau水平。黃舒文、張彪[15]記載的醫(yī)案中運用補腎益智方加減治療脾腎兩虛證老年輕度認(rèn)知功能障礙，可以改善患者認(rèn)知功能，提高臨床療效。

八珍益智方處方源于《成方便讀》，也是課題組在長期臨床中總結(jié)提出的經(jīng)驗方，由龍眼肉、茯苓、蓮子肉、山藥、白術(shù)、芡實、陳皮、炙甘草8味藥組成，具有增強智力、延緩衰老的功效。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心主神志，脾藏意主思，又為后天之本，腎主藏精，為先天之本，故健忘、神志不安等癥與心、脾、腎的關(guān)系最為密切。本方重用龍眼肉為君藥，其性平味甘，有“開胃健脾，補虛益智”等功效，《神農(nóng)本草經(jīng)》稱其：“主安志，厭食，久服強魂魄，聰明”；有關(guān)龍眼肉藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，龍眼肉具有抗衰老和增強免疫力作用[16]。駱萍等[17]研究顯示，龍眼肉水提取物的抗氧化活性可以顯著改善東莨菪堿所致大鼠學(xué)習(xí)記憶獲得性障礙。臣藥以茯苓健脾安神，能利竅去濕，利竅則開心益智，導(dǎo)濁生津，《本草正》稱“茯苓，能利竅去濕，利竅則開心益智，導(dǎo)濁生津 ”易延逵等[18]研究證明，龍眼肉、茯苓等復(fù)合物能改善大大鼠的記憶。蓮子肉甘澀而平，既能補脾養(yǎng)心，又可益腎固精，均為臣藥，《本草經(jīng)集注》[19]記載：“主補中、養(yǎng)神、益氣力，久服輕身，耐老，不饑，延年?！弊粢陨剿幖妊a脾氣，又益脾陰，且能補腎填精，《日華子本草》稱其“主泄精，健忘”，可增強龍眼肉補益心脾之力；王邈等[20]通過對山藥的藥理作用分析發(fā)現(xiàn)，山藥具有抗衰老和調(diào)節(jié)免疫功能作用。芡實性味甘平而澀，能補脾益腎而固精氣；李云等[21]研究證明，山藥、芡實藥對可以通過改善免疫功能使其達到健脾益氣功效，并且最佳配比2﹕1，為臨床中30g﹕15g。佐以白術(shù)健脾益氣，其藥理作用具有抗衰老作用[22]；陳皮理氣調(diào)中，以助君藥補脾之功。炙甘草為佐使之用，既能助龍眼肉、茯苓、白術(shù)以補脾氣，又可調(diào)和諸藥。

八珍益智方方中大多數(shù)藥物藥性多平，《神農(nóng)本草經(jīng)》中延年益壽藥物多以性平，是略偏盛的陰陽氣血逐漸趨于平衡，以達到“陰平陽秘”狀態(tài)，發(fā)揮延年益壽作用[23]。本研究結(jié)果顯示，八珍益智方中諸藥相伍，共奏填精補腎、健脾益智之效，能夠有效改善老年小鼠輕度認(rèn)知功能障礙，達到增強智力、延緩衰老的功效，同時也為進一步更系統(tǒng)的實驗驗證以及后期臨床試驗提供了理論依據(jù)。下一步我們將進行八珍益智方臨床試驗，對預(yù)防輕度認(rèn)知功能障礙發(fā)展為老年癡呆具有重大意義，從而發(fā)揮中醫(yī)藥“治未病”思想。