廖榮譽(yù) 林永恩 吳有春 黃建秀

1.廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西賀州 542800；2.廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院病理科，廣西賀州 542800；3.桂東衛(wèi)校附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西賀州 542800

隨著人們生活方式以及性觀念的轉(zhuǎn)變，婦科許多疾病的發(fā)生幾率都呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，而宮頸癌作為婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病之一，也尚且如此。根據(jù)臨床的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[1]，人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是導(dǎo)致HPV感染以及宮頸癌出現(xiàn)的重要因素之一。目前，在臨床上多采用液基薄層細(xì)胞學(xué)來(lái)進(jìn)行檢查，從而判斷受檢者的宮頸處是否存在病變組織，達(dá)到早期發(fā)現(xiàn)、早期預(yù)防的目的。隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，HPV基因分型檢測(cè)也逐漸被應(yīng)用于宮頸病變組織的篩查中，有學(xué)者[2]在此基礎(chǔ)上提出，采用TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)能夠提高檢測(cè)效率，在預(yù)防宮頸癌或者予以早期診治中，能夠起到重要作用。本研究選取參與我院婦科門(mén)診宮頸癌防治篩查的女性作為研究對(duì)象，并對(duì)其HPV基因分型監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年12月參與我院婦科門(mén)診宮頸癌防治篩查的420例女性作為研究對(duì)象，年齡18～75歲，平均（43.1±5.6）歲。防癌篩查包括液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）和HPV基因分型檢測(cè)，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：有正常的性生活；近1個(gè)月內(nèi)無(wú)陰道用藥、沖洗等；未進(jìn)行過(guò)子宮切除手術(shù)；所選研究對(duì)象均簽署了知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)性生活史者、急性生殖道炎癥者、半年內(nèi)未進(jìn)行宮頸病變?cè)\治處理者。

1.2 方法

1.2.1 液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT） 受檢者入院后，工作人員應(yīng)準(zhǔn)備好檢查中需要使用到的儀器。應(yīng)采用專用的刷子來(lái)收集受檢者宮頸口周?chē)拿撀浼?xì)胞組織，同時(shí)將脫落的細(xì)胞組織放入液小瓶中保存，而保存液的標(biāo)本需要予以臨床系統(tǒng)程序化處理，具體做法如下：首先應(yīng)將標(biāo)本中的上皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞分別與血液和黏液進(jìn)行分離處理，繼而在完成高精密度濾器過(guò)濾后，需要將其轉(zhuǎn)移到已經(jīng)進(jìn)行過(guò)靜電處理的玻片上；所收集的標(biāo)本應(yīng)制作成薄層細(xì)胞涂片，同時(shí)采用濃度為95%的乙醇進(jìn)行固定，固定后立即進(jìn)行巴氏染色，待染色完畢后采用中性樹(shù)膠封片。其中，在液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查中，需要使用的制片儀器和檢測(cè)技術(shù)均來(lái)自美國(guó)新柏氏公司，電子陰道鏡型號(hào)為SCK-2008B型；在細(xì)胞學(xué)中采用TBS分級(jí)系統(tǒng)進(jìn)行診斷。

1.2.2 HPV基因分型檢測(cè) 首先，應(yīng)采用HPV核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)完成受檢者機(jī)體HPV亞型基因的檢測(cè)，檢測(cè)類(lèi)型共有21種，包括高危型亞型和低危型亞型這兩類(lèi)。同樣，在HPV基因分型檢測(cè)中，需要將受檢者的標(biāo)本組織從液小瓶中轉(zhuǎn)入微量離心管內(nèi)，13000 r/min，離心5 min，在分離后去除上清液，及時(shí)保存離心管底中的細(xì)胞塊。而后，在離心管底部的細(xì)胞塊中加入裂解液完成懸浮沉淀，同時(shí)放置在90℃的水浴環(huán)境中進(jìn)行加熱，繼續(xù)予以13000 r/min，離心5 min；最后，分離并取出上清液后，繼續(xù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增、雜交及顯色處理。其中，在HPV基因分型檢測(cè)所使用到的基因芯片試劑盒，來(lái)自深圳亞能生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)定方法

1.3.1 病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn) 從病理組織學(xué)的診斷劃分來(lái)看，根據(jù)受檢者宮頸的組織病變程度，將其劃分5種分型，具體包括：慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級(jí)、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)、宮頸癌。統(tǒng)計(jì)并記錄各級(jí)病變例數(shù)。

1.3.2 HPV-DNA擴(kuò)增結(jié)果判定 將顯色液倒去后，采用清水沖洗膜條，通過(guò)對(duì)膜條的肉眼觀察來(lái)判斷其變化和檢測(cè)結(jié)果：若是膜芯片中的HPV亞型探針位點(diǎn)處能夠發(fā)現(xiàn)1個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)，則提示受檢者發(fā)生HPV單一感染；若是膜芯片中的HPV亞型探針位點(diǎn)處能夠發(fā)現(xiàn)2個(gè)及2個(gè)以上藍(lán)色斑點(diǎn)，則提示受檢者出現(xiàn)雙重或者多重HPV感染。統(tǒng)計(jì)并記錄各級(jí)感染的例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TCT檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)后，TCT陽(yáng)性合并HPV感染者共202例，不同分型的陽(yáng)性情況見(jiàn)表1。

表1 TCT檢測(cè)結(jié)果

2.2 TCT陽(yáng)性時(shí)HPV高危型感染情況

在202例TCT陽(yáng)性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，陽(yáng)性率為32.67%。不同類(lèi)型標(biāo)本中，HPV高危感染率逐級(jí)升高，見(jiàn)表2。

表2 TCT陽(yáng)性時(shí)HPV高危型感染情況

2.3 TCT陽(yáng)性時(shí)HPV低危型和高危型發(fā)病年齡比較

HPV低危型患者年齡多位于30歲以下，占比為57.35%；HPV高危型患者年齡多位于30歲以上，占比為86.36%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 TCT陽(yáng)性時(shí)HPV低危型和高危型發(fā)病年齡比較[n（%）]

3 討論

3.1 宮頸癌早期診斷的意義

宮頸癌主要是由HPV感染而引起的一種婦科惡性腫瘤。根據(jù)流行病學(xué)的調(diào)查原理顯示[3]，宮頸癌在近年來(lái)呈現(xiàn)出了發(fā)病年輕化的趨勢(shì)。對(duì)于女性來(lái)說(shuō)，宮頸癌的出現(xiàn)不僅會(huì)導(dǎo)致其生活質(zhì)量明顯下降，身體健康受到影響，還會(huì)增加其死亡風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重威脅患者的健康安全。在我國(guó)的癌癥防控規(guī)劃中，已將宮頸癌列為重點(diǎn)的防治對(duì)象之一，這也從側(cè)面反映出了大眾在預(yù)防宮頸癌方面開(kāi)始加強(qiáng)了重視。隨著各地區(qū)宮頸癌防治的宣傳工作不斷開(kāi)展，人們也提高了疾病預(yù)防的意識(shí)，在生活中也積極完善相關(guān)檢查和宮頸癌篩查，在一定程度上也保證了宮頸癌篩查工作的順利實(shí)施[4-5]。然而，在此基礎(chǔ)上，早期診斷的有效率也是我們應(yīng)當(dāng)關(guān)注的重點(diǎn)。隨著臨床檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，越來(lái)越多的檢測(cè)方法被應(yīng)用到宮頸癌病變的診斷中，以提高宮頸癌的早期診斷率，從而做到早發(fā)現(xiàn)、早治療[6]。為進(jìn)一步提高宮頸癌的早期診斷率，筆者在文中深入分析TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)在篩查宮頸癌病變中的效果及意義。

3.2 液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）

TCT的全稱為“新柏氏液基薄層細(xì)胞學(xué)”，被作為一種檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)中，主要包括制片細(xì)胞分布方式、保存細(xì)胞標(biāo)本方式以及細(xì)胞薄層制片效果等方面的內(nèi)容[7]。近年來(lái)，大量的研究證明了液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查的安全性和有效性，在宮頸細(xì)胞的檢測(cè)、分類(lèi)及診斷中起到了重要的作用。在臨床上，液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查也是一種較為先進(jìn)的檢測(cè)手段，與傳統(tǒng)的宮頸刮片巴氏涂片檢測(cè)技術(shù)相比，具有標(biāo)本處理滿意度高、宮頸檢出率高等優(yōu)點(diǎn)[8-9]。在傳統(tǒng)的宮頸刮片巴氏涂片檢測(cè)中，由于標(biāo)本中存在黏液、血液等其他細(xì)胞組織，從而會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差，從而影響臨床的診治。而液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查可以在一定程度上改善此類(lèi)缺陷，提高癌變細(xì)胞的檢出率，可以讓早期癌變的患者得到更為有效的治療[10]。

3.3 HPV基因分型檢測(cè)

HPV是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的病原體，在臨床檢測(cè)中，通過(guò)HPV基因分型檢測(cè)能夠進(jìn)一步了解患者的宮頸病變處于哪一類(lèi)型[11]。在基因分型中，主要包括兩種結(jié)果，一是低危型HPV感染，另一種則是高危型HPV感染[12]。在100種以上的HPV DNA中，其中存在30多種亞型HPV與宮頸癌的感染和病變存在密切關(guān)系，而低危、高危這兩種分型方式，也是根據(jù)其病理的大小來(lái)決定的[13]。由于在治療前后，機(jī)體內(nèi)HPV感染的型別情況會(huì)存在明顯差異，這就說(shuō)明了無(wú)論是在宮頸癌病變的篩查中，亦或是診療效果的評(píng)估中，HPV基因分型檢測(cè)的作用都十分顯著。

3.4 TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)

由于早期發(fā)現(xiàn)與治療干預(yù)，是防止宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵要點(diǎn)，因此我們需要不斷加強(qiáng)臨床宮頸癌病變的篩查力度，通過(guò)檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)化來(lái)提高宮頸病變組織的檢出率[14-15]。本研究結(jié)果顯示，TCT陽(yáng)性合并HPV感染者共202例，其中慢性宮頸炎陽(yáng)性率為62.38%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)陽(yáng)性率為13.86%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級(jí)陽(yáng)性率為12.87%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)陽(yáng)性率為5.94%、宮頸癌陽(yáng)性率為5%；在202例TCT陽(yáng)性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，陽(yáng)性率為32.67%，說(shuō)明HPV感染的亞型分類(lèi)與細(xì)胞學(xué)分級(jí)的結(jié)果相似，并且高危型患者的細(xì)胞分化功能更差，這與劉星布等 的報(bào)道結(jié)果基本一致。HPV低危型患者年齡多見(jiàn)于30歲以下，占比為57.35%；HPV高危型患者年齡多見(jiàn)于30歲以上，占比為86.36%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示HPV感染的亞型分型與患者的年齡因素有關(guān)，30歲以下的患者多為低危型，而30歲以上的患者多為高危型。因本研究樣本選取量較少，統(tǒng)計(jì)結(jié)果可能會(huì)存在一定的偏差，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。

綜上所述，TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)在宮頸癌病變的篩查中效果顯著，可以為臨床提供良好的數(shù)據(jù)支持，爭(zhēng)取早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療，達(dá)到降低宮頸癌發(fā)生的幾率，值得在臨床上推廣應(yīng)用。