王靜怡 郭 昕 馮 春 楊 利 何耀瑩 段紅吉 武正才

云南植物藥業(yè)有限公司，云南 昆明 650109

燈盞細辛為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.) Hard.-Mazz]的干燥全草，主要分布于我國云南、貴州、四川等地，從采集樣品的最低海拔695 m，到最高海拔4041.6 m均有生長，是一種民間常用中藥。燈盞細辛具有散寒解表、祛風除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)等功效。臨床主要用于治療缺血性腦血管疾病、冠心病、心絞痛等癥，其療效較好，毒副作用小，運用范圍廣。燈盞細辛主要有效成分為黃酮類化合物燈盞花乙素。由于不同海拔的燈盞細辛藥材中主成分燈盞花乙素含量差異較大，為了采收到質(zhì)量較好的藥材，對藥材產(chǎn)地的選擇十分重要。通過對不同海拔的藥材進行研究比較，找到收購的最佳產(chǎn)地及較適合于種植燈盞細辛的地理位置。

1 儀器和試藥

Agilent-1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，BUCHI Rotavapor R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪)，BP221D電子分析天平(德國塞多利斯)， HS6150D 超聲波清洗器 (天津恒實)， 0.5～5.0、6.4～8.0精密pH試紙(上海三愛思試劑有限公司)；燈盞花乙素對照品(中國食品藥品檢驗研究院，批號110842-201508)，乙醇(色譜純)，其它試劑均為分析純。9批不同產(chǎn)地不同海拔燈盞細辛藥材樣品(詳見燈盞細辛藥材樣品來源表1)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法工藝流程 燈盞細辛粉→乙醇回流→減壓濃縮→堿溶除膠→濾過→酸沉→濾過→沉淀醇溶→干燥→粗品→精制→成品。

2.2 提取操作方法 取燈盞細辛粉200 g，用70%的乙醇回流提取3次(溶劑倍量5 N、5 N、4 N，回流時間2 h、2 h、1 h)，減壓濃縮至(浸膏∶生藥=1∶1)，用飲用水稀釋至浸膏2倍量，用10%NaOH溶液調(diào)pH7.0～7.2，靜置過夜，膠質(zhì)用120目篩網(wǎng)濾除，濾液用10%H2SO4調(diào)pH2.0～2.5，靜置過夜，濾過，沉淀用乙醇洗滌，干燥即得燈盞花素粗品。粗品用20倍純化水溶解，用10%NaOH溶液調(diào)pH 7.0～7.2，濾過，濾液用10%H2SO4調(diào)pH 2.0～2.5，靜置過夜，濾過，沉淀用少量乙醇洗滌，干燥即得燈盞細辛提取物。

表1 燈盞細辛藥材樣品來源

2.3 含量方法學考察與結(jié)果

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，250 mm×4.6 mm,5 μm十八烷基鍵合硅膠色譜柱。流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60)，流速為每分鐘1.0 mL；柱溫40 ℃；檢測波長335 nm。理論塔板數(shù)按燈盞花乙素峰計算不得低于5000。

2.3.2 對照品溶液的制備 取燈盞花乙素對照品10 mg,精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 KHz)45 min，取出，放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品10 mg,精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超聲處理(功率300 W，頻率50 KHz)45 min，取出，放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 標準曲線的繪制 精密稱取燈盞花乙素對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理，以甲醇定容，取1、5、10、15、20 mL分別置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，精密吸取5 μL，按色譜條件依次進樣，記錄峰面積，以濃度(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，燈盞花乙素的回歸方程為Y=490816X+7770.9(r=0.9991),說明燈盞花乙素在0.2～4.0 μg線性良好。

2.3.5 精密度考察 取燈盞花乙素對照品溶液，連續(xù)進樣6次，測得峰面積，其RSD為0.69%，方法精密度良好。

2.3.6 重復性考察 取同一供試樣品6份，精密稱定，按樣品測定項下的方法進行含量測定。測得供試品RSD為1.79%，表明供試品的重現(xiàn)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性考察 取同一燈盞細辛樣品溶液，分別在0、1、2、4、6、8 h依次注入高效液相色譜儀進行分析，結(jié)果RSD為1.97%，表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率考察 精密稱取已知含量的燈盞細辛提取物樣品(3#號樣品)6份，分別精密加入一定量的燈盞花乙素對照品，按2.3.3制備供試品溶液，根據(jù)色譜條件進樣，平均回收率為98.73%，RSD為1.08%，表明該方法回收率較好，方法可行。

表2 加樣回收率

2.3.9 樣品含量測定 取不同海拔的燈盞細辛提取物樣品，按照含量測定 “2.3.3”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

3 結(jié)果

3.1 不同海拔的燈盞細辛藥材中提取燈盞花乙素的收率及含量 相關(guān)數(shù)據(jù)詳見表3。

表3 樣品結(jié)果

3.2 不同海拔燈盞細辛藥材中提取的燈盞花乙素收率折線圖 如圖1所示。

3.3 不同海拔燈盞細辛藥材中燈盞花乙素含量圖 如圖2所示。

4 討論

從圖1可以看出，海拔在1100～2126 m之間生長的4個燈盞細辛樣品中燈盞細辛提取物的提取收率為8‰～12‰，收率較高。海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細辛樣品中燈盞細辛提取物的提取收率為5‰～8‰，收率較低。從圖2可以看出海拔在1100～2126 m之間生長的四個燈盞細辛藥材中盞花乙素的含量為3.4%～5.3%，海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細辛藥材中燈盞花乙素的的含量為1.8%～3.3%。

本研究證明，不同海拔生長的燈盞細辛中燈盞花乙素的提取收率及含量有差異，且摸索出海拔較低或者海拔較高的地方生長的燈盞細辛中燈盞花乙素的提取收率和含量都不高，海拔在1000～2000 m左右生長的燈盞細辛藥材中燈盞花乙素含量較高。適合種植燈盞細辛的最佳地理位置為海拔在1000～2000 m左右的地方。

各地收購的季節(jié)與當?shù)氐牡乩砦恢糜嘘P(guān)，溫差、陽光照射時間都會影響燈盞細辛的采收時間。為了研究不同海拔生長的燈盞細辛中對燈盞花乙素的含量，在采收時期和采收地點應(yīng)盡可能統(tǒng)一，采收時期都選擇盛花期，采收的地點都選擇向陽坡地。